Материал: Летние практики_ocred

контролемем..В эту чашку Петри налить чистую культуральнуую водуу. В чашки Петри налить по 20 мл готовыхрастворов.

4. Перенести по пять планарий с помощью пластиковых пипеток (или кисточки для красок) в каждую чашку Петри, начиная с кон- трольной и далее по градиенту увеличения концентрации вещества..

5. Сверху половину чашки Петри прикрыть бумагой и поставить под интенсивное освещение лампы дневного света. В течение 1| ч наблюдать двигательнуельную активность планарий, фиксируя их располо- жение в экспериментальном поле. Данные заносить в таблл. 2 через

каждые 15 мин.

Таблица 2

Количество планарийв разных экспериментальныхыхзонахах чашки Петт-

ри в контролеи ив воде, загрязненной кадмием в концентрации ___мг/л

6. Через 1 ч наблюдения переместить планарий с помощью пипетт- ки из чашки Петри на чистое предметное стекло в небольшую каплю воды, поставить на поддон со льдом для снижения подвижности жии- вотных и приступить к процедуре декапитации.

Оптимальным инструментом для операций на планариях являются глазные скальпели. Их следует регулярно точить на алмазном камне и править на кожаном ремне. Однако поскольку тело планарий покрыто эпителиемм, операции на них можно проводить любым стеклянныклянным или

металлическиким ножом, обломком лезвия безопасной бритвы и т.д..

20

Единственныенным требованием является достаточно маленькая (не более

2−-3 см) режущая поверхность скальпеля или ножа.

Операции на планариях проводят в нестерильных условиях и без применения специальных анестетиков. Планарии очень подвижны,,и практически невозможно полностью их обездвижить химическими

препаратами.. С другой стороны, помещение планарийв некий раствор для обездвижения неизбежно приведет к тому, что он попадет на ра-

невую поверхность после операции.. Это станет нежелательныльным арте- фактом, влияющим на регенерацию, и может особо негативно отра- зиться на ходе экспериментов с действием внешних химических сти-

муляторов морфогенеза.

Проверенным и эффективным естественныественным фактором торможения подвижности планарий является низкая температура [4]. Поэтому в

ряде случаев во время сложной операции (например, по удаленинию

глотки) животных помещаютна кусочек пищевого льда и далее через разрез на спинной поверхности тела проводят удаление глотки в тече- ние 1| −— 1,5 минут.

Перед операцией надо протереть спиртом операционную пластин- ку, шпатели, скальпели. При этом надо помнить, что спирт очень ток- сичен для планарий и следует оставить инструментыына воздухе, что- бы выветрились остатки спирта со стальных и стеклянных поверхно- стей. В ходе операции и во время экспериментов с регенерирующими животными нужно регулярно протирать все инструменты и операци- онную поверхность фильтровальной бумагой от слизи. Особо надо протирать приспособления для переноса планарий, на кончике кото- рых всегда налипает слизь и частицыгрязи из средыдля культивиро- вания, или регулярно менять одноразовые пластиковые пипетки. Для этого применяются маленькие бумажные тампоны, которые вставля- ются в кончик трубки пинцетомм.

7. Декапитацицию проводить под микроскопом МБС--10 (бинокуляр- ная лупаа) с увеличением не более х2. Одним движением скальпеля

сделать аккуратнытный срез в районе «глаз» планарийй.. После этого жии-

вотных поместить в исследуемые растворы кадмия на четыре -– пять

дней для наблюдения за их регенерационной активностью..В этот пе-

21

зрения бинокуляра в чашках Петри диаметром 15 см или на предметт- ное стекло в каплю воды.

Для освещения контуров тела планарии применяют косое освещее-

ние снизу. Для этого перед началом регистрации следует подобрать угол наклона зеркала бинокуляра для получения наиболее подходящее-

го изображения животного. Следует добиться положения осветитель- ного прибора, при котором на темном фоне чашки Петри хорошо освещеныконтурыытела планарии.

После нескольких секунд адаптации планария начинает равномерр- но и прямолинейно перемещаться (скользить) по дну чашки Петри.. Оператор направляет животное к месту регистрации видеокамерой, медленно поворачивая чашку Петри с планарией. После тогоо, как жии- вотное появляется в поле зрения микроскопа, начинается ее видеорее- гистрация при нажатии компьютерной мышкой кнопки «Старт» на интерфейсе видеограббера.

В результате получается небольшой видеофильм (8 −— 20 кадров), записаннанный в оперативной памяти видеограббера DigitEyeП1еиЕуе--15.. После этого оператор выбирает оптимальный кадр и сохраняет его на жестт- ком диске компьютера нажатием кнопки «Сохранить кадр» на интер- фейсе видеограббера. При необходимости запись повторяется до по- лучения изображения требуемого качества.

9. Провести анализ изображения контрольных и интактных планаа- рий с помощью компьютерной программы..Дляля этого работу начатьс открытия файла с изображением планарии. Это происходит путем нажатия кнопки «Файл»». При этом изображение планарии выводится на экран интерфейса. Затем начинается обработка изображения. Внаа- чале нажимается кнопка «Автоматическогичо анализа изображения»». Затем стрелка компьютерной «мышки» помещается на край изобра- жения планарии и нажимается левая кнопка мыши.. Часто при автомаа- тическом оконтуривании объекта программа обрисовывает его с ви- димыми ошибками. Оператор исправляет ошибки программынажатии- ем кнопки и отсекает ненужные части в «ручном» режиме. Следую- щая кнопка предназначена для отделения старых и новыхчастей тела

23