Автореферат: Кариопатические и патоморфологические изменения под действием продуктов метаболизма паразитов и влияние на репродуктивную функцию домашних плотоядных

Оценка действия личинок анизакид при пероральном введении самцам крыс на гематологические показатели и гистологическую картину

Патоморфологическое действие соматических продуктов личинок анизакид изучали на 60 самцах нелинейных лабораторных крыс, массой 120 - 150г. Подопытных животных распределяли на несколько групп по принципу аналогов. Животным опытных групп перорально инокулировали нежизнеспособных личинок анизакид в дозах 5; 10; 25; 50 и 100 штук на голову, соответственно. Шестая группа служила интактным контролем.

Для определения динамики изменения клеточного иммунного ответа на 3; 5 и 10 сутки проводили исследование периферической крови для подсчета лейкограммы. Кровь для анализа брали из когтя, готовили тонкие мазки, которые фиксировали по Май-Грюнвальду и окрашивали по Романовскому.

Инвазированную рыбу делили на три группы в зависимости от индекса зараженности (интенсивности инвазии - ИИ). Рыбу, инвазированную менее чем 10 личинками (партия 1), 10-50 личинками (партия 2) и рыбу, инвазированную более 50 личинками (партия 3) измельчали на мясорубке до состояния однородного фарша. Опытным группам животных в течение 10 дней скармливали рыбный фарш, подогретый до комнатной температуры, животные контрольной группы находились на обычном рационе.

На десятые сутки крыс декапитировали под эфирным наркозом. Семенники, печень, селезенку, желудок и участок тонкого кишечника фиксировали 10%-ным нейтральным формалином для гистологического исследования. В эти же сроки отбирали кровь из сердца для проведения биохимического анализа по основным показателям: общий белок, глюкоза, мочевина, креатинин, альфа-амилаза, общий билирубин, АлАТ, АсАТ и щелочная фосфатаза.

Оценка действия термически обработанной рыбы на гематологические показатели и гистологическую картину при пероральном введении самцам крыс

Мясо инвазированной анизакидами путассу обрабатывали кипячением (варкой) при температуре 100^°С в течение 20 минут, другую партию рыбы обрабатывали в бытовой микроволновой СВЧ-печи в течении 10 минут. Полученные продукты скармливали крысам самцам 10 дней с проведением гематологического, биохимического анализа крови и гистологического исследования тонкого кишечника, печени, селезенки, семенников. Также готовили мазки-отпечатки красного костного мозга грудины и семенников по описанной выше методике для определения уровня кариопатических изменений в данных органах, вызванных термически обработанной рыбой.

Получение гипериммунных сывороток к антигенам анизакид

Гипериммунную сыворотку получали при введении трем кроликам соматического антигена, приготовленного из личинок A.simplex. Кроликов породы серый великан живой массой 3 кг внутримышечно иммунизировали возрастающими дозами соматического антигена с полным адъювантом Фрейнда (Диаэм, США) по методике Бережко В.К. и др. (2008) по схеме три цикла трехдневной иммунизации с трехдневными перерывами. Затем через 28 дней проводили реиммунизацию для повышения активности гипериммунных сывороток. Общая доза антигена по белку составила 10,0 мг. Кровь для исследования собирали из локтевой вены через семь дней после завершения иммунизации.

Реакция иммунодиффузии гипериммунных сывороток с антигенами анизакид и экстрактом из мышечной ткани рыбы

Реакцию иммунодиффузии (РИД) проводили в 1,2%-ном агаровом геле (Difco) на физиологическом растворе (Гусев А.И., Цветков В.С., 1961). Реакцию проводили в штампе «семерка», где в центральную лунку вносили экстракт из анизакид, а в периферийные - гипериммунные сыворотки в нативном состоянии, а также в разведениях 1/1; 1/2; 1/4 и 1/8.

Также проводили РИД с сыворотками крови гипериммунизированных кроликов и термически обработанными антигенами A.simplex.

Для выявления возможных соматических и экскреторно-секреторных антигенов личинок анизакид в мышечной ткани замороженной рыбы проводили РИД, где в качестве антигена использовали экстракт из рыбы.

Статистическая обработка результатов

Фактический материал, полученный при проведении исследований, обрабатывали методом вариационной статистики. Показатели считались достоверными при значениях p?0,05 (по t-критерию Стьюдента).

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Анализ зараженности плотоядных гельминтами и простейшими

В настоящее время в г. Перми содержится несколько тысяч домашних собак и кошек, имеется и большое количество бездомных животных. Результаты паразитологического обследования представлены в таблицах 1 и 2.

В период нашей работы было обследовано 228 служебных собак. Из них 125 собак принадлежали питомнику Зонального кинологического центра при ГУВД г. Перми, 85 собак - колониям общего режима и 18 собак - питомнику при Пермском колледже юстиции. Все собаки содержатся в обустроенных вольерах, кормление осуществляется два раза в день специально приготовленными или промышленными кормами Royal Canin, профилактическая дегельминтизация проводится согласно планам 2-3 раза в год отечественными препаратами. При клиническом осмотре у большинства собак не выявляли серьезных нарушений в состоянии здоровья.

Содержание животных, принадлежащих частным лицам, отличается значительным разнообразием. Большинство владельцев предпочитает использовать для кормления своих питомцев натуральные продукты. При этом мясо и рыбу зачастую скармливают в сыром виде.

Таблица 1. Виды гельминтов и простейших, выявленные у собак

Дегельминтизации домашних собак и кошек проводятся нерегулярно, в основном, перед вакцинацией, выставкой или перед транспортировкой за пределы Пермского края. С этой целью используются самые разнообразные препараты. Обработки против простейших производятся изредка, только в случае установления соответствующего диагноза при проведении копрологических исследований.

В муниципальном приюте находятся в основном беспородные животные, многие из которых ранее относились к безнадзорным. Собаки содержатся в групповых вольерах или клетках. Кормление проводится дважды в сутки натуральными продуктами. Дегельминтизации подвергают всех вновь поступивших животных. Препараты против простейших не назначают.

Таблица 2. Виды гельминтов и простейших, обнаруженные у кошек

На территории г. Перми собаки инвазированы гельминтами и простейшими на 31,66%, кошки - на 36,47%. Данный уровень экстенсивности инвазии сопоставим с аналогичным показателем, установленным в других городах Российской Федерации. Превалирующими инвазиями являются те, при которых цикл развития происходит без участия промежуточных хозяев, т.е. фекально-оральным путем. К ним относятся нематодозы (токсокароз, анкилостомоз и унцинариоз) и протозоозы (изоспорозы, бластоцистоз кошек, реже криптоспоридиозы). Основным источником инвазии служат безнадзорные животные, что подтверждается результатами обследования поголовья содержащихся в приюте кошек и собак.

На состав паразитофауны домашних плотоядных животных в значительной мере влияет тип кормления. Домашние животные по сравнению с другими группами наиболее инвазированы описторхами, саркоцистами, так как данные инвазии передаются при скармливании, термически необработанной рыбы и мяса, которые часто используют для кормления кошек и собак.

Что касается социально опасных гельминтозов, таких как трихинеллез, то степень инвазированности домашних плотоядных животных ничтожно мала. Так, ЭИ трихинеллезом у кошек по нашим данным составила 0,7%, у собак данную инвазию не выявили. Единственная зараженная Т.spiralis кошка была доставлена из сельской местности. Таким образом, в городской популяции плотоядных животных трихинеллезная инвазия отсутствует или имеет весьма незначительное распространение, тогда как в природе сохраняются очаги, в которые могут вовлекаться домашние кошки и собаки, имеющие возможность охотиться, в первую очередь на мелких грызунов.

Серологический анализ показал, что антитела к L.intestinalis имеются в сыворотке 15,0% служебных и 26,67% домашних собак, тогда как у собак из муниципального приюта был получен отрицательный результат. Обнаружение иммуноглобулинов класса IgG может являться следствием уже перенесенной инвазии. Такой высокий уровень серопозитивных собак при незначительной доле положительных результатов копрологического исследования нельзя объяснить только появлением ложноположительных реакций, так как в группе животных из приюта, наиболее инвазированных кишечными простейшими, положительные реакции вообще отсутствовали.

Распространение лямблиоза среди собак, по всей видимости, невелико и напрямую зависит от степени контакта с человеком. По нашему мнению, бездомные животные в городской популяции могут инвазироваться лямблиями лишь случайно и большой роли в распространении возбудителя не играют. Домашние собаки, напротив, находясь в непосредственной близости к человеку, могут становиться резервуаром L.intestinalis, выделяя возбудителя в виде цист. В целом же, собаки эпидемиологического значения в распространении лямблиоза человека, по всей видимости, не имеют.