Статья: Иксодовые клещи как переносчики возбудителей природно-очаговых заболеваний в эпидемический сезон 2017 г. на территории Приморского края

Иксодовые клещи как переносчики возбудителей природно-очаговых заболеваний в эпидемический сезон 2017 г. на территории Приморского края

М.В. Берлизова1, В.А. Лубова1, А.В. Курловская2, Г.Н. Леонова1

1Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова, Владивосток

2Дальневосточный Федеральный университет, Владивосток

На территории Приморского края функционируют природные очаги клещевого энцефалита (КЭ) и иксодовых клещевых боррелиозов (ИКБ), а также регистрируются случаи выявления моноцитарного эрлихиоза человека (МЭЧ) и гранулоцитарного анаплазмоза человека (ГАЧ). Все это указывает на необходимость ежегодного мониторинга эпидемической обстановки в отношении трансмиссивных клещевых инфекций. Целью исследования была оценка зараженности возбудителями трансмиссивных клещевых инфекций иксодовых клещей, снятых с людей на различных административных территориях Приморского края в эпидемический сезон 2017 г. Проанализировано 1035 экземпляров иксодовых клещей, снятых с пострадавших от укусов клещей людей на территории Приморского края. Методом иммуноферментного анализа (ИФА) было исследовано 808 экз. иксодовых клещей. Методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) - 372 экз. Показана наибольшая эпидемиологическая значимость клещей вида Ixodes persulcatus, доля которых составила 91,9%. По итогам исследования, 13,3% клещей оказались зараженными различными возбудителями. Выявлены инфекционные агенты: Borrelia burgdorferi sensu lato в 99 экз. клещей (26,6%), Anaplasma phagocytophilum в 15 экз. (4%), Ehrlichia muris / Ehrlichia сhaffeensis в 6 экз. (1,6%), вирус клещевого энцефалита (КЭ) в 4 экз. клещей (1,1%). Антиген вируса КЭ обнаружен в 24 экз. клещей (3%). Верифицированы случаи микст-инфицирования клещей, чаще выявлялись комбинации ИКБ + ГАЧ, реже - ИКБ + МЭЧ. Проанализирован материал с 31 административного района Приморского края. Наибольшее число обращений приходилось на Владивостокский ГО и Надеждинский район. Возбудители клещевых инфекций обнаружены на всех территориях Приморья, при этом уровень инфицированности клещей варьировался в зависимости от района. Проведенный анализ указывает на необходимость ежегодного мониторинга эпидемической обстановки в отношении трансмиссивных клещевых инфекций на территории Приморского края.

Ключевые слова: трансмиссивные клещевые инфекции, иксодовые клещи, Приморский край.

Natural foci of tick-borne encephalitis (TBE) and ixodid tick-borne borreliosis (ICB) function in the territory of the Primorye Region, and cases of detection of monocytic human ehrlichiosis (MEC) and granulocyte human anaplasmosis (GAC) are recorded. All this indicates the need for annual monitoring of the epidemic situation with regard to vector-borne tick infections. The aim of the study was to assess the infectiousness of pathogenic tick-borne infections of ixodid mites, taken from people in various administrative territories of the Primorsky Region in the epidemic season of 2017, by pathogens. 1035 specimens of ixodid ticks taken from people who have suffered from tick bites in the Primorsky Region were analyzed. Using the enzyme immunoassay (ELISA), 808 specimens were examined. Ixodes ticks. The method of polymerase chain reaction in real time (PCR-RV) - 372 copies. The greatest epidemiological significance of ticks of the species Ixodes persulcatus is shown, their share being 91.9%. According to the results of the study, 13.3% of ticks were infected with various pathogens. Infectious agents have been identified: Borrelia burgdorferi sensu lato in 99 specimen's ticks (26.6%), Anaplasma phagocytophilum in 15 specimens. (4%), Ehrlichia muris / Ehrlichia chaffeensis in 6 specimens. (1.6%), tick-borne encephalitis virus (TBE) in 4 specimens. ticks (1.1%). The antigen of the CE virus was detected in 24 specimens ticks (3%). The cases of mixed infection of mites were verified, combinations of ICB + GAC were more often detected, and ICB + MECs were less frequent. The material from 31 administrative districts of Primorsky Region has been analyzed. The greatest number of appeals accounted for Vladivostok GO and Nadezhdinsky district. Pathogens of tick-borne infections were found in all territories of Primorye, while the level of infection of mites varied depending on the area. The analysis indicates the need for annual monitoring of the epidemic situation with regard to vector-borne tick-borne infections in Primorsky Region.

Keywords: transmissible tick-borne infections, ixodid mites, Primorsky Region.

Введение

Во многих регионах Российской Федерации актуальной проблемой для науки и практического здравоохранения являются природно-очаговые трансмиссивные инфекции, переносимые иксодовыми клещами [4, 10]. По официальным данным, в 2017 г. в медицинские организации страны по поводу присасывания клещей обратились более 498 тысяч человек [16]. Известно, что с иксодовыми клещами связано существование и передача человеку целого ряда возбудителей заболеваний вирусной, бактериальной и протозойной природы [10]. При этом в последние десятилетия отмечается не только увеличение количества эндемичных территорий, но и расширение спектра микроорганизмов, которые передаются иксодовыми клещами, вызывая не только моно- , но и микст-формы клещевых инфекций [7, 9, 19].

Приморский край является эндемичным регионом относительно разных трансмиссивных клещевых инфекций [1, 3, 14]. Благодаря оптимальным природно-экологическим условиям на территории края поддерживается высокая численность переносчиков и их прокормителей, что создает возможность для циркуляции возбудителей и способствует формированию и функционированию известных и широко распространенных природных очагов клещевого энцефалита (КЭ) и иксодовых клещевых боррелиозов (ИКБ) [8, 11]. В настоящее время эпидемиологическая ситуация по клещевому энцефалиту в Приморском крае расценивается как относительно благополучная, в то время как заболеваемость иксодовыми клещевыми боррелиозами и клещевыми риккетсиозами ежегодно превышает среднероссийские показатели [2, 5, 15]. Помимо этих возбудителей, в последние годы на территории Приморья доказана инфицированность иксодовых клещей моноцитарным эрлихиозом человека (МЭЧ) и гранулоцитарным анаплазмозом человека (ГАЧ) [5, 13]. Кроме того, в 2015 г. впервые были верифицированы случаи заболевания, вызванного Borrelia miyamotoi ? патогеном, ранее не встречавшимся на юге Дальнего Востока России [12].

Для естественных и антропогенно-преобразованных биоценозов территорий Приморского края установлено распространение шести массовых видов иксодовых клещей семейства Ixodidae, относящихся к трем родам: Ixodes (I. persulcatus, I. pavlovskyi), Haemaphysalis (H. japonica, H. concinna, Н. longicornis) и Dermacentor (D. silvarum) [11]. Наиболее значимым в эпидемиологическом отношении является доминирующий на территории края таежный клещ (I. рersulcatus) - основной переносчик возбудителей клещевых инфекций [6]. Преимущественно встреча людей с этими членистоногими происходит в естественных биотопах обитания иксодовых клещей, а также в антропургических очагах, включая городские территории, пригородные зоны, дачные участки, места массового отдыха и сбора дикоросов. Ежегодно в Приморском крае регистрируются около 7 тыс. случаев присасывания клещей, при этом география обращаемости по поводу укусов и выявления патогенов охватывает большинство районов Приморья [14, 17]. Все это указывает на необходимость ежегодного мониторинга эпидемической обстановки в отношении трансмиссивных клещевых инфекций.

Цель исследования: оценить зараженность возбудителями трансмиссивных клещевых инфекций иксодовых клещей, снятых с людей на различных административных территориях Приморского края в эпидемический сезон 2017 г.

Материалы и методы

клещевой энцефалит эпидемический очаговый

Иксодовые клещи. В ходе проведенной работы в эпидемический сезон 2017 г. нами было исследовано 1035 экземпляров иксодовых клещей, снятых с пострадавших от укусов клещей людей на 31 административной территории Приморского края. Исследование было проведено на базе Лаборатории флавивирусных инфекций (ЛФВИ) «НИИЭМ им. Г.П. Сомова» (г. Владивосток).

Иммуноферментный анализ (ИФА). Выявление антигена вируса КЭ в гомогенатах клещей проводилось методом ИФА с использованием набора «ВектоВКЭ-антиген» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск) по инструкции производителя тест-системы. Методом ИФА было исследовано 808 экз. иксодовых клещей.

Обратная транскрипция (ОТ) с последующей ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ). Материал исследовали на наличие ДНК/РНК вируса клещевого энцефалита (КЭ), Borrelia burgdorferi sensu lato, Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia muris/Ehrlichia сhaffeensis методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) с использованием набора «АмплиСенс TBEV, B. burgdorferi s.l., A. phagocytophilum, E. chaffeensis / E. muris-FL» (ЦНИИ эпидемиологии, Москва) согласно инструкции производителя на амплификаторе с флуорисцентной детекцией «ROTOR-GENE Q» (QIAGEN, Германия). По итогам ОТ-ПЦР-РВ, полуколичественная оценка результатов по выявлению генетических маркеров возбудителей была проведена на основе полученных значений величин пороговых циклов (Ct). Методом ОТ-ПЦР-РВ было исследовано 372 экз. иксодовых клещей.

По разности параметров оценивали средние и относительные величины, полученные для разных групп сравнения. Полученные данные представлены в виде средней ± ошибки среднего (X ± m). Достоверность различия средних величин из разных генеральных выборок оценивали на основе параметрического критерия Стьюдента (t) и непараметрического критерия Манна-Уитни. Достоверность разности полученных значений, полученных при выборочных исследованиях, интерполировали на соответствующие генеральные совокупности. Достоверными считали доверительные границы р = 95% и более.

Результаты и обсуждение

По итогам изучения инфицированности клещей нами было установлено, что 13,3% из 1035 исследованных экземпляров оказались зараженными различными возбудителями. В результате анализа методом ОТ-ПЦР-РВ вирус КЭ в клещах был выявлен в 4 случаях (1,1%), ИКБ в 99 случаях (26,6%), МЭЧ - 6 случаев (1,6%), ГАЧ - 15 случаев (4%). Методом ИФА антиген вируса КЭ был выявлен в 24 случаях (3%) (табл. 1). Среди инфицированных клещей в 6,6% случаев были выявлены сочетанные формы клещевых инфекций. Во всех исследованных микст-формах идентифицированы боррелии группы B. burgdorferi s.l., что обусловлено высокой частотой встречаемости данного возбудителя в популяции иксодовых клещей в Приморском крае. В большинстве случаев установлены комбинации B. burgdorferi s.l. + A. phagocytophilum, реже ? B. burgdorferi s.l. + E. chaffeensis / E. muris.

Сезонная активность и зараженность иксодовых клещей.

Для инфекций, передаваемых иксодовыми клещами, характерна выраженная весенне-летняя сезонность. В 2017 г. первое обращение в связи с укусом клеща зарегистрировано 22 марта, последнее - 30 октября. Продолжительность эпидемического сезона составила 28 недель. Наибольшее количество обращений приходилось на май - 309 случаев (38,2%) и июнь - 242 случая (29,9%), наименьшее на март - 3 случая (0,4%).

Наибольшее число случаев выявления антигена ВКЭ методом ИФА было зафиксировано в мае - 14 случаев (4,5%). На остальные месяцы приходилось значительно меньшее количество случаев: в апреле - 4 (5,6%), в июне - 3 (1,2%), в июле - 2 (2%), в августе - 1 случай (2,2%). При исследовании клещей методом ОТ-ПЦР-РВ генетические маркеры вируса КЭ были выявлены в 2 экз. клещей в июне (1,4%), а также по 1 случаю зафиксировано в мае и апреле, что составило 1,1% и 3,2%, соответственно. Генетические маркеры ИКБ были идентифицированы в 48 случаях в июне (34,8%), в 21 случае в мае (23,9%), и в одном случае в сентябре (7,7%). ДНК ГАЧ и МЭЧ в 2017 г. была выявлено в 15 экз. (4%) и 6 экз. клещей (1,6%), соответственно. При этом, чаще всего возбудители МЭЧ выявлялись в июне 3 случая (2,2%), а генетический материал возбудителей ГАЧ в мае - 4 случая (4,5%) и в июле - 5 случаев (7,6%) (табл. 1).

Таблица 1. Сезонное распределение случаев обращения лиц, пострадавших от укуса клеща, и выявление возбудителей в снятых клещах методами ИФА и ОТ-ПЦР-РВ в 2017 г.

Обращаемость по поводу присасывания клещей среди различных половозрастных групп.

Укусам клещей подвергались все возрастные группы населения. Анализ показал, что максимальное количество обращений отмечено среди лиц старше 60 лет - 193 случая (22,5%), минимальное - в группе 15-19 лет - 16 случаев (1,9%). Из таблицы 2 следует, что количество обращений в связи с укусом клеща возрастает, начиная с группы 30-39 лет и старше. Такое распределение может быть связано с тем, что лица среднего и пожилого возраста чаще посещают природные очаги в связи с работой на садово-огородных участках, профессиональной трудовой деятельностью, сбором дикоросов и отдыхом в лесных зонах. Тогда как подростки и дети, в силу современного образа жизни, занятые в учебных заведениях и проводящие свой отдых в городской среде, менее подвержены риску встречи с иксодовыми клещами.

Мужчины, по сравнению с женщинами, достоверно чаще подвергались укусам клещей. Зафиксировано 485 случаев обращения мужчин (56,5±4,7%) против 373 случаев укуса у женщин (43,5±4,7%), при P?0,05. При этом, среди пострадавших мужчин преобладали представители группы трудоспособного возраста (30-39 лет) - 106 случаев (71,1%), а среди женщин самой многочисленной оказалась группа старше 60 лет - 104 случая (53,9%) (табл. 2).

Таблица 2. Обращаемость людей в связи с присасыванием клеща среди различных половозрастных групп в 2017 г.

Оценка встречаемости и зараженности иксодовых клещей разных видов.

В 91,9% случаев население подвергалось укусам клещей вида I. persulcatus, случаи присасывания клещей родов Dermacentor и Haemaphysalis зафиксированы в 3,5% и 4,6% случаев, соответственно. При исследовании методом ИФА антиген вируса КЭ у вида I. persulcatus был выявлен в 21 случае (2,4%), у клещей Dermacentor spp. - в 2 случаях (6,1%), у Haemaphysalis spp. - в 1 (2,3%). При исследовании методом ОТ-ПЦР-РВ генетические маркеры ВКЭ, МЭЧ и ГАЧ выявлены только в клещах I. persulcatus - 4 случая (1,2%), 6 случаев (1,9%) и 15 случаев (4,7%), соответственно. Зараженность боррелиями клещей I. persulcatus составила 30,2% (97 случаев). У клещей Haemaphysalis spp ДНК B. burgdorferi s.l. выявлены в 2 случаях. В клещах рода Dermacentor боррелии обнаружены не были. Полученные данные говорят о том, что доминирующий на территории Приморского края вид клеща I. persulcatus наиболее агрессивен по отношению к человеку по сравнению с другими видами, и является основным переносчиком разных инфекций, передаваемых иксодовыми клещами.