Материал: Грамположительные аэробные Кокки

• Цитохромоксидаза

•

Синтез ДНКазы характерен для золотистого стафилококка. ДНКаза катализирует расщепление ДНК. Для ее выявления используют агар, содержащий водный раствор ДНК и раствор кальция хлорида. После выращивания культуры на чашку наносят раствор соляной кислоты. Положительная реакция проявляется прозрачной зоной деполимеризованной ДНК вокруг колоний на мутном фоне, образованном в результате взаимодействия ДНК с соляной кислотой (рисунок 15).

а б Рисунок 15 – Выявление ДНКазы стафилококков: а – положительная реакция, б –

отрицательная реакция. Стрелкой показана зона деполимеризованной ДНК.

Сапрофитный и эпидермальный стафилококки продуцируют уреазу, которая расщепляет мочевину до аммония, подщелачивает мочу и способствует образованию камней. Для определения уреазы культуру высевают в бульон с мочевиной. Изменение окраски среды на розовый свидетельствует о присутствии уреазы (рисунок 16).

12

Рисунок 16 – Тест на уреазу. Стрелкой показана положительная проба.

В таблице 1.2 представлены дифференциальные признаки основных видов стафилококков, имеющих медицинское значение.

Таблица 2 – Дифференциальные признаки основных видов стафилококков

13

Примечание: “+” - признак выражен; “+/-“ - признак наблюдается непостоянно; “-“ - признак отсутствует; “?” – признак сомнительный.

Антигенными свойствами обладают пептидогликан, тейхоевые кислоты, белок А клеточной стенки, капсула стафилококков. Видоспецифическими антигенами для стафилококков являются тейхоевые кислоты: для S. aureus – рибитолтейхоевые, для S. epidermidis – глицеринтейхоевые, для S. saprophyticus – оба типа тейхоевых кислот.

Резистентность стафилококков. Во внешней среде стафилококки достаточно устойчивы. В пыли они сохраняются до 100 суток, в гное – до 200 суток. Прямой солнечный свет убивает их за 10-12 часов. При температуре 70-80ОС стафилококки погибают через 20-30 минут, при 150ОС – через 10 минут.

Стафилококки устойчивы к высоким концентрациям хлорида натрия (растут на средах в присутствии 10-15% хлорида натрия). Галофильность стафилококков способствует тому, что соленые пищевые продукты и концентраты могут быть контаминированы золотистым стафилококком, способным вызывать пищевые отравления.

К большинству дезинфектантов стафилококки чувствительны. Они также чувствительны к анилиновым красителям (фуксину, кристаллическому фиолетовому, бриллиантовому зеленому) и йоду, что позволяет использовать эти препараты местно для лечения стафилококковых пиодермий. Фуксин и бриллиантовый зеленый входят также в состав селективных сред для выделения энтеробактерий (среды Эндо, Плоскирева) в качестве факторов, подавляющих рост грамположительных бактерий, в том числе стафилококков.

Стафилококки не обладают природной устойчивостью к антибиотикам. Однако в настоящее время широкое распространение получили штаммы стафилококков, обладающие множественной устойчивостью к антибиотикам (β- лактамам, эритромицину, тетрациклинам, хлорамфениколу и др.). Устойчивость к антибиотикам чаще всего детерминируется генами, расположенными на бактериальной хромосоме (результат мутаций) или R-плазмидах (результат генетического переноса). Особое внимание уделяется метициллин-резистентным стафилококкам (MRS-штаммам), регистрируемым как при внутрибольничных вспышках, так и при внебольничных инфекциях. Среди метициллин-резистентных стафилококков чаще всего выявляются штаммы золотистого (MRSA) и эпидермального (MRSE) стафилококков. Резистентность стафилококков к β- лактамным антибиотикам обусловлена присутствием mec А гена, который кодирует пенициллин-связывающий белок (ПСБ) 2а. Ген mec А располагается на мобильном генетическом элементе (стафилококковой хромосомной кассете – SCCmec). Расположение некоторых генов на хромосоме уникального штамма (устойчивого к антибиотикам) и хромосоме чувствительных штаммов золотистого стафилококка представлено на рисунке 17.

14

SCC элемент Интегрированная плазмида Профаг Транспозон

Генетические острова уникального штамма Генетические острова других штаммов

Рисунок 17 – Хромосомные карты разных штаммов золотистого стафилококка.

Метициллин-резистентный золотистый стафилококк устойчив ко всем β- лактамным антибиотикам (пенициллинам, цефалоспоринам, монобактамам, карбапенемам). По микробиологическим и эпидемиологическим признакам различают внутрибольничные (нозокомиальные) и внебольничные MRSA. Нозокомиальный метициллин-резистентный S. aureus (healthcare-associated MRSA – HA-MRSA) выделяется от пациентов отделений интенсивной терапии. Внебольничный метициллин-резистентный S. aureus (community-associated MRSAS

– CA-MRSA) распространен за пределами лечебных учреждений. Особенностью внебольничных штаммов MRSA является наличие гена, детерминирующего синтез лейкоцидина Пантона-Валентина.

Факторы патогенности стафилококков. В настоящее время у стафилококков выявлено большое количество факторов, участвующих в проявлении патогенных свойств возбудителя. Среди факторов патогенности стафилококков выделяют как структурные компоненты клеток (капсула, белки клеточной стенки), так и секретируемые субстанции (экзотоксины, экзоферменты). Каждый фактор патогенности выполняет специфическую функцию. Разные виды стафилококков обладают разным набором факторов патогенности. Основные факторы патогенности стафилококков представлены в таблице 3 и на рисунке 18.

Таблица 3 – Факторы патогенности стафилококков

1. Факторы клеточной поверхности

1.1. Микробные поверхностные компоненты, распознающие адгезивные матриксные молекулы (MSCRAMM)

Стафилококковый протеин А (SpA) Связывание с IgG, препятствие опсонизации и фагоцитозу

15