1) регуляторов генной активности;
2) защитного механизма от точковых мутаций;
3) хранение и передача наследственной информации;
Цистрон -- наименьшая единица генетической экспрессии. Некоторые ферменты и белки состоят из нескольких неидентичных субъединиц. Таким образом, известная формула «один ген -- один фермент» не является абсолютно строгой. Цистрон -- это минимальная экспрессируемая генетическая единица, кодирующая одну субъединицу белковой молекулы. Поэтому вышеупомянутую формулу можно перефразировать как «один цистрон -- одна субъединица".
Строение мозаичного гена
В конце 70-х годов было выяснено, что у эукариот имеются гены, которые содержат «лишнюю» ДНК, не представленную в молекуле мРНК. Они получили название мозаичных, прерывистых генов; генов, имеющих экзон-интронное строение.
1.Мозаичные гены эукариот имеют больший размер, чем последовательность нуклеотидов, представленная в мРНК (3-5%).
2.Мозаичные гены состоят из экзонов и интронов. Интроны удаляются из первичного транскрипта и отсутствуют в зрелой мРНК, которая состоит только из экзонов. Число и размеры интронов и экзонов индивидуальны для каждого гена, но интроны по размерам значительно больше экзонов.
3.Ген начинается экзоном и заканчивается экзоном, но внутри гена может быть любой набор интронов (гены глобина имеют 3 экзона и 2 интрона) (рис. 20). Экзоны и интроны обозначаются цифрами или буквами в порядке их расположения вдоль гена.).
4. Порядок расположения экзонов в гене совпадает с их расположением в мРНК.
5.На границе экзон-интрон имеется определённая постоянная последовательность нуклеотидов (ГТ - АГ), присутствующая во всех мозаичных генах.
6. Экзон одного гена может быть интроном другого.
7. В мозаичном гене иногда нет однозначного соответствия между геном и кодируемым им белком, то есть одна и та же последовательность ДНК может принимать участие в синтезе различных вариантов белка.
8. Один и тот же транскрипт (про-мРНК) может подвергаться разному сплайсированию, в результате этого сплайсированные участки мРНК могут кодировать разные варианты одного белка.
9. Особенности строения мозаичного гена позволяют осуществлять альтернативный сплайсинг (экзон L - экзон 2,3 или экзон S - экзон 2,3): синтезировать несколько вариантов белка на основе информации одного гена; создавать удачные комбинации белков, а если таковые неудачны, то производить отбор на уровне мРНК при сохранении неизменной ДНК (рис. 21).
В этом проявляется принцип экономного использования генетической информации, т.к. у млекопитающих в процессе транскрипции участвуют приблизительно 5-10% генов.
Предположение о связи между генами и ферментами впервые высказал, хотя и без употребления этих слов, английский врач Арчибальд Гаррод в 1908 г. Гаррод постулировал, что некоторые "врожденные ошибки метаболизма" - результат неспособности тела вырабатывать определенные химические вещества, что в свою очередь обусловлено наследственными механизмами. Прошло почти 40 лет, прежде чем первые работы по молекулярной генетике подтвердили эту гипотезу и во всей полноте продемонстрировали ее значение.
Исследования в области молекулярной генетики начались с выявления различных веществ и ферментов, участвующих в метаболических процессах. Некоторые нарушения метаболизма связаны с дефектами, которые наследуются так, как если бы они определялись единичными генами. Эти нарушения возникают спонтанно, как в случае мутаций, или же передаются по наследству в соответствии с обычными законами генетики. Рассмотрим, например, обмен аминокислот фенилаланина и тирозина; обычно они используются для синтеза клеточных белков и других веществ, выполняющих структурные и физиологические функции, а их избыток распадается с образованием СО2, воды и азотистых отходов метаболизма. Во всех случаях судьбу этих аминокислот определяет простой метаболический путь, в котором участвует несколько ферментов. Дефектный фермент или отсутствие фермента в одной из четырех точек на этом пути приводит к таким нарушениям метаболизма, как фенилкетонурия, кретинизм, альбинизм и алкаптонурия. Характер наследования этих четырех заболеваний указывает на то, что каждое из них контролируется каким-то одним рецессивным геном.
Дальнейшие важные данные в пользу гипотезы "один ген - один фермент" были получены в работах Бидла и Татума, начатых в 1941 г. и посвященных механизмам наследования ферментов у розовой хлебной плесени (Neurospora crassa). Подобно Менделю и Моргану, эти авторы очень тщательно выбирали объект для своих экспериментов. Нейроспора - сумчатый гриб (аскомицет), обладающий следующими ценными для генетика качествами:
1) его легко выращивать;
2) его можно получать в больших количествах;
3) у него короткое время генерации (10 дней);
4) вегетативная стадия гаплоидная.
Последняя особенность очень важна. Поскольку на протяжении большей части жизненного цикла клетки этой плесени содержат только один набор хромосом, проявление рецессивных генов не маскируется доминантными аллелями. Если в результате мутации возникает рецессивный ген, то его действие сказывается немедленно. Нейроспора обычно образует бесполые споры (конидии), которые прорастают и дают начало мицелию. Кусочки мицелиев, принадлежащих к двум противоположным типам скрещиваемости, могут сливаться, образуя диплоидную зиготу. Эта зигота тотчас же проходит мейотическое деление, за которым следует одно митотическое деление, и образуется сумка (аск) - плодовое тело, содержащее восемь гаплоидных аскоспор; четыре из них происходят от одного из родительских штаммов, а четыре - от другого. Каждая аскоспора, прорастая, дает начало новому мицелию. Таким образом, мицелий может происходить либо от конидии, возникшей бесполым путем, либо от аскоспоры, образовавшейся половым путем
Нейроспора способна расти на культуральной среде, содержащей только агар, сахара, соли и витамин биотин. Такую среду называют минимальной. Если нейроспора может расти на ней, то это означает, что она способна синтезировать все необходимые для роста углеводы, жиры, аминокислоты и витамины с помощью ферментов, вырабатываемых собственными клетками.
Эксперименты Бидла и Татума состояли в следующем.
1. Конидии подвергали рентгеновскому облучению, чтобы повысить частоту мутаций.
2. Облученные конидии переносили на полную среду (содержащую все аминокислоты и витамины, необходимые для нормального роста) и выращивали на ней.
3. Образовавшиеся мицелии скрещивали с мицелиями, развившимися из конидий, не подвергнутых рентгеновскому облучению ("дикий тип").
4. Образующиеся аски содержали по четыре аскоспоры от каждого из родительских штаммов (мутантного и дикого типа).
5. Аскоспоры извлекали из асков и выращивали по отдельности на полной питательной среде.
6. Пробы мицелиев помещали на обогащенную витаминами минимальную среду. В некоторых случаях роста не наблюдалось.
7. Штаммы, которые не росли, не были способны синтезировать некоторые аминокислоты. Для того чтобы определить, какие это были аминокислоты, эти штаммы переносили на ряд минимальных сред, к каждой из которых добавлялась какая-либо одна аминокислота.
8. Если данный штамм рос на определенной среде, то, следовательно, эта среда содержала ту аминокислоту, которую данный штамм синтезировать не способен. Таким образом были идентифицйрованы мутантные штаммы нейроспоры. Анализ полученных результатов показал, что во всех случаях, в которых половина аскоспор из данного аска давала мутантный штамм, другая половина была способна расти на минимальной среде.
Эти результаты указывали на то, что мутантный ген ведет себя как единичный рецессивный ген и наследуется в соответствии с законами Менделя. Бидл и Татум пришли к выводу, что в каждом случае рентгеновские лучи вызывали мутацию одного гена, контролирующего синтез одного фермента, необходимого для синтеза одной аминокислоты. Это легло в основу их гипотезы "один ген - один фермент"
В этих ранних исследованиях был разработан экспериментальный метод с использованием минимальных сред, применяемый в генетике микроорганизмов во многих модификациях и давший огромное количество информации о роли генов.
В настоящее время твердо установлено, что гены контролируют происходящие в клетке процессы путем синтеза ферментов и других белков. Эти ферменты в свою очередь определяют синтез всех прочих веществ клетки.
С течением времени, однако, определение гена было видоизменено. Работы по строению генов бактериофага Т4, проведенные Бензером в 1955 г., привели к созданию концепции цистрона как единицы функции. Цистрон - это участок ДНК, несущий информацию, необходимую для синтеза одной полипептидной цепи; такая цепь может функционировать самостоятельно как биологически активная белковая молекула или становится частью более крупной макромолекулы. В настоящее время концепцию "один ген - один фермент" сменила концепция "один цистрон один полипептид".
Центральная догма молекулярной биологии -- обобщающее наблюдаемое в природе правило реализации генетической информации: информация передаётся от нуклеиновых кислот к белку, но не в обратном направлении. Правило было сформулировано Френсисом Криком в 1958 году и приведено в соответствие с накопившимися к тому времени данными в 1970 году. Переход генетической информации от ДНК к РНК и от РНК к белку является универсальным для всех без исключения клеточных организмов, лежит в основе биосинтеза макромолекул. Репликации генома соответствует информационный переход ДНК > ДНК. В природе встречаются также переходы РНК > РНК и РНК > ДНК (например у некоторых вирусов), а также изменение конформации белков, передаваемое от молекулы к молекуле. Транскрипция и трансляция. Условно весь процесс транскрипции и трансляции можно отобразить в cхеме: Транскрипция представляет собой процесс воспроизведения информации, хранящейся в ДНК, в виде одноцепочной молекуле и РНК (информационной РНК, которая переносит информацию о строении белка из ядра клетки в цитоплазму клетки к рибосомам). Этот процесс проявляется в синтезе молекулы и РНК по матрице ДНК. Молекула и РНК состоит и нуклеотидов, каждый из которых включает в себя остаток фосфорной кислоты сахар рибозу и одно из четырёх азотистых оснований (А, Г, Ц и У-урацил вместо Т-тюлина). В основе синтеза и РНК лежит принцип комплиментарности, т.е. против А в одной цепочке ДНК располагается У в и РНК, а против Г в ДНК - Ц в и РНК (см. рис. Транскрипция- на предыдущей странице), таким образом, и РНК является комплиментарной копией ДНК или её определённого участка, и содержит информацию, кодирующую аминокислоту или белок. Каждая аминокислота в ДНК и РНК шифруется последовательностью из 3-х нуклеотидов, т.е. - триплетом, который получил название кодонЕсли в транскрипции узнавание двух молекул друг другом проявляется только в принципе комплиментарности, то в трансляции помимо комплиментарности (временное объединение кодона и РНК и антикодона РНК (транспортной РНК, которая подносит аминокислоты нужные для синтеза белка, к месту синтеза - рибосома - см. рис. Транскрипция) молекулярное узнавание проявляется в процессе присоединения аминокислоты к тРНК с помощью фермента кодазы. Дело в том, что молекула тРНК состоит из головки, включающей в себя антиэАОК-триплет, состоящий из последовательности трёх нуклеотидов, и хвостика имеющего определённую форму. Сколько существует видов антикозонов тРНК, столько и существует форм хвостиков, и каждому антикозону соответствует своя форма хвостика в тРНК. Сколько существует форм хвостиков, столько существует видов форм фермента кодазы, который присоединяет аминокислоты к хвостику, а форма каждой кодазы подходит только к форме определённой аминокислоты. Т.о., тРНК носит с собой информацию не только в п последовательности нуклеотидов в антикозоне но и в форме хвостика молекулы. А основная передача информации здесь заключается в воспроизведении последовательности аминокислот в белке, которую подсказывает ферменту, кодирующему белок и РНК
14. Требования, предъявляемые к материальному субстрату, ответственному за несение генетической информации. Цистрон-регулятор, цистрон-оператор, структурные цистроны
Требования, предъявляемые к субстрату наследственности:
-Способность к самовоспроизведению - вещество должно обеспечить преемственность свойств в поколениях
-Уникальность - вещество должно иметь структуру, объясняющую существование миллионов видов и неповторимость.
-Специфичность - структура вещества должна предполагать синтез специфических белков.
Цистрон-регулятор - ген, контролирующий синтез белка-репрессора, родственного к структуре оператора.
Цистрон-оператор - функциональный ген, расположенный в начале оперона, включающий и выключающий структуры генов.
Структурные цистроны - расположены рядом и образуют оперон. Они программируют синтез ферментов, участвующих в последовательно идущих ферментативных реакциях одного метаболического цикла.
Интроны- инертные участки ДНК или РНК. Не несет наследственной информации.
Экзоны - неинертные участки ДНК или РНК. Участки гена несущие генетическую информацию, представленные м-РНК, кодирующие первичную структуру белка.
Сплайсинг- процесс синтеза м-РНК, проходящий при участии малых ядер РНК.удаление интронов и соединение оставшихся экзонов в последовательности, переписанной с экзонов.
Спейсеры - небольшие нетранскрибируемые участки ДНК, которые разделяют многочисленные повторы генов.
Рекон - наименьшая единица рекомбинации.
Кодон - триплет кодирующий аминокислоту.
Оперон - блок, образованный структурными генами. Единица считывания наследственной информации.
Оперон у прокариот: состоит из структурного цистрона и цистрона-оператора.
Оперон у эукариот:
- Плейотропная активация (много генов-регуляторов).
- Зависимость от гормонов (тестостерон, эстроген).
- Роль белков хроматина (гистоновых, нуклеосомных, негистоновых - инактиваторов).
- Поэтапная регуляция (сплайсинг и мультимерная организация белка).
15. Общие принципы генетического контроля экспрессии генов. Роль генетических факторов в регуляции генной активности и негенетический контроль (гормоны, белки гистоны, синтез неактивных белков, накопление и - РНК в цитоплазме)