Пример 3: Гистидинемия - повышение ГИС в крови. В норме ГИС под действием гистидазы превращается в уроканиновую к-ту (5-формиминотетрагидрофолиевую к-ту). Накапливающийся ГИС приводит к нарушению умственного и физического развития.
4. Нарушения на стадии биосинтеза белка. Чаще всего наблюдается усиленный синтез белка к.-л. клеткой (злокачественное новообразование).
Механизмы развития раковой опухоли
Рак - генетическое заболевание, т.е. повреждение генов.
Виды повреждений генов:
1) потеря гена,
2) собственно повреждение гена,
3) активация гена,
4) инактивация гена,
5) привнесение генов извне (внедрение добавочных генов).
В каждой клетке находится около 100'000 генов. В настоящее время признано, что ряд генов может превращаться в гены, несущие информацию о белках опухолевой клетки - онкогены. Часто это нормальные гены, но в норме функционирующие только в эмбриональном периоде или малоактивные, которые стали активными.
Механизмы активации генов представлены: а) мутацией генов и б) активацией генов.
В настоящее время выделено более 100 онкогенов. Помимо онкогенов есть еще антионкогены - гены-супрессоры опухолей (ГСО). Белковые продукты этих генов препятствуют превращению нормальной клетки в опухолевую. Наиболее часто онкогены и ПСО встречаются среди генов белков-передатчиков сигналов регуляции роста и размножения клеток.
Онкогены образуются:
1) среди генов факторов роста,
2) среди R факторов роста,
3) среди белков-передатчиков сигнала внутрь клетки,
4) среди факторов транскрипции,
5) среди генов белков, связанных с ростом и размножением клетки.
Активация одного онкогена или потеря функций одного гена-супрессора недостаточна для превращения нормальной клетки в опухолевую; подсчитано, что клетке человека необходимо для этого 10 мутаций. Но выявлены гены, появление которых способствует опухолевому росту, так перерождение гена Р53 - в 50%. Ген Р53 кодирует информацию о белке клеточного роста. Это ген апоптоза - ген, приводящий к гибели поврежденную клетку. Если этот ген поврежден, то сохраняются клетки с мутационными изменениями, что приводит к накоплению мутаций. Это объясняет возникновение опухолевого роста у пожилых людей.
Считается, что вирусы вносят в клетку новые онкогены, которые повышают вероятность развития опухоли. Также число мутаций повышают физические и химические факторы.
5. Нарушение обмена белка на стадии образования конечных продуктов.
Чаще всего нарушения в орнитиновом цикле мочевинообразования. При этом нарушения на разных уровнях приводят к накоплению разных продуктов (предшествующих нарушенному процессу). Напр., нарушение образования карбомаилфосфата ведет к гипераминоацидемии (повышению АК в крови), накоплению аммиака. Либо нарушение аргининосукцинатсинтазной реакции [рисунок: цитруллин + АСП > аргининосукцинат, над стрелочкой "аргининосукцинатсинтаза" ] ведет к накоплению цитруллина.
Все нарушения орнитинового цикла приводят к слабоумию (напр., аргининосукцинатное слабоумие).
Нарушение выделения продуктов белкового обмена. Напр., цистиноз - нарушение реабсорбции АК (особенно цистина и цистеина) - цистинурия (в 20-30 раз ! ).
Генная инженерия
1970 г. - американский ученый Тёмин открыл фермент ревертазу (обратную транскриптазу), которая катализирует синтез РНК > кДНК (комплементарная ДНК, не содержащая интронов).
Генная инженерия - это искусственное создание активных генетических структур (рекомбинантных ДНК). Первая работа - 1972 г. - амер. Пол Берт.
Предпосылки генной инженерии
1) изучение (в деталях) матричных биосинтезов;
2) установление возможности обмена между двумя молекулами ДНК (т.е. рекомбинанции);
3) открытие ферментов рестриктаз (1970), разрезающих ДНК в определенных участках с образованием фрагментов с "липкими концами";
4) открытие ферментов ревертаз (1970);
5) обнаружение маленьких кольцевых ДНК в плазмидах.
Основные этапы генной инженерии:
1. получение необходимого гена:
а) с помощью рестриктаз "нарезается" ДНК, затем выделяется нужный фрагмент;
б) с помощью ревертаз по имеющейся мРНК синтезируется комплементарная ДНК (кДНК).
2. подготовка вектора - плазмиды или фага. [рисунок: кольцевая ДНК (плазмида) > (над стрелкой "рестриктаза") плазмида с вырезанным кусочком]
3. соединение к вектору необходимого гена [рисунок: большой отрезок плазмиды из предыдущего рисунка плюс кусок ДНК из первого рисунка > рекомбинантная ДНК кольцевого строения, над стрелкой "лигаза"]
4. вектор внедряется в кишечную палочку (E.coli), клонирование гена (т.е. получение его копий).
Обмен углеводов
Углеводами называются альдегиды или кетоны многоатомных спиртов или их производных.
Углеводы классифицируются на:
1. моносахариды - не подвергаются гидролизу:
- триозы (глицеральдегид, диоксиацетон);
- тетрозы (эритроза);
- пентозы (рибоза, дезоксирибоза, рибулоза, ксилуоза);
- гексозы (глюкоза, фруктоза, галактоза).
2. олигосахариды - состоят из 2-12 моносахаридов, соединенных между собой гликозидными связями (мальтоза - 2 глюкозы, лактоза - галактоза и глюкоза, сахароза - глюкоза и фруктоза);
3. полисахариды:
- гомополисахариды (крахмал, гликоген, клетчатка);
- гетерополисахариды (сиаловая кислота, нейраминовая кислота, гиалуроновая кислота, хондроитинсерная кислота, гепарин).
Углеводы входят в состав клеток животных (до 2%) и растений (до 80%).
Биологическая роль:
1. энергитическая. На долю углеводов приходится около 70% всей калорийности. Суточная потребность для взрослого человека - 400-500 г. При окислении 1 г углеводов до воды и углекислого газа выделяется 4,1 ккал энергии;
2. структурная. Углеводы используются как пластический материал для образования структурно-функциональных компонентов клеток. К ним относятся пентозы нуклеиновых кислот, углеводы гликопротеинов, гетерополисахариды межклеточного вещества;
3. резервная. Могут откладываться про запас в печени, мышцах в виде гликогена;
4. защитная. Гликопротеины принимают участие в образовании антител. Гетерополисахариды участвуют в образовании вязких секретов (слизи), покрывающих слизистые оболочки ЖКТ, дыхательных и мочеполовых путей. Гиалуроновая кислота играет роль цементирующего вещества соединительной ткани, препятствующего проникновению чужеродных тел;
5. регуляторная. Некоторые гормоны - гликопротеины (гипофиза, щитовидной железы);
6. участвуют в процессах узнавания клеток (сиаловая и нейраминовая кислоты);
7. определяют группу крови, входя в состав оболочек эритроцитов;
8. участвуют в процессах свертываемости крови, входя в состав гликопротеинов крови, фибриногена и протромбина. Так же предупреждает свёртываемость крови, входя в состав гепарина.
Основным источником углеводов для организма служат углеводы пищи, главным образом крахмал, сахароза и лактоза.
Крахмал - это смесь двух гомополисахаридов: линейного (амилоза от 10% до 30%) и разветвленного (амилопектин от70% до 90%) строения. Крахмал содержится в основных продуктах питания: картофель до 10%, крупы - 70-80%.
Остатки глюкозы соединяются в амилозе и линейных цепях амилопектина с помощью -1,4-гликозидных связей, а в точках ветвления амилопектина - с помощью -1,6-гликозидных связей.
Крахмал, поступая с пищей в ротовую полость, после механической обработки будет подвергаться гидролизу с помощью -амилазы слюны. Этот фермент является эндоамилазой, расщепляющей -1,4-гликозидные связи. Оптимальный рН фермента находится в слабощелочной среде (рН=7-8). Поскольку пища в ротовой полости долго не находится, крахмал здесь подвергается лишь частичному гидролизу с образованием амилодекстринов.
Далее пища идёт в желудок. Слизистая оболочки желудка гликозидазы (ферменты, расщепляющие углеводы) не вырабатываются. В желудке среда резко кислая (рН=1,2-2,5) ,поэтому действие -амилазы слюны прекращается, но в более глубоких слоях пищевого комка, куда не сразу проникает желудочный сок, действие фермента слюны продолжается и крахмал успевает пройти стадию гидролиза - эритродекстринов.
Основным местом переваривания крахмала служит тонкий кишечник. Здесь происходят наиболее важные стадии гидролиза крахмала. В двенадцатиперсной кишке, куда открывается проток поджелудочной железы, под действием ферментов ПЖЖ (-амилазы, амило-1,6-гликозидазы и олиго-1,6-гликозидазы) будет идти гидролиз крахмала. Выделяющийся сок поджелудочной железы содержит бикарбонаты, которые участвуют в нейтрализации кислого желудочного содержимого. Образующийся при этом углекислый газ способствует перемешиванию пищевого комка, создаётся слабощелочная среда (рН=8-9). Образующиеся катионы натрия и калия способствуют активации панкреатических гидролаз (-амилаза, амило-1,6-гликозидаза, олиго-1,6-гликозидаза). Эти ферменты завершают гидролитический разрыв внутри гликозидных связей, начатых -амилазой слюны.
Эритродекстрины превращаются в ахродекстрины. Под влиянием -амилазы панкреатического сока завершается разрыв внутренних -1,4-гликозидных связей в крахмале с образованием мальтозы. -1,6-гликозидные связи в точках ветвления гидролизуются под действием амило-1,6-гликозидазы и олиго-1,6-гликозидазы, которая является терминальной (последней) в этом процессе.
Т.о. три панкреатических фермента завершают гидролиз крахмала в кишечнике с образованием мальтоз. Из тех глюкозных остатков, которые в молекуле крахмала были соединены с помощью -1,6-гликозидных связей, образовались дисахариды - изомальтозы.
Слизистая оболочка тонкой кишки (энтероциты) синтезирует мальтазы (изомальтазы), лактазы и сахаразы. Образующиеся в результате гидролиза мальтоза, изомальтоза являются временным продуктом гидролиза, и в клетках кишечника они быстро гидролизуются под влиянием кишечных мальтазы, изомальтазы на две молекулы глюкозы. Т.о. в результате гидролиза крахмала в органах пищеварения образуется конечный продукт - глюкоза.
В составе пищи кроме полисахаридов поступают и дисахариды (лактоза и сахароза), которые подвергаются гидролизу только в тонком кишечнике. В энтероцитах синтезируются специфические ферменты: лактаза и сахараза, которые осуществляют гидролиз этих дисахаридов с образованием глюкоз, галактоз и фруктоз. Продукты полностью перевариваются. Углеводы - моносахариды всасываются в кровь и на этом завершается начальный этап обмена углеводов в организме человека - пищеварение.
Было установлено, что для всасывания моносахаридов (глюкозы) в кровь необходимо наличие в энтероцитах:
- в цитоплазме - ионов калия, натрия, АТФ и воды.
- в биомембранах - специфических белков-переносчиков и фермента - АТФ-азы.
90% образовавшейся в результате гидролиза крахмала глюкозы всасывается в кровь и через систему воротной вены поступает в печень, где депонируется в виде резервного полисахарида - гликогена. Около 10% всасывающихся в кровь моносахаридов попадает в большой круг кровообращения, разносится к органам и тканям, которые используют их в метаболических реакциях.
С пищей в организм человека поступает клетчатка - полисахарид, состоящий из остатков -D- глюкопиранозы. В ЖКТ человека она гидролизу не подвергается, поскольку не вырабатываются -гликозидазы, которые расщепляют её до глюкозы.
Биологическая роль клетчатки:
1. формирует пищевой комок;
2. продвигаясь по ЖКТ она раздражает слизистую оболочку, усиливая секрецию пищеварительных желез;
3. усиливает перистальтику кишечника;
4. нормализует кишечную микрофлору.
Достигая толстого отдела кишки, она под действием ферментов микрофлоры подвергается частичному сбраживанию с образованием глюкозы, малата, газообразных веществ. Глюкозы образуется мало, но она всасывается в кровь.
Биологический синтез гликогена
Установлено, что гликоген образуется почти во всех клетках организма, однако наибольшее содержание гликогена обнаружено в печени (2-6%) и в мышцах (0,5-2%). Т.к. общая мышечная масса организма человека велика, то большая часть всего гликогена содержится в мышцах.
Глюкоза из крови легко поступает в клетки организма и в ткани, легко проникая через биологические мембраны. Инсулин обеспечивает проницаемость мембран, это единственный гормон, обеспечивающий транспорт глюкозы в клетки органов и тканей. Как только глюкоза поступает в клетку, она сразу же как бы запирается в ней. В результате первой метаболической реакции, катализируемой ферментом гексакиназой в присутствии АТФ, глюкоза превращается в фосфорный эфир - глюкозо-6-фосфат, для которого клеточная мембрана не проницаема. Глюкозо-6-фосфат теперь будет использоваться клеткой в метаболических реакциях (анаболизм, катаболизм). Из клетки глюкоза может обратно выйти в кровь только после гидролиза под действием фосфатазы (глюкозо-6-фосфатазы). Этот фермент есть в печени, почках, в эпителии кишечника, в других органах и тканях его нет, следовательно, проникновение глюкозы в клетки этих органов и тканей необратимо.
Процесс биосинтеза гликогена можно записать в виде 4-х стадий:
глюкоза (гексакиназа, АТФАДФ) глюкозо-6-фосфат (фосфоглюкомутаза) глюкозо-1-фосфат (глюкозо-1-фосфат-уридин трансфераза) УДФ-глюкоза (гликоген-синтетаза, +[C6Н10О5]n) [C6Н10О5]n+1 (это наращенный гликоген) +УДФ