Материал: 5

Общий вывод по таблице: отдельные функции могут быть распределены между индивидуальными белками или выполняться одним белком.

Механизмы интеграции вирусных геномов в клеточные хромосомы

Существует два типа механизмов интеграции вирусных геномов сайт-специфичная и сайт-неспецифичная.

Фаг λ.

Интеграцию фага изучал А. Кэмбелл. Было известно, что ДНК фага интегрируется в хромосому E. coli между оперонами Gal и Beo (галактозным и биотиновым). Используя генетические маркеры, он сравнил порядок следования генов в свободном и в интегрировавшемся фаге. Оказалось, что порядок инвертирован. Он предложил схему интеграции фага с инверсией порядка генов. Сейчас она называется схемой Кэмбелла.

Структура участков, участвующих в интеграции.

O – коровый элемент; P, P’, B, B’ – плечи.

Для интеграции важна сверхспирализация ДНК фага. Процесс осуществляет вирусспецифичный фермент – интеграза (40 кДа). Она относится к классу тирозиновых рекомбиназ (в активном центре Tyr), которые похожи на топоизомеразы I класса. Топоизомеразы I класса способны вносить разрыв в цепь ДНК без кофакторов и делать обратное воссоединение цепей.

Интеграза одним доменом узнает плечи,а другим связывается с коровым участком. Она связывается с участком в виде тетрамера.

В системе, состоящей из интегразы, ДНК фага и ДНК бактерии, интеграция происходит, но с низкой эффективностью.

Эффективно рекомбинация идет в присутствии клеточного белка IHF. Этот белок, связываясь с ДНК, вызывает ее изгибание (DNA bending). IHF состоит из двух субъединиц him A (10,5 кДа) и him D (9,5 кДа).

На attP сайте собирается белковый комплекс. Нуклеопротеидный комплекс называется интосомой. Его размер Ø 140 Å. В интосоме core относительно обнажен и может взаимодействовать с attB.