Примечание: ри/у - уровень статистической значимости различий соответствующего показателя внутри группы по сравнению с его исходным уровнем, рк - уровень статистической значимости различий соответствующего показателя в подопытной группе в сопоставлении с группой сравнения
Установлено, что активность ЛДГ в группе сравнения на протяжении эксперимента последовательно возрастала, вследствие чего на 5 и 6 неделях она статистически значимо превышала исходный уровень в 4,7 раза и в 5,4 раза, соответственно. В подопытной группе в первые 4 недели показатели активности ЛДГ были сопоставимы с группой сравнения. На 5 неделе величина описываемого показателя по-прежнему статистически значимо превышала свой исходный уровень, однако в 1,6 раза уступала уровню группы сравнения. На 6 неделе активность ЛДГ между группами различалась в 2,5 раза, в то время как в подопытной группе она уже не имела статистически значимых различий по сравнению со своим исходным уровнем.
Динамика активности ГГТ в группе сравнения в течение эксперимента характеризовалась отчетливой тенденцией к росту. В подопытной группе в период 4-6 недель активность ГГТ несколько снижалась. В результате описанных разнонаправленных динамик величины данного показателя к концу эксперимента были зафиксированы статистически значимые межгрупповые различия - в подопытной группе активность ГГТ уступала уровню группы сравнения на 5 и 6 неделях в 2,2 и в 1,8 раза, соответственно.
Результаты морфологических исследований показали, что у всех крыс группы сравнения наблюдалось формирование почечных конкрементов, среднее количество которых составило 7,9 ± 1,6 в поле зрения, а их средний размер - 298,8 ± 34,2 мкм2. При этом в почках животных подопытной группы морфологических признаков развития нефролитиаза не выявлено (рис.).
крыса креатинин тетрапептид диурез
1а 1б
Рис. 1 - Гистологическая картина нефролитиаза в почках крыс экспериментальных групп. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение х 400
Примечание: 1а - формирование крупных кальциевых депозитов в почках крыс группы сравнения,
1б - отсутствие признаков формирования кальциевых депозитов в почках крыс подопытной группы.
Обсуждая полученные результаты, отметим, что в группе сравнения наблюдались типичные биохимические признаки развития нефролитиаза. Так, оказалось, что к концу 6 недель эксперимента существенно снизилась экскреция креатинина, что свидетельствовало об уменьшении скорости клубочковой фильтрации. По современным представлениям, уменьшение объема и скорости тока мочи по нефрону является одним из ведущих физико-химических факторов, способствующих пересыщению мочи литогенными ионами и дальнейшей кристаллизации их нерастворимых солей [11, 14, 15]. Параллельно фиксировали значительное повышение активности в моче маркерных ферментов повреждения почечной ткани, особенно - ЛДГ. Как известно, ЛДГ - это цитозольный фермент, и рост его активности в моче указывает на массовый цитолиз нефроцитов [7, 12, 16]. Это следует расценивать как значимый признак развития нефролитиаза, поскольку сегодня хорошо известно, что формирование почечных камней начинается с первичного очага литогенеза на участке поврежденного неф-ротелия [14, 15, 18, 19, 21]. Морфологические исследования подтвердили образование конкрементов в почках крыс группы сравнения.
На этом фоне в подопытной группе, где крысам вводили тетрапептид Leu-Ile-Lys-Met, функция почек сохранялась близкой к норме. Так, не было зафиксировано снижения экскреции креатинина, что свидетельствовало об отсутствии уменьшения скорости клубочковой фильтрации. Следовательно, можно обоснованно полагать, что в условиях применения тетрапептида Leu-Ile-Lys-Met не возникало условий для пересыщения мочи литогенными ионами. Кроме того, обращает на себя внимание динамика активности маркерных ферментов в моче подопытных крыс. Оказалось, что активность ЛДГ в ходе эксперимента несколько возрастала, однако этот рост был значительно менее выраженным, чем в группе сравнения, а величина описываемого показателя в заключительные недели периода наблюдений была статистически значимо ниже, чем в группе сравнения. Активность ГГТ к концу эксперимента также была существенно ниже уровня крыс группы сравнения. В совокупности это указывает на то, что применение исследуемого пептида способствовало ослаблению повреждения неф-роцитов и нивелировало условия для формирования первичного очага литогенеза. Морфологические исследования подтвердили наличие антилитогенного действия тетрапептида Leu-Ile-Lys-Met - признаков формирования конкрементов в почках крыс подопытной группы выявлено не было.
Выводы
Трехнедельное применение тетрапептида Leu-Ile-Lys-Met в условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза сопровождается сохранением исходного уровня клубочковой фильтрации и уменьшением активности маркерных ферментов повреждения почечного эпителия относительно группы сравнения.
После курса применения тетрапептида Leu-Ile-Lys-Met в условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза конкременты в почках не обнаруживаются, тогда как в группе сравнения выявлено формирование многочисленных конкрементов среднего и крупного размера.
Список литературы
1. Брюханов, В. М. Функция почек в условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза / В. М. Брюханов, Я. Ф. Зверев, В. В. Лампатов, А. Ю. Жариков, О. В. Азарова, Ю. Г. Мотин // Нефрология. - 2008. - Т. 12, № 1. - С. 69-74.
2. Жариков, А. Ю. Активность процессов свободнорадикального окисления в почках и содержание циклооксигеназ в моче крыс в условиях экспериментальной терапии оксалатного нефролитиаза тетрапептидомLeu-Ile-Lys-Met / А. Ю. Жариков, Н. Н. Якушев, Г В. Жарикова, О. Н. Мазко, О. Г. Макарова, В. М. Брюханов, Ю. В. Кореновский, О. В. Азарова // Сибирский научный медицинский журнал. - 2019. - Т. 39, № 4. - С. 78-84.
3. Жариков, А. Ю. Влияние трипептидаLeu-Ile-Lysна течение экспериментального оксалатного нефро-литиаза / А. Ю. Жариков, Н. Н. Якушев, Г. В. Жарикова, О. Н. Мазко, О. Г. Макарова, А. В. Лепилов, И. П. Бобров // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2019. - Т. 167, № 6. - С. 704-708.
4. Жариков, А. Ю. Опыт применения трипептидаLeu-Ile-Lysдля экспериментальной терапии хронического 16-недельного оксалатного нефролитиаза у крыс / А. Ю. Жариков, Н. Н. Якушев, О. Н. Мазко,
5. О. Г. Макарова, А. В. Лепилов, И. П. Бобров, Г. В. Жарикова, В. И. Киселев //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2020. - Т. 169, № 2. - С. 197-202.
6. Жариков, А. Ю. Роль антиоксидантной терапии в фармакологической коррекции экспериментального нефролитиаза / А. Ю. Жариков, О. С. Талалаева, Я. Ф. Зверев, В. В. Лампатов, О. В. Азарова, А. В. Кудинов, Ю. Г. Мотин // Нефрология. - 2010. - Т. 14, № 4. - С. 53-58.
7. Жариков, А. Ю. Современные методы моделирования оксалатного нефролитиаза / А. Ю. Жариков, В. М. Брюханов, Я. Ф. Зверев, В. В. Лампатов // Нефрология. - 2008. - Т. 12, № 4. - С. 28-35.
8. Зверев, Я.Ф. Ферментурия как признак экспериментального нефролитиаза / Я. Ф. Зверев, O.В. Азарова, В.М. Брюханов, В.В. Лампатов, А.Ю. Жариков // Нефрология. - 2009. - Т. 13, № 3. - С. 149.
9. Мотин, Ю. Г. Оксидативный стресс как один из факторов повреждения на ранних сроках экспериментального нефролитиаза / Ю. Г. Мотин, А. Ю. Жариков, В. М. Брюханов, Я. Ф. Зверев, А. В. Лепилов, В. В. Лампатов, Н. В. Мотина // Морфологія. - 2011. - Т. 5, № 1. - С. 33-37.
10. Мотина, Н.В. Оксидативное повреждение почек при экспериментальном оксалатном нефролитиазе / Н. В. Мотина, Я. Ф. Зверев, А.В. Лепилов, В. В. Лампатов, А. Ю. Жариков, О. С. Талалаева // Нефрология. - 2010. - Т. 14, № 1. - С. 68-72.
11. Хафазиянова, Р. Х. Математическая статистика в экспериментальной и клинической фармакологии / P.Х. Хафизьянова, И. М. Бурыкин, Г. Н. Алеева. - Казань: Медицина, 2006. - 374 с.
12. Baumann, J. M. From crystalluria to kidney stones, some physicochemical aspects of calcium nephrolithiasis / J. M. Baumann, B. Affolter// World J. Nephrol. - 2014. - Vol. 3, № 4. - P. 256-267.
13. Khan, A. A. The Biochemical and Clinical Perspectives of Lactate Dehydrogenase: An Enzyme of Active Metabolism / A. A. Khan, K. S. Allemailem, F. A. Alhumaydhi, S .J. T Gowder, A. H. Rahmani// Endocr. Metab. Immune Disord. Drug Targets. - 2020. - Vol. 20, № 6. - Р. 855-868. doi: 10.2174/1871530320666191230141110.
14. Khan, S. R. Stress oxidative: nephrolithiasis and chronic kidney diseases / S. R. Khan // Minerva Med. - 2013. - Vol. 104, № 1. - P. 23-30.
15. Mager, R. Current concepts on the pathogenesis of urinary stones / R. Mager, A. Neisius// Urologe A. - 2019. - Vol. 58, № 11. - P. 1272-1280.
16. Rodgers, A. L. Physicochemical mechanisms of stone formation / A. L. Rodgers // Urolithiasis. - 2017. - Vol. 45, № 1. - P 27-32.
17. Schepers, M. S. Oxalate is toxic to renal tubular cells only at supraphysiologic concentrations / M. S. Schepers, E. S. van Ballegooijen, C. H.Bangma, C. F. Verkoelen// Kidney Int. - 2005. - Vol. 68, № 4. - P. 1660-1669.
18. Spina, D. Statistics in pharmacology / D. Spina // Br. J. Pharmacol. - 2007. - Vol. 152, № 3. - P. 291-293.
19. Tang, X. Acute and chronic kidney injury in nephrolithiasis / X. Tang, J. C. Lieske// Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. - 2014. - Vol. 23, № 4. - P. 385-390.
20. Thongboonkerd, V Proteomics of Crystal-Cell Interactions: A Model for Kidney Stone Research / V. Thongboonkerd// Cells. - 2019. - Vol. 8, № 9. - pii: E1076. doi: 10.3390/cells8091076.
21. Tracy, C. R. Oxidative stress and nephrolithiasis: a comparative pilot study evaluating the effect of pomegranate extract on stone risk factors and elevated oxidative stress levels of recurrent stone formers and controls / C. R. Tracy, J. R. Henning, M. R. Newton, M. Aviram, M. B. Zimmerman // Urolithiasis. - 2014. - Vol. 42, № 5. - P. 401-408.
22. Wiener, S. V Beginnings of nephrolithiasis: insights into the past, present and future of Randall's plaque formation research / S. V Wiener, S. P. Ho, M. L. Stoller// Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. - 2018. - Vol. 27, № 4. - P. 236-242.
23. Bryukhanov V M., ZverevYa. F., Lampatov V. V, Zharikov A. Yu., AzarovaO. V., Motin Yu. G Funktsiyapochek v usloviyakheksperimental'nogooksalatnogonefrolitiaza [Renal function in experimental oxalate nephrolithiasis]. Nefrologiya [Nephrology], 2008, vol. 12, no. 1, pp. 69-74.
24. ZharikovA. Yu., YakushevN. N., ZharikovaG. V., MazkoO. N., MakarovaO. G, BryukhanovV. M., KorenovskiyYu. V, AzarovaO. V. Aktivnost' protsessovsvobodnoradikal'nogookisleniya v pochkakhisoderzhanietsiklooksigenazv mochekrys v usloviyakheksperimental'noyterapiioksalatnogonefrolitiazatetrapeptidomLeu-Ile- Lys-Met [The activity of free radical oxidation in the kidneys and the content of cyclooxygenases in rat urine during experimental treatment of oxalate nephrolithiasis with the Leu-Ile-Lys-Met tetrapeptide]. Sibirskiynauchnyymeditsin- skiyzhurnal [Siberian Scientific Medical Journal], 2019, vol. 39, no. 4, pp. 78-84.
25. Zharikov A. Yu., Yakushev N. N., ZharikovaG. V., MazkoO. N., Makarova O.G, Lepilov A.V., Bobrov I.P. VliyanietripeptidaLeu-Ile-Lys natechenieeksperimental'nogooksalatnogonefrolitiaza [The influence of the Leu-Ile-Lys tripeptide on the course of experimental oxalate nephrolithiasis]. Byulleten' eksperimental'noybiologiiimeditsiny [Bulletin of experimental biology and medicine], 2019, vol. 167, no. 6, pp. 704-708.
26. Zharikov A. Yu, Yakushev N. N., MazkoO. N., Makarova O. G, Lepilov A. V., Bobrov I. P., ZharikovaG. V., Kiselev V. I. OpytprimeneniyatripeptidaLeu-Ile-Lys dlyaeksperimental'noyterapiikhronicheskogo 16-nedel'nogo oksalatnogonefrolitiaza u krys [Experience of using Leu-Ile-Lys tripeptide for experimental therapy of chronic 16-week oxalate nephrolithiasis in rats]. Byulleten' eksperimental'noybiologiiimeditsiny [Bulletin of Experimental Biology and Medicine], 2020, vol. 169, no. 2, pp. 197-202.
27. Zharikov A. Yu., TalalayevaO. S., ZverevYa. F., Lampatov V V, AzarovaO. V, Kudinov A.V., Motin Yu.G. Rol' antioksidantnoyterapii v farmakologicheskoykorrektsiieksperimental'nogonefrolitiaza [The role of antioxidant therapy in the pharmacological correction of experimental nephrolithiasis]. Nefrologiya [Nephrology], 2010, vol. 14, no. 4, pp. 53-58.
28. Zharikov A. Yu., Bryukhanov V. M., ZverevYa. F., Lampatov V. V.Sovremennyemetodymodelirovaniyaoksalatnogonefrolitiaza [Modern methods of modeling oxalate nephrolithiasis]. Nefrologiya [Nephrology], 2008, vol. 12, no. 4, pp. 28-35.
29. ZverevYa. F., AzarovaO. V, Bryukhanov V. M., Lampatov V. V, Zharikov A. Yu. Fermenturiyakakpriznakeksperimental'nogonefrolitiaza [Fermenturia as a sign of experimental nephrolithiasis]. Nefrologiya [Nephrology], 2009, vol. 13, no. 3, pp. 149.
30. Motin Yu. G, Zharikov A. Yu., Bryukhanov V. M., ZverevYa. F., Lepilov A.V., Lampatov V.V., Motina N.V. Oksidativnyy stress kakodinizfaktorovpovrezhdeniyanarannikhsrokakheksperimental'nogonefroliti- aza [Oxidative stress as one of the damage factors in the early stages of experimental nephrolithiasis]. Morfologiya [Morphology], 2011, vol. 5, no. 1, pp. 33-37.
31. Motina N. V, ZverevYa. F., Lepilov A. V., Lampatov V. V., Zharikov A. Yu., TalalayevaO. S. Oksidativnoepovrezhdeniepochekprieksperimental'nomoksalatnomnefrolitiaze [Oxidative kidney damage in experimental oxalate nephrolithiasis]. Nefrologiya [Nephrology], 2010, vol. 14, no. 1, pp. 68-72.
32. Khafiz'yanova R. Kh., Burykin I. M., AleyevaG. N. Matematicheskayastatistika v eksperimental'noyiklinicheskoyfarmakologii [Mathematical statistics in experimental and clinical pharmacology]. Kazan, Medicine, 2006, 374 p.
33. Baumann J. M., Affolte B. From crystalluria to kidney stones, some physicochemical aspects of calcium nephrolithiasis. World J. Nephrol., 2014, vol. 3, no. 4, pp. 256-267.
34. Khan A. A., AllemailemK. S., AlhumaydhiF. A., Gowder S. J. T., Rahmani A.H. The Biochemical and Clinical Perspectives of Lactate Dehydrogenase: An Enzyme of Active Metabolism. Endocr. Metab. Immune Disord. Drug Targets, 2020, vol. 20, no. 6, pp. 855-868. doi:10.2174/1871530320666191230141110.
35. Khan S. R. Stress oxidative: nephrolithiasis and chronic kidney diseases. Minerva Med., 2013. vol. 104, no. 1, pp. 23-30.
36. Mager R., Neisius A. Current concepts on the pathogenesis of urinary stones. Urologe A., 2019, vol. 58, no. 11, pp. 1272-1280.
37. Rodger, A. L. Physicochemical mechanisms of stone formation. Urolithiasis, 2017, vol. 45, no. 1, pp. 27-32.
38. SchepersM. S, van BallegooijenE. S., Bangma C. H., Verkoelen C. F. Oxalate is toxic to renal tubular cells only at supraphysiologic concentrations. Kidney Int., 2005, vol. 68, no. 4, pp. 1660-1669.
39. Spina D. Statistics in pharmacology. Br. J. Pharmacol., 2007, vol. 152, no. 3, pp. 291-293.
40. Tang X.,Lieske J. C. Acute and chronic kidney injury in nephrolithiasis. Curr. Opin. Nephrol. Hypertens., 2014, vol. 23, no. 4, pp. 385-390.
41. Thongboonkerd V Proteomics of Crystal-Cell Interactions: A Model for Kidney Stone Research. Cells, 2019, vol. 8, no. 9, pii: E1076. doi: 10.3390/cells8091076.
42. Tracy C. R., Henning J. R., Newton M. R., Aviram M., Zimmerman M. B. Oxidative stress and nephrolithiasis: a comparative pilot study evaluating the effect of pomegranate extract on stone risk factors and elevated oxidative stress levels of recurrent stone formers and controls. Urolithiasis, 2014, vol. 42, no. 5, pp. 401-408.
43. Wiener S. V, Ho S. P., StollerM. L. Beginnings of nephrolithiasis: insights into the past, present and future of Randall's plaque formation research. Curr. Opin. Nephrol. Hypertens., 2018, vol. 27, no. 4, pp. 236-242.