В Европе в последние годы стали применять ПЦР, разработанную Ahne, et al (1999). Праймеры для ПЦР были получены секвенированием L-гена из всех 3-х штаммов вируса.
Дифференциальная диагностика
У удавов и питонов OPMV необходимо дифференцировать с IBD, особенно при наличии неврологических симптомов. У гадюк и ямкоголовых гадюк дифференциальный диагноз включает острые и хронические пневмонии иной этиологии, а также септицемию с геморрагическим синдромом.
Терапия
Необходим карантин для вновь поступающих змей не менее 90 дней и серологический контроль при поступлении и через 2-3 месяца. Серопозитивных змей и животных, имеющих подозрительную симптоматику, необходимо строго изолировать. Неспецифическая терапия включает профилактику вторичной инфекции с помощью антибиотиков, назначение витаминов и иммуномодуляторов. Во время эпизоотической вспышки OPMV, начавшейся в июле 1999г. в Московском зоопарке, животным назначали деринат, гаммаплант и для купания змей использовали сильный вирулицидный дезинфектант - септабик в 0,025% концентрации (Кудрявцев и др., 2000).
Иммунитет и специфическая профилактика
Исследования по созданию убитой вакцины для профилактики OPMV проводились в начале 90-х годов в США (Jacobson, et al, 1992), но затем были прекращены в связи с недостаточным финансированием.
1.3 Флавивирусы
Вирусы семейства Flaviviridae поражают позвоночных и насекомых. Вирионы представляют собой сферические частицы диаметром 40-60нм. Они состоят из нуклеокапсида икосаэдрической симметрии и наружной липопротеидной оболочки. Геном представлен односпиральной молекулой РНК. В семействе выделяют 3 рода. Представители центрального рода Flavivirus вызывают около 30 заболеваний человека и около 8-10 видов - заболевания домашних животных.
Характеристика возбудителя
Вирус Западного Нила - арбовирусная болезнь, эндемичная для Африки, Азии, Европы и Океании, которая передается комарами семейства Culicidae. Вирус поражает человека, млекопитающих и птиц, вызывая у чувствительных видов явления менингоэнцефалита. Сравнительно недавно вирус проник в США. Первая эпизоотия среди птиц была зарегистрирована в Нью-Йорке в 1999г. В основном заболевали вороны и дневные хищники. К 2002г. вирус распространился практически по всем штатам, причем только за лето этого года заболело 120 человек, 11 из которых умерло. В 2001г. были описаны первые случаи заболевания аллигаторов во Флориде на крокодильих фермах, а в следующем году - на фермах во Флориде, Джорджии, а также на ферме нильских крокодилов в Израиле и среди крокодилов Морелетта C.moreletti в Мексике (Jacobson, 2004). К 2005г. болезнь зарегистрировали в Техасе, Луизиане и Айдахо, причем только в Луизиане погибло 5000 молодых аллигаторов, и было зафиксировано 4 случая заражения людей из персонала ферм (Nevarez et al, 2005). Среди диких аллигаторов в эпизоотических очагах были обнаружены серопозитивные особи.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения
У аллигаторов в возрасте 1-2 месяцев болезнь проявляется неврологической симптоматикой (плавание по кругу, атаксия, тремор мышц и головы), отмечается вздутие желудка и скопление в нем воды, вероятно, в связи с парезами мышц, участвующих в глотании. Симптомы развиваются через 7-10 дней после контакта с больными животными. При остром течении (6-8 дней) летальность составляет 40-60%. У аллигаторов в возрасте 12-14 месяцев отмечали летаргию, спастический тортиколлис и вздутие кишечника с нарушением флотации. На вскрытии обычно отмечают макроскопические изменения в печени, легких, миокарде, головном мозге, в толстом кишечнике - выраженный фибринозный колит с образованием характерных псевдомембран. Гистологически выявляется гетерофильный менингоэнцефалит; некротический гетерофильный гепатит; гетерофильный, гистиоцитарный спленит, генерализованный лимфофолликулит и некротический гетерофильный панкреатит. С помощью иммуноперидоксидазной окраски выявляется высокая иммунопозитивность тканей мозга, селезенки, поджелудочной железы, почек и ЖКТ.
Антигенная вариабельность и родство
Для крокодиловых ВЗН является типичной эмерджентной инфекцией и, по-видимому, связан с интродукцией одного штамма вируса, патогенного для человека, птиц и лошадей. Тем не менее, при выделении вируса, полученного от аллигаторов, в культуре клеток Vero, в отдельных случаях наблюдали удивительно раннее ЦПД (Nevarez, et al, 2005). Пока не выяснено, могут ли штаммы вируса, изолированные от аллигаторов, реплицироваться быстрее, чем штаммы от других животных или это доза-зависимый эффект, связанный с чрезвычайно высоким количеством вируса в зараженных тканях.
Вирусоносительство и выделение вируса
В настоящий момент роль рептилий в эпизоотологии ВЗН остается неизученной. Среди диких черепах с помощью РТГА не смогли выявить серопозитивных особей (Mitchell, el al, 2002). Сероконверсию отмечали у диких аллигаторов после вспышки заболевания среди птиц, однако титры антител оказались значительно ниже, чем у остро переболевших животных на фермах (Jacobson, 2004). У последних высокие титры сохраняются более 1 года после вспышки заболевания. По некоторым данным у заболевших аллигаторов отмечается высокая виремия и, по-видимому, значительное выделение вируса (Miller, et al, 2003). Исходя из данных о характере эпизоотических вспышек, предполагается, что ВЗН может распространяться среди чувствительных видов крокодилов более агрессивными путями, чем только трансмиссивно. Недавно было сообщено о парентеральной и оральной инокуляции вируса в экспериментальной группе аллигаторов (Klenk, et al, 2004). Это создает потенциальную опасность заражения людей, находящихся в прямом контакте с фекалиями и тканями животных.
Диагностика
Для серологической диагностики ВЗН у рептилий не применяют PRNT (реакцию нейтрализации редукции бляшек), принятую в диагностике арбовирусных болезней млекопитающих. Для прижизненного выявления сероконверсии используют недавно разработанную непрямую ELISA, основанную на полученных антивидовых поликлональных антителах кролика к IgG аллигатора (Jacobson, 2004). Для посмертной диагностики применяют специфический иммуноперидоксидазный тест, непрямую иммунофлуоресцентную окраску с использованием доступных коммерческих антиарбовирусных моноклональных антител к ВЗН млекопитающих, а также выделение вируса в культуре и ПЦР. Для изоляции вируса используют культивирование и субкультивирование на клеточных линиях Vero. ЦПД обычно наблюдают в течение 3-10 дней. RT-PCR была разработана Lanciotti, et al (2000). Для реакции использовали праймер к оболочечному гену, позволяющий выявлять вирусную РНК в материале от человека, птиц и насекомых-переносчиков.
Дифференциальная диагностика
Заболевание дифференцируют с любыми состояниями, характеризующимися неврологической симптоматикой.
Терапия
Не разработана. Профилактические меры включают строгую изоляцию всей группы животных, в которой зафиксировано заболевание, и борьбу с переносчиками вируса.
2. Болезни, вызываемые ДНК-содержащими вирусами.
2.1 Герпесвирусы
Вирусы семейства Herpesviridae - самые распространенные вирусные патогены среди людей и животных. Вирионы герпесвирусов состоят из капсида икосаэдрической формы диаметром 120-150 нм, окруженного внутренним тегументом и наружной оболочкой, имеющей многочисленные шипы до 8 нм в длину. Капсид окружает ядро вириона, состоящее из линейной 2-нитчатой ДНК с молекулярной массой 92-102 кД и окруженной белком. Вирионы имеют сложную организацию, включающую нуклеотид, суперкапсидную структуру и оболочку. В составе вириона определено до 32 белков.
Герпесвирусные частицы неоднократно наблюдали в тканях как здоровых, так и больных рептилий. Некоторые среди большого количества изолированных штаммов вируса способны вызывать вполне самостоятельные заболевания:
GPD - серопятнистая болезнь панциря морских черепах (Rebell, et al, 1975; Heines, et al, 1977);
Фибропапилломатоз морских черепах (Jacobson, et al, 1991);
LETD (Lung, eye, trachea disease) зеленых морских черепах (Curry, et al, 2000);
(THV) Герпесвироз (комплекс «стоматит/ринит/конъюктивит») сухопутных черепах (Harper, et al, 1982; и многие другие);
(LPD) Лимфопролиферативная болезнь сухопутных черепах (Mc. Arthur, 1998, 2000);
HHWE (Hemolytic-hemorrhagic-wasting episode) пантеровых черепах (Mc Arthur, 2000);
Вирусный папилломатоз лацертид (Raynaud, Adrian, 1976);
Стоматит ящериц (Wellehan, et al, 2003);
Некротический гепатит чаквалл (Wellehan, et al, 2003);
Заболевание ядовитых желез змей (Jacobson, 2000);
Лимфофолликулярный клоацит мисиссипских аллигаторов (Johnson, et al, 2005).
THV (герпесвироз сухопутных черепах)
Характеристика возбудителя
Болезнь сухопутных черепах, связанная с поражением верхних отделов респираторного и пищеварительного тракта, известна с начала 80-х годов ХХ века (Harper, et al, 1982). Впервые герпесвирус от заболевших в неволе черепах выделили Biermann, Blahak (1993). Затем антитела к вирусу герпеса у диких черепах впервые обнаружили две независимые рабочие группы: Marschang и Schneider (2002) от средиземноморской черепахи T.graeca в Турции и Origgi с соавторами (2002) от гоферовой черепахи G.agassizii в США. С конца 90-х годов вирусные эпизоотии отмечали среди многочисленных коллекций черепах Европы, США, ЮАР, Японии и Австралии. К настоящему времени вирус был выделен почти от 50 видов черепах. Наиболее чувствительны к вирусу герпеса черепахи рода Testudo, однако предполагается, что любые виды черепах, включая пресноводных, потенциально восприимчивы к этому заболеванию.
Клинические признаки и патологоанатомические изменения
Патогномоничным симптомом считается наличие дифтеритических пленок на слизистой языка, ротовой полости, носоглотки, трахеи и пищевода. Кроме этого характерны ринит, конъюктивит, отек вентральной стороны шеи, птиализм (наиболее ранний симптом), пневмония и эмфизема легких, неврологические расстройства, лимфопролиферация, изредка диарея. Дифтеритические бляшки при экспериментальной инфекции сохраняются до 3-х недель, а затем спонтанно исчезают. Инкубационный период варьирует от нескольких дней до года. В типичном случае клинические симптомы возникают в течение 3-4 недель после покупки животного или после зимовки. Переболевшие особи остаются латентными носителями на неопределенно долгий срок (до 25 лет). У видов, не вырабатывающих высоких титров антител, смертность составляет 80-100%. Среди средиземноморских черепах смертность достигает 60%; у взрослых черепах болезнь чаще всего принимает хроническое течение.
Вирус имеет повышенный тропизм к тканям ЦНС, однако макроскопически выявляется катаральный или дифтероидно-некротический стоматит, глоссит и фарингит. В меньшей степени подобные изменения выражены в пищеводе, трахее и легких. Реже встречается гиперплазия селезенки, гепатомегалия, катаральный энтерит. Характерна инфильтрация преимущественно мононуклеарами, гетерофилы появляются при вторичной бактериальной инфекции. Вирусные эозинофильные включения можно наблюдать в ядрах клеток головного мозга (особенно продолговатого) наряду с периваскулярными лейкоцитарными «манжетами». Чаще всего включения обнаруживают в эпителии языка, выстилке ротовой полости и трахеи, в ЖКТ (от пищевода до двенадцатиперстной кишки), легких, печени, реже в почках и мочевом пузыре, селезенке. Лучше всего они видны на стыках между некротизированными и нормальными клетками.
Антигенная вариабельность и родство
В настоящее время выделено более 100 изолятов вируса. Между штаммами существуют достоверные различия по антигенным и генетическим свойствам. Marschang, et al (2004) выделяет два независимых серотипа вируса среди штаммов, выделенных у черепах рода Testudo и некоторых африканских видов. Blahak, Tornede (2004) говорят о существовании 3-х серотипов вируса, причем серотип III характерен в основном для среднеазиатских черепах A.horsfieldi. Идентичность по секвенированному гену вирус-специфической рибонуклеотид-редуктазы у штаммов вируса, выделенных от американских гоферовых черепах и балканской черепахи, составила только 72%.
Существуют несомненные различия по вирулентности, патогенности и напряженности вирус-индуцированного иммунитета между различными штаммами вируса. До сих пор остается неизученным антигенное и генетическое родство между вирусами, вызывающими THV и другие заболевания сухопутных и морских черепах герпесвирусной этиологии. Данные о секвенировании генов герпесвирусов, изолированных от рептилий, позволяют отнести их всех к подсемейству Alphaherpesvirinae.
Вирусоносительство и выделение вируса
При первичном контакте восприимчивых животных с вирусом развивается остро протекающее заболевание, имеющее тенденцию к подострому или хроническому течению у взрослых черепах. Заболевание протекает в течение 2-20 дней и заканчивается 60-100% гибелью животных в зависимости от их возраста и вида. Переболевшие черепахи вырабатывают антитела; максимальный титр отмечают приблизительно через 6 недель после начала заболевания, однако его величина различается у разных видов черепах. Из черепах рода Testudo наименьший титр характерен для T.hermanni, и менно этот вид тяжелее всего переносит THV.
При первичном заражении вероятно существование латентного периода, так как при экспериментальной инфекции через 40 дней после заражения в тканях обнаруживают только не реплицирующуюся вирусную ДНК. Переболевшие черепахи могут оставаться латентными вирусоносителями в течение всей жизни. При экспериментальной инфекции выделить вирус от переболевших животных пока не удалось. Однако при провоцирующих эпизодах (зимовка, стресс, транспортировка, гормональные факторы, сопутствующие заболевания) вирус может активизироваться и вызывать рецидивы, напоминающие первичное остро протекающее заболевание. Введение латентных носителей в группы неиммунных животных в любой момент способно вызвать у них манифестное заболевание.