Рис. 3. Белок-белковые взаимодействия Cdc13 из H. polymorpha, установленные при помощи дрожжевой двугибридной системы
А - колонии клеток AH109, экспрессирующие пары указанных белков (слитых с Gal4-BD (GBD) или с Gal4-AD (GaD)), были разбавлены до A600 ~ 0.05, высеяны на чашки со средой SC без указанных аминокислот (приведены под чашками) и проинкубированы при 30°С в течение 4 дней. Для каждой пары белков высевали по две колонии соответствующего штамма. Б-то же, что и А, только с другими парами белков. На чашки высевали клетки с A600 ~ 0.5 и четыре десятикратных разведения теломеразы на теломеры, хотя механизм этого привлечения иной, чем в S. cerevisiae.
В данной работе идентифицирован белок H. polymorpha, способный выполнять функцию фактора, ассоциированного с 3' - выступающим концом тело - мер. Как и Cdc13 из дрожжей рода Candida, обнаруженный нами белок по своей структуре значительно отличается от гомолога в S. cerevisiae. Наши результаты свидетельствуют в пользу того, что HpCdc13 взаимодействует с каталитической субъединицей теломеразы, что, вероятно, важно для ассоциации теломеразы и З' - конца теломер. Полученные данные расширяют понимание механизмов регуляции длины теломер у эукариотических организмов.
Список литературы
теломера хромосома белок
1. Shay J.W., Wright W.E. // Nat. Rev. Genet. 2019. V. 20. №5. P. 299-309.
2. Nugent C.I., Hughes T.R., Lue N.F., Lundblad V. // Science. 1996. V. 274. №5285. P. 249-252.
3. Lin J.-J., Zakian V.A. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V. 93. №24. P. 13760-13765.
4. Mersaoui S.Y., Wellinger R.J. // Curr. Genet. 2019. V. 65. №1. P. 109-118.
5. Garvik B., Carson M., Hartwell L. // Mol. Cell. Biol. 1995. V. 15. №11. P. 6128-6138.
6. Sun J., Yang Y., Wan K., Mao N., Yu T.-Y., Lin Y.-C., DeZwaan D.C., Freeman B.C., Lin J.-J., Lue N.F., et al. // Cell Res. 2011. V. 21. №2. P. 258-274.
7. Qi H., Zakian V.A. // Genes Dev. 2000. V. 14. №14. P. 17771788.
8. Chandra A., Hughes T., Nugent C., Lundblad V. // Genes Dev. 2001. V. 15. №4. P. 404-414.
9. Meier B., Driller L., Jaklin S., Feldmann H.M. // Mol. Cell. Biol. 2001. V. 21. №13. P. 4233-4245.
10. Hughes T.R., Weilbaecher R.G., Walterscheid M., Lundblad V. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. V. 97. №12. P. 6457-6462.
11. Mitton-Fry R.M., Anderson E.M., Theobald D.L., Glustrom L.W., Wuttke D.S. // J. Mol. Biol. 2004. V. 338. №2. P. 241-255.
12. Mitchell M.T., Smith J.S., Mason M., Harper S., Speicher D.W., Johnson F.B., Skordalakes E. // Mol. Cell. Biol. 2010. V. 30. №22. P. 5325-5334.
13. Hsu C.-L. // Nucl. Acids Res. 2004. V. 32. №2. P. 511-521.
14. Mason M., Wanat J.J., Harper S., Schultz D.C., Speicher D.W., Johnson F.B., Skordalakes E. // Structure. 2013. V. 21. №1. P. 109-120.
15. Mersaoui S.Y., Bonnell E., Wellinger R.J. // Nucl. Acids Res. 2018. V. 46. №6. P. 2975-2989.
16. Pennock E., Buckley K., Lundblad V. // Cell. 2001. V. 104. №3. P. 387-396.
17. Chen H., Xue J., Churikov D., Hass E.P., Shi S., Lemon L.D., Luciano P., Bertuch A.A., Zappulla D.C., Gйli V., et al. // Cell. 2018. V. 172. №1-2. P. 331-343.e13.
18. Hang L.E., Liu X., Cheung I., Yang Y., Zhao X. // Nat. Struct. Mol. Biol. 2011. V. 18. №8. P. 920-926.
19. Rice C., Skordalakes E. // Computational Struct. Biotechnol. J. 2016. V. 14. P. 161-167.
20. Steinberg-Neifach O., Lue N.F. // Front. Genet. 2015. V. 6. Р. 162.
21. Lue N.F., Chan J. // J. Biol. Chem. 2013. V. 288. №40. P. 2911529123.
22. Sun J., Yu E.Y., Yang Y., Confer L.A., Sun S.H., Wan K., Lue N.F., Lei M. // Genes Dev. 2009. V. 23. №24. P. 2900-2914.
23. Yu E.Y., Sun J., Lei M., Lue N.F. // Mol. Cell. Biol. 2012. V. 32. №1. P. 186-198.
24. Lue N.F., Zhou R., Chico L., Mao N., Steinberg-Neifach O., Ha T. // PLoS Genet. 2013. V. 9. №1. P. e1003145.
25. Steinberg-Neifach O., Wellington K., Vazquez L., Lue N.F. // Nucl. Acids Res. 2015. V. 43. №4. P. 2164-2176.
26. Gietz R.D., Schiestl R.H. // Nat. Protocols. 2007. V. 2. №1. P. 31-34.