Площадь паракортикальной зоны коркового вещества лимфоузла печени через 1сутки уменьшалась, что говорит о реакции паренхимы лимфоузла на воздействие, поступающей из печени лимфы, снижением площади структур, относящихся к Т - зависимым зонам. Это, по-видимому, происходит вследствие гибели клеток из-за токсической стресс-реакции, в ответ на хроническое воздействие хлорида кадмия, и объясняется деятельностью макрофагов, воздействующих на пролиферацию Т-лимфоцитов (рисунок 15).. Макрофаги при встрече с токсикантом и продуктами его метаболизма, изменяют свой метаболизм, что приводит к, появлению продуктов супероксидного радикала и перекиси водорода. Через 1 сутки после интоксикации, объемная плотность паракортекса снижалась на 16% и 29%, соответственно дозе токсиканта в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Сорбент, оказывая положительное действие, повышал показатели на 8% и 6%. Площадь первичных лимфоидных узелков в корковом веществе через 1 сутки уменьшалась, а площадь вторичных лимфоидных узелков увеличивалась. Развитие В-зависимого гуморального ответа на воздействие токсиканта сопровождалось расширением площади вторичных лимфоидных узелков с активным формированием центров размножения и разрастанием медуллярных тяжей мозгового вещества что, по всей видимости, служит необходимым условием эффективного образования антител. Через 1сутки площадь вторичных лимфоидных узелков возрастала: на 55% и 73%, соответственно дозе токсиканта в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. (рисунок 16). Это свидетельствует о разрастании, в ответ на интоксикацию, площади В-зависимых зон, вследствие развития иммуннопролиферативных процессов в центрах размножения. Известно, что регуляция функций В-лимфоцитов при развитии иммунного ответа осуществляется не только Т-лимфоцитами, которые действуют путем кратковременных прямых контактов, но и вспомогательными клетками: макрофагами, цитокинами макрофагального происхождения, интердигитирующими клетками и фолликулярными дендритными клетками. Активация В-лимфоцитов, вследствие взаимодействия со специфическим антигеном, по-видимому, приводит к появлению чувствительности к продуктам активированных макрофагов, которые значительно стимулируют В-лимфоциты к пролиферации и дифференциации. Воздействие таган-сорбента снижало указанные показатели на 16% и 13% (рисунок 16). Это показывает положительный эффект действия сорбента и свидетельствует о выраженности эффекта при меньшей дозе кадмия в 1,5мг/кг м.т. Расширялась площадь мозговых синусов (рисунок 17) и мозговых тяжей (рисунок 18), особенно у животных, получавших дозу химиката в 3мг/кг м.т. Исходя из сказанного, можно заключить, что, поступающая из печени лимфа, содержащая токсикант и его метаболиты подвергается обработке в регионарных лимфоузлах, реагирующих на введение хлористого кадмия очень характерно - нарастанием площади структур, занимаемых В-зонами: мозговых тяжей и вторичных лимфоидных узелков. Полученные данные свидетельствуют о синхронном с печенью участии регионарных лимфоузлов в гомеостатических реакциях организма при кадмиевой интоксикации.
Рисунок 15 - Динамика изменений объемной плотности паракортикальной зоны в лимфатических узлах печени крыс, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозах 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т., а также коррекции таган-сорбентом
Рисунок 16 - Динамика изменений объемной плотности вторичных лимфоидных узелков в лимфатических узлах печени крыс, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозах 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т., а также коррекции таган-сорбентом
Рисунок 17 - Динамика изменений объемной плотности мозговых синусов в лимфатических узлах печени крыс, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозах 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т., а также коррекции таган-сорбентом
Во всех структурных компонентах паренхимы лимфоузла печени, через 1сутки после экзотоксикоза, развивались иммуноморфологические реакции в виде пролиферации, бласттрансформации и дифференциации клеток, в ответ на воздействие токсиканта. Морфодинамика цитологического состава разных зон лимфоузла сопровождалась неодинаковыми по интенсивности и направленности качественными изменениями клеток разных популяций. Это, по-видимому, зависело от морфофункциональных особенностей зоны и от дозы кадмия. Через 1 сутки клеточные сдвиги во всех исследуемых зонах печеночного лимфоузла характеризовались уменьшением числа малых и средних лимфоцитов и увеличением больших, бластных форм лимфоцитов (рисунок 19). Во всех зонах отмечались фагоцитарная, плазмоцитарная, тучноклеточная реакции. В мозговых тяжах и во вторичных лимфоидных узелках отмечалось увеличение численности плазмобластов, плазмоцитов, макрофагов, дегенерирующих и тучных клеток, клеток Мотта, а также митозов. Наиболее существенным морфологическим признаком экзотоксикоза является возрастание числа дегенерирующих клеток. Это объясняется прямым токсическим воздействием кадмия, присутствующего в крови и лимфе, на лимфоузел. Возможно попадание в лимфоузел этих клеток из зоны лимфосбора, то есть из печени в составе афферентной лимфы. Увеличение числа дегенерирующих клеток сопровождалось возрастанием числа макрофагов, что свидетельствует об активации фагоцитарной реакции (рисунок 19).
Рисунок 18 - Клеточная структура паренхимы лимфоузла печени крысы через 1 сутки, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозе 3мг/кг м.т. Окраска азур II и эозином. Ув. Ч900
Рисунок 19 - Клеточная структура паренхимы лимфоузла печени крысы через 1 сутки, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозе 3мг/кг м.т. Окраска азур II и эозином. Ув. Ч600
Все указанные изменения при дозе кадмия 3мг/кг м.т. были больше выражены.
Через 7 суток, под влиянием компенсаторных процессов, в структуре лимфоузлов печени наблюдались позитивные сдвиги. Так, объемная плотность капсулы, относительно значений предыдущего срока, снижалась в обеих группах животных на 10%. Таган сорбент далее уменьшал эти значения еще на 14% и 10%. Наблюдалось возрастание площади паракортикальной зоны на 7% и 11%, соответственно дозе токсиканта 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. После коррекции эти значения повышались еще на 7%, в обеих группах. Площадь вторичных лимфоидных узелков, относительно данных 1-х суток, под влиянием компенсаторных процессов, снижалась на 12% и 8%, соответственно дозе химиката в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Коррекция сорбентом снижала эти величины еще на 13% и 12%. Площадь мозговых тяжей на 7-е сутки уменьшалась, в обеих группах животных, на 5%. При сорбентной терапии этот показатель снижался еще на 10% и 9%. Значительно уменьшалась на 7-е сутки площадь мозговых синусов: на 11% и 9%, соответственно дозе хлорида кадмия в 1,5мг/кг и в 3мг/кг м.т. Таган- сорбент снижал ее еще на 11%, в обеих группах. В результате сужения синусов на 7-е сутки эксперимента происходило более тесное контактирование протекающей через узел лимфы с паренхимой узла, вследствие чего создавались условия для усиления обменных процессов между лимфой и клеточными элементами узла, что усиливало процессы детоксикации. В цитоархитектонике структур лимфатических узлов печени на 7-е сутки сохранялась тенденция к снижению числа малых и средних лимфоцитов и возрастанию больших, бластных форм лимфоцитов, которые подвергались дальнейшей пролиферации и дифференциации. Происходило возрастание зрелых клеток плазмоцитарного ряда - плазмоцитов, увеличивалось количество макрофагов, дегенерирующих и тучных клеток, нейтрофилов, эозинофилов, а также митозов. При сорбентной терапии наблюдались позитивные сдвиги в цитоархитектонике всех структур лимфоузлов.
К 21-м суткам наблюдения в структурной организации всех зон лимфоузлов отмечались восстановительные явления. Однако исходного уровня показатели не достигали. Так, объемная плотность капсулы оставалась на 21-е сутки выше контрольных величин на 12% и 20%, соответственно дозе хлорида кадмия в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Это свидетельствует, по-видимому, о склеротических изменениях в капсуле, развившихся после отека. Таган сорбент снижал показатели объемной плотности капсулы на 9% и на 8%. Объемная плотность паракортикальной зоны на 21 сутки частично восстанавливалась, но оставалась меньше контрольных значений на 5% и 12%. Коррекция сорбентом повышала эти показатели еще на 5% и 4%. На 21-е сутки происходило снижение объемной плотности вторичных лимфоидных узелков - на 10%, в обеих группах животных. Но эти показатели оставались выше контрольных показателей: на 23% и 43%, соответственно дозе хлорида кадмия в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Сорбентная терапия уменьшала указанные показатели еще на 12% и на 7%. Полученные после коррекции значения объемной плотности вторичных лимфоидных узелков у животных, получавших кадмий в дозе 1,5мг/кг, достигали контрольных величин. В то же время, у животных, получавших хлористый кадмий в дозе 3мг/кг м.т., показатели были выше контрольных значений, поэтому для их восстановления до исходного уровня требовалась более длительная коррекция. Все сказанное свидетельствует о дозозависимости восстановительных процессов при коррекции Таган-сорбентом.
Структура мозгового вещества на 21 сутки также частично восстанавливалась. Площадь мозговых синусов в этот срок, относительно данных 7-х суток, уменьшалась, что свидетельствует о повышении депонирующей функции лимфоузла, вследствие чего повышался контакт между протекающей лимфой и паренхимой лимфоузла. Это способствовало усилению обменных процессов в печеночном узле, а в целом улучшению детоксикационной функции узла и способствовало приближению типа лимфоузла печени к компактному. Но, несмотря на это, значения объемной плотности мозговых синусов на 21 сутки оставались выше контрольных показателей на 9% и 18%, соответственно дозе токсического вещества. Корково-мозговой индекс возрастал на 2% и 5%, соответственно дозе хлорида кадмия, что говорит о том, что на 21 сутки компактный тип лимфоузла печени частично восстанавливается. Таган- сорбент повышал далее этот показатель еще на 7% и 6%, что полностью восстанавливал компактный тип лимфоузла печени (рисунок 21). Площадь мозговых тяжей к 21 суткам также уменьшалась, но оставалась выше контрольных данных на 13% и 16%, соответственно дозе химиката в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. После коррекции, показатели мозговых тяжей, снижались еще на 10% и 6%. Эти показатели соответствовали контрольным величинам, особенно у животных, получавших химикат в дозе 1,5мг/кг м.т.
Рисунок 20 - Структура лимфоузла печени крысы, не получавшей сорбентную терапию, на 21-е сутки, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозе 1,5мг/кг м.т. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.Ч100
Рисунок 21 - Структура лимфоузла печени крысы, получавшей таган-сорбент, на 21 сутки, после хронического экзотоксикоза. хлористым кадмием в дозе 1,5мг/кг м.т. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.Ч100
Морфометрическое исследование цитоархитектоники печеночных лимфатических узлов на 21 сутки выявило тенденцию к восстановлению, под действием компенсаторных механизмов. При этом во всех структурных зонах лимфатического узла возрастало число малых и средних лимфоцитов, и снижалось количество больших, бластных форм лимфоцитов. На 21 сутки, после интоксикации кадмием, в структурных компонентах лимфатического узла печени снижалось количество и других клеток: макрофагов, дегенерирующих и тучных клеток, клеток Мотта, а также митозов. Снижалось число плазмобластов, в то же время, количество плазмоцитов увеличивалось. При этом цитоархитектоника лимфатических узлов на 21 сутки восстанавливалась лишь частично, показатели клеток были выше контрольных величин. Таган-сорбент способствовал дальнейшему возрастанию численной плотности малых и средних лимфоцитов, относительно данных животных без коррекции, приближая их к контрольным значениям (рисунок 23). При сорбентной терапии наблюдалось дальнейшее снижение численной плотности остальных клеток лимфоузла печени до контрольного уровня. Особенно это было выражено в лимфоузлах животных, получавших меньшую дозу хлорида кадмия в 1,5мг/кг м.т., что говорит о дозозависимости влияния таган-сорбента. В то же время, численная плотность клеток лимфатического узла животных, получавших двойную дозу токсиканта в 3мг/кг м.т., не всегда достигала контрольного уровня. Это свидетельствует о том, что корригирующее воздействие сорбента дозозависимо и больше выражено при меньшей дозе хлористого кадмия.
Известно, что лимфоузел представляет собой орган для перераспределения жидкости и форменных элементов между кровью и лимфой в зависимости от конкретных гемо- и лимфодинамических ситуаций. [Бородин Ю.И., 2005; Гашев А.А. и Zawiejia D.C., 2005]. Правильное протекание процессов фильтрации и резорбции в лимфоузле находится в прямой зависимости от структурно-функционального состояния эндотелиоцитов его обменных кровеносных капилляров [Zawieja D.C., Kossman E. and Pullin J., 1999; Петренко В.М., 2006].
Рисунок 22 - Клеточная структура вторичных лимфоидных узелков паренхимы лимфоузла печени крысы, получавшей таган-сорбент, на 21-е сутки, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозе 3мг/кг м.т. Окраска азур II и эозином. Ув.Ч600
Рисунок 23 - Клеточная структура мозговых тяжей паренхимы лимфоузла печени крысы, получавшей таган-сорбент, на 21-е сутки, после хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозе 3мг/кг м.т. Окраска толуидиновым синим. Ув.Ч600
Исследование структурной организации эндотелиоцитов обменных кровеносных капилляров лимфоузла печени при кадмиевой интоксикации показало значительные нарушения в указанных клетках функций: энергообеспечения клеток, синтеза белков, транспортной функции. Доказательством этого является значительное расширение объемной плотности ГЭР, уменьшение числа рибосом, отек и нарушение структуры митохондрий, снижение количества микровезикул в эндотелиоцитах. Морфометрический анализ показал, что объемная плотность ГЭР в ЭЦ через 1 сутки возрастала на 39% и на 66%, соответственно дозе хлорида кадмия в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Сорбентная терапия снижала этот показатель на 10% и 7%. Численная плотность прикрепленных и свободных рибосом, у животных, отравленных дозой токсического вещества в 1,5мг/кг м.т. уменьшалась на 56% и 49%. В ЭЦ лимфоузлов животных, получавших двойную дозу хлорида кадмия в 3мг/кг м.т., количество прикрепленных и свободных рибосом уменьшалось на 67% и 54%, соответственно. Коррекция таган-сорбентом повышала количество прикрепленных и свободных рибосом, при дозе токсиканта 1,5мг/кг м.т., на 15%, для обоих видов рибосом. При дозе токсического вещества 3мг/кг м.т. после коррекции показатели рибосом повышались на 12% и 14%, соответственно вида рибосом. Увеличивалась через 1 сутки объемная плотность митохондрий, за счет их отека, на 27% и 32%, соответственно группе животных. В данных органоидах практически отсутствовали кристы, что приводило к нарушению энергообеспечения клеток. Коррекция таган-сорбентом снижала эти величины на 9% и 10%. Отмечалось возрастание объемной плотности лизосомо-вакуолярного аппарата ЭЦ, что связано с активизацией процессов фагоцитоза в этих клетках. Объемная плотность лизосом возрастала: на 61% и 71%, соответственно дозе хлорида кадмия в 1,5мг/кг и 3мг/кг м.т. Коррекция таган-сорбентом снижала этот показатель лизосом на 7% и 6%. Объемная плотность микропиноцитозных везикул, отражающая интенсивность транспортных процессов в клетках, снижалась на 47% и 51%, соответственно группе животных. Сорбент увеличивал объемную плотность микровезикул на 16% и 14%. Все изменения носили дозозависимый характер: при дозе токсиканта в 3мг/кг м.т. нарушения были больше выражены. На 7-е сутки, в результате развития компенсаторных процессов, в ультраструктуре ЭЦ обменных капилляров лимфоузлов наблюдались позитивные сдвиги. К 21 суткам внутриклеточная структура эндотелиоцитов частично восстанавливалась, но многие нарушения еще сохранялись, особенно у животных с дозой кадмия в 3мг/кг м.т. Коррекция таган - сорбентом существенно снижала степень повреждений, способствуя восстановительным процессам, которые у животных, получавших хлорид кадмия в дозе 1,5мг/кг, протекали более интенсивно.