Определение дефицитов нейтрофилов
Наиболее распространенным методом количественного определения и характеристики морфологических дефектов нейтрофилов является лейкограмма и цитологические исследования с использованием световой и электронной микроскопии.
Для определения хемотаксической активности нейтрофилов применяют метод исследования миграции лейкоцитов с использованием камеры Бойдена.
Метод основан на разделении микропористым фильтром в растворе двух реагирующих компонентов: нейтрофилов и хемотаксических агентов (например, C5a-des Arg.), которые помещаются в нижнюю камеру и создают концентрационный градиент. Помещенные в верхнюю камеру ней-трофилы мигрируют вдоль градиента и собираются на нижней поверхности фильтра. После стандартной инкубации фильтры извлекают, окрашивают и подсчитывают количество клеток.
Метод довольно прост и отличается весьма высокой воспроизводи-мостью. Этот же принцип лежит в основе метода клеточной миграции под агарозным гелем, который используется для определения хемотаксического индекса. Фагоцитарный индекс нейтрофилов определяется путем подсчета количества поглощенных бактерий одной клеткой после инкубации клеток пациента со стандартными препаратами St.aureus или E.coli и окраски полученных мазков. Модификацией этого теста является метод определения бактерицидной активности, при котором отмытая суспензия клеток инкубируется с бактериальной суспензией, затем смесь наносится на поверхность кровяного агара и через определенное время подсчитывается ко-личество выросших бактериальных колоний. Оба метода требуют стандартизации для использования в каждой конкретной лаборатории и сведений об антибиотиковой терапии, которая может быть причиной недостоверных результатов или ошибок в их интерпретации. Для определения фагоцитарной метаболической (кислородозависимой) активности нейтрофилов используется реакция восстановления нитросинеготетразолия (НСТ). Тест включает в себя инкубацию нейтрофилов с НСТ in vitro, и по формированию нерастворимых окрашенных зерен формазана можно судить о восстановлении НСТ супероксидным радикалом, образующимся при активации фагоцитов. Отсутствие осадка свидетельствует о неспособности клеточной популяции фагоцитов к метаболизму. Очень важным при получении проб клеток крови животных является отсутствие гепарина в антикоагулянте, так как высокая концентрация гепарина может негативно влиять на результаты этого теста.
Другим методом оценки "респираторного взрыва" в фагоцитах является измерение спонтанной и индуцированной хемилюминесценции. Феномен респираторного (или метаболического) взрыва связан со значительным увеличением кислорода, поглощаемого лейкоцитами при фагоцитозе, в результате чего происходит образование супероксидного радикала (Оз-) и перекиси водорода. Все эти соединения обладают микробоцидными свойствами, и их идентификация представляет собой важный этап в оценке функциональной активности фагоцитарных клеток.
Определение дефицита комплемента
Количественное определение компонентов системы комплемента (главным образом С3) проводят с использованием специфических антисывороток методом радиальной иммунодиффузии.
Уменьшение количества СЗ в крови отмечается при лим-фоцитарном тиреоидите и гломерулонефрите, связанным с образованием иммунных комплексов у собак. При ревматоидном артрите наблюдается значительное снижение концентрации комплемента в суставной жидкости собак. В будущем рутинное использование РИД для определения уровня С3 у животных несомненно будет полезным для диагностики иммунодефицитов и других болезней, связанных с иммунной системой.
Для определения уровня комплемента в крови используется метод определения гемолитической активности комплемента. Принцип метода заключается в том, что иммунные комплексы активируют систему комплемен-та с образованием мембраноатакующего компонента. Исследуемую сыворотку крови инкубируют с эритроцитами барана, нагруженными антителами, в результате чего происходит лизис эритроцитов за счет присутствия комплемента в испытуемой пробе. Активность комплемента выражают в условных гемолитических единицах (CH50). За CH50 принимают последнее разведение сыворотки, которое вызывает 50% гемолиз стандартного числа сенсибилизированных эритроцитов. Этот метод может быть использован для определения всех компонентов системы комплемента.
Заключение
Иммунный статус организма - это показатели работы иммунной системы, определяющие состояние иммунной системы по количественным и функциональным показателям на определенном этапе развития организма или на определенной стадии развития заболевания.
Оценка иммунного статуса животных должна проводиться комплексно с учетом индивидуальных, генетических, видовых, физиологических, возрастных особенностей, клинического их состояния, пола, условий выращивания, биологических и технологических факторов воздействия на организм. Значительную информацию о состоянии иммунитета дает изучение того или иного показателя в динамике индивидуально у каждого животного и в группе. Чем полнее представлена информация о животных и условиях их существования, тем точнее будет дана оценка иммунного статуса и выявлены отклонения в иммунной системе.
Исследования иммунологического статуса необходимы при любом подозрение на сбой работы иммунной системы - тяжелое течение инфекционных болезней, хронические или часто рецидивирующие инфекционные заболевания, наличие очагов хронического воспаления, заболевания соединительной ткани, аутоиммунные процессы и др.
Оценка иммунного статуса помогает уточнить диагноз заболевания, определить лечебную тактику. При отклонениях в работе иммунной системы больному могут быть назначены иммунотропные препараты такие как иммуностимуляторы, иммуномодуляторы или иммуносупрессоры, так же может быть проведена заместительная терапия с помощью введения иммунных сывороток, иммуноглобулинов, лейкоцитарной массы, препаратов интерферонов.
Библиографический список
1. «Иммунологический мониторинг в ветеринарии. Тенденции развития, возможности и реальность» Федоров Ю.Н. Научная статья в журнале «С/Х биология» №2 , 2012г. 3-9стр.
2. Хаитов Рахим Мусаевич: Иммунология. Издательство: ГЭОТАР-Медиа. 2013г -528 стр.
3. Кисленко Виктор Никифорович, Колычев Николай Матвеевич, Госманов Рауис Госманович: Ветеринарная микробиология и иммунология. Учебник. Гриф Министерства сельского хозяйства. Издательство: ГЭОТАР-Медиа. 2012-752 стр.
4. Ефанова Л. И., Сайдулдин Е. Т. Защитные механизмы организма, иммунодиагностика и иммунопрофилактика инфекционных болезней животных /Л. И. Ефанова, Е. Т. Сайдулдин. - Воронеж, 2004,стр. 322-323.
5. Методические рекомендации по оценке и коррекции иммун-ного статуса животных / А.Г.Шахов и др.- Воронеж, 2005, 113с.