Образцы из ротовой полости, используемые для диагностики системных заболеваний, - слюна, десневая жидкость, мазок, зубной налет и испарения из полости рта. Опубликованные данные указывают также на успешное применение саливарных образцов для выявления и прогнозирования восприимчивости к системным заболеваниям. Способность точно оценивать биомаркеры в образцах, полученных из полости рта, зависит от биохимического характера маркеров, определения источника, типа образца и механизма, с помощью которого маркер попадает в ротовую полость. В 2006 r. стали применять слюну для разработки портативных диагностических платформ для быстрого обнаружения и анализа стоматологических биомаркеров - РОС.
Анализ слюны для экспертизы ДНК. Наиболее широко используемый вид образца из полости рта - это мазок, при исследовании которого можно получить дезоксирибонуклеино-вую кислоту (ДНК) образца. Это используется многие годы в судебно-медицинских исследованиях, а в последнее время - для анализа одиночных нуклеотидных полиморфизмов мутаций, связанных со специфическими заболеваниями
За счет выделения ДНК из слюны возможно типирование АВО. К. Aki и соавт. показали, что достаточно простой и широко используемый в судебно-медицинской области метод проточной цитометрии может быть полезен для сравнения различий между экспрессией антигенов A и/или B и Н красных кровяных клеток с различным фенотипом и методом PASA для определения генотипа cisA в родословной.
Образец ДНК может быть взят из различных областей в/на теле человека, а проба слюны удобна для использования: ротовой ершик помещают в стабилизированную для транспортировки среду и отправляют в лабораторию для анализа. Генотипирование лиц с нарушением последовательности ДНК имеет коммерческий успех, однако его медицинское значение спорно и не отвечает научной точности.
Определение гормонов в слюне. Анализ образцов из полости рта для определения кортизола, эстриола, эстрогена, тестостерона не только является коммерчески более доступным, но и обеспечивает точное обнаружение этих гормонов.
Уровень стероидных гормонов (например, сульфатированные стероиды DHEA-S) достоверно определяется в слюне, а титрование отражает его уровень в плазме крови, однако эти показатели не очень точно коррелируют между собой. Данный факт свидетельствует о необходимости качественного сравнения количественного анализа биомаркеров, а для получения количественного результата, например при анализе уровня глюкозы или DHEA-S, необходимо определять соотношение слюна/плазма. G. Lac и соавт. измеряли уровень дегидроэпиандростерон-сульфата и кортизола в слюне при психопатических расстройствах, связанных с буллингом на работе, у 41 пациента (группа BW) и у 28 психически здоровых людей (группа С). Образцы слюны собирали при пробуждении (7 ч утра), через 30 и 60 мин после пробуждения, а также через каждые 2 ч до 13 ч. У пациентов группы BW концентрация дегидроэпиандростерон-сульфата была более высокой, разницы в уровне кортизола не наблюдали.
Биомаркеры слюны для диагностики инфекционных заболеваний. Многие молекулы, полученные из слюны или десневой жидкости, используются в качестве диагностических биомаркеров заболеваний полости рта, включая состояния, вызванные грибами (Candida), вирусами папилломы человека (ВПЧ), вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ), цитомегаловирусом (ЦМВ) и бактериями (несколько видов, участвующих в заболеваниях пародонта и кариесе).
Орофарингеальный кандидоз является одним из наиболее распространенных заболеваний полости рта, чаще всего вызван CandidaAlbicans, изначально был описан как псевдо-мембранозный, гиперпластический и эритематозный, а хроническое наличие наблюдается также на коже и слизистых оболочках. Недавнее исследование показало, что микрофлора слюны состоит из Candida - 75%, Cladosporium
- 65%, Aureobasidium и Saccharomycetales - 50%, Aspergillus
- 35%, Fusarium - 30% и Cryptococcus - 20%. Диагноз орального кандидоза основывается на наличии культуры возбудителя в пробирке или идентификации путем визуализации под микроскопом. На сегодняшний день слюна применяется в основном для выделения возбудителя, о наборах для обнаружения антигена Candida уже сообщалось [16]. Экспериментальные попытки были также сделаны для обнаружения слюнных IgA- или IgG-антител к Candida, но иммунодиагностика остается недостижимой из-за различия в чувствительности и специфичности различных анализов при обнаружении различных антигенов Candida.
Распространенными являются заболевания полости рта, вызванные ВПЧ, вирусами простого герпеса типа 1 и 2, ЦМВ, вирусом ветряной оспы (афтозный тип), вирусом герпеса человека_8. Эти вирусы более часто встречаются у пациентов с иммунодефицитом, особенно с вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ)/синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД), не получающих высокоактивной антиретровирусной терапии (ВААРТ). Во многих случаях возбудитель вызванного заболевания полости рта был представлен оппортунистической или вторичной инфекцией и считался ранним проявлением СПИДа у пациентов, инфицированных ВИЧ. Частота многих связанных со СПИДом оральных проявлений меняется, но увеличивается в отсутствие ВААРТ, и может свидетельствовать о неадекватном лечении ВААРТ, развитие лекарственной устойчивости или о терапевтической неудаче. Ученые подтвердили, что саливарный тест для выявления антител к ВИЧ так же чувствителен и специфичен, как и анализ крови, что привело к значительному увеличению тестирования на ВИЧ в различных местах, в том числе в отделениях неотложной помощи, в клиниках при заболеваниях, передающихся половым путем, в центрах здоровья населения, в банях, а в последнее время и на установках и инструментах в стоматологических наборах. Возможность точного определения антител к ВИЧ говорит о возможности выявления антител и ко многим другим патогенам. По последним данным литературы, это большое число вирусных и бактериальных патогенов. Стандартный подход к клинической лабораторной диагностике ВИЧ - это тестирование сыворотки или плазмы крови на иммуноферментном анализаторе и при положительном результате - вестерн-блот. Слюна успешно используется в лабораторной диагностике для выявления ВИЧ-антигена и антител в различных нуклеиновых и иммунологических форматах и микрофлюидных диагностических приборах.
Используя экспериментальные методики, обнаружили дефензины в слюне, что может быть автоматизировано. Экспериментально обнаружен ВПЧ в образцах слюны с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), и эта методика была также использована для обнаружения различных типов ВПЧ, результаты были обнадеживающие, что говорит о необходимой оптимизации тестирования. Отклонения ДНК при ВЭБ, обнаруженные методом ПЦР, показали в крови и слюне аналогичные результаты у ВИЧ-инфицированных пациентов. Нестимулированная слюна также является надежным методом обнаружения ЦМВ с помощью ПЦР в поддесневых бляшках у больных с хроническим периодонтито. Образцы слюны были успешно использованы для прямого генотипирования штаммов ЦМВ новым методом ПЦР-полиморфизма длины рестрикционных фрагментов в сочетании с капиллярным электрофорезом фрагментов для генотипирования.
Диагностика кариеса. Показано, что у молодых людей с низкой буферной емкостью слюны интенсивность кариеса выше, чем при высокой буферной емкости. Наиболее информативным показателем, характеризующим состояние и динамику кислотно-основного равновесия в полости рта, является водородный показатель (pH), чутко реагирующий на выработку ротовой микрофлорой органических кислот (в случае ее стимуляции сахарозой) и аммиака (при стимуляции карбамидом).
Диагностика заболеваний пародонта. Установлены маркеры морфологической картины ротовой жидкости при здоровом пародонте, выявлены маркеры патологических состояний при воспалении тканей пародонта и кариесе зубов. Профессиональная гигиена ПР вызывает повышение в РЖ содержания меди в 1,4 раза, цинка -- в 2 раза, что свидетельствует об активизации окислительно-восстановительных процессов в десне, выражающейся в уменьшении воспалительных явлений.
Предложено оценивать интенсивность воспаления пародонта по соотношению фракций воды в РЖ. Вероятно, при воспалении тканей пародонта происходит относительное перераспределение фракций свободной и связанной воды, вызванное выходом легко гидратирующихся соединений в РЖ.
Заключение
Слюна является клинически информативной биологической жидкостью, но необходимо дальнейшее развитие и проверка этих биомаркеров для внедрения в клиническую диагностику с целью оказания помощи в ранней диагностике рака, для оценки рисков и реагирования на терапию. Усовершенствование списка биомаркеров слюны зависит от их стабильности и точности обнаружения, включая чувствительность и воспроизводимость анализов, простоту их выполнения, высокую чувствительность и специфичность, легкое определение количества в клинической лаборатории и экономическую эффективность целостности клинико-диагностических алгоритмов. Тем не менее эти новые системы обнаружения требуют дальнейшей оптимизации и проверки до внедрения в рутинную клиническую диагностику.
Литература
1. Еричев И.В. «Саливадиагностика в характеристике состояния зубных рядов»: диссертация кандидата медицинских наук: 03.00.13/Еричев Илья Валерьевич. Краснодар, 2004, 212 с.
2. Нормальная физиология . Орлов Р.С., Ноздрачев А.Д.-М. «Медиа», 2005.
3. Покровский В.М., Коротько Т.Ф., «Физиология человека», М., Медицина, 2003.
4. Руководство «Физиология человека». Под ред. Р.Шмита и Г.Teвca. Пep. с anгл. - 3-е изд. - M.: Мир; 2005 г. - 323c, - 314с, - 228c .
5. Руководство к практическим занятия по дисциплинам «Нормальная физиология» и «Физиология челюстно-лицевой области»: учебно-методическое пособие. / Под ред, акад. М.А. Медведев. Томск,СибГМУ, 2010, 401с.
6. Руководство по общей и клинической физиологии. Филимонов В.И.-М., 2005.
7. Физиология для стоматолога: Учебное пособие / под ред . Ю.И. Савченкова. Красноярск, КрасГМА, 2000. 90с.
8. Фундаментальная и клиническая физиология .Перев.с англ. и нем. Под ред. А.Камкина и А.Каменского. М.: Академия, 2004
9. Шульженко В.И. ,Текуцкая Е.Е. , Васильев Ю.А. Саливадиагностика и определение Кросноярск , КрасГМА , 2000 , 90c . А.Камкина и А.Каменского .М .: Академия , 2004 . содержания микроэлементов в организме детей с аномалиями развития верхних отделов желудочно-кишечного тракта . / Успехи современного естествознания. 2008 No 5. C. 158-159.
10. http://www.medliter.ru/?page=get&id-013758
11. http://www.studentmedic.ru/shpory.php?view 93
12. http://novmed.net/files/down/584.html
13. http://www.medlit.ru/medrus/rst/rst090430.htm