Относительно препарата сравнения * p?0,05 - диклофенака натрия
Как видно из таблицы 4, соединения (3б, 3м, 9х) через час после введения каррагенина проявили активность на уровне диклофенака натрия. Далее в течение эксперимента активность веществ снижается, и они уступают по активности диклофенаку натрия.
Местноанестезирующая активность
Исследование местноанестезирующей активности синтезированных соединений проведено на кафедре физиологии и патологии Пермской государственной фармацевтической академии доцентом, кандидатом биологических наук Чащиной С.В. под руководством доктора медицинских наук, профессора, заведующего кафедрой Сыропятова Б.Я.
Впервые среди производных ацилпировиноградных кислот были обнаружены соединения с местноанестезирующе активностью.
Была изучена местноанестезирующая активность 21 соединения, относящихся к солям N-замещенных амидов 4-арил-2-(в-N,N-диэтил-аминоэтиламино)-4-оксо-2-бутеновых кислот. Соединения исследовали в виде 1% водных растворов в опытах на кроликах методом Ренье. В качестве препаратов сравнения были взяты наиболее известные препараты данной группы, широко применяемые в медицине - лидокаин и тримекаин.
Таблица 5
Местноанестезирующая активность
|
Соеди-нение/ Эталон |
R |
R1 |
Концен-трация % |
Индекс Ренье |
Время действия, мин |
|
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
|
Х= Cl- (13а-ж), HOOC-CH2-CH2-COO- (14а-л), HOOC-CH(OH)-CH(OH)-COO-(15а, б) |
||||||
|
13а |
C6H5 |
2,6-(СН3)2C6H3 |
1 |
1132,8±69,7,* p?0,05 |
60,0±0,0* |
|
|
13б |
C6H5 |
2,4,6-(СН3)3C6H2 |
1 |
376,0±23,8, p?0,05 |
35,0±1,8 |
|
|
13в |
4-СН3C6H4 |
2,6-(СН3)2C6H3 |
1 |
641,3±262,9, |
42,5±12,7 |
|
|
13г |
4-СН3C6H4 |
2,4,6-(СН3)3C6H2 |
1 |
1182,7±6,3,* p?0,05 |
58,3±1,2* |
|
|
13д |
4-С2Н5OC6H4 |
2,6-(СН3)2C6H3 |
1 |
1300,0±0,0,* p?0,05 |
71,3±4,5* |
|
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
|
13е |
4-СlC6H4 |
2,6-(СН3)2C6H3 |
1 |
1202,5±21,5,* p?0,05 |
47,5±9,0 |
|
|
13ж |
4-СlC6H4 |
2,4,6-(СН3)3C6H2 |
1 |
243,8±154,6, |
45,0±10,8 |
|
|
14а |
C6H5 |
2,6-(СН3)2C6H3 |
1 |
1280,0±12,8,* p?0,05 |
80,0±1,4* |
|
|
14б |
C6H5 |
2,4,6-(СН3)3-C6H2 |
1 |
1272,8±12,8,* p?0,05 |
68,8±1,4* |
|
|
14в |
4-СН3C6H4 |
2,6-(СН3)2C6H3 |
1 |
1265,3±36,6,* p?0,05 |
71,3±2,7* |
|
|
14г |
4-СН3C6H4 |
2,4,6-(СН3)3C6H2 |
1 |
1257,5±42,6,* p?0,05 |
73,8±2,7* |
|
|
14д |
4-СН3OC6H4 |
2,6-(СН3)2C6H3 |
1 |
517,2±65,4, |
30,0±5,6 |
|
|
14е |
4-СН3OC6H4 |
2,4,6-(СН3)3C6H2 |
1 |
807,5±115,6,* |
58,3±3,1* |
|
|
14ж |
4-С2Н5OC6H4 |
2,6-(СН3)2C6H3 |
1 |
381,5±16,1, p?0,05 |
22,5±0,8 |
|
|
14з |
4-С2Н5OC6H4 |
2,4,6-(СН3)3C6H2 |
1 |
1283,3±15,5,* p?0,05 |
69,8±12,8* |
|
|
14и |
4-FC6H4 |
2,6-(СН3)2C6H3 |
1 |
1002,0±161,7,* |
60,0±1,8* |
|
|
14к |
4-СlC6H4 |
2,6-(СН3)2C6H3 |
1 |
731,0±64,6,* p?0,05 |
61,3±0,7* |
|
|
14л |
4-СlC6H4 |
2,4,6-(СН3)3C6H2 |
1 |
90,5±47,3* |
6,3±4,2 |
|
|
15а |
C6H5 |
2,6-(СН3)2C6H3 |
1 |
н/а |
н/а |
|
|
15б |
C6H5 |
2,4,6-(СН3)2C6H3 |
1 |
н/а |
н/а |
|
|
лидокаин** |
1 |
552,0±57,9, p?0,05 |
35,0±3,7 |
|||
|
тримекаин*** |
1 |
559,0±26,1, p?0,05 |
31,8±4,4 |
* - Отличия достоверны по сравнению с контролем при p?0,05
** - собственные исследования ***- литературные данные
Как видно из таблицы 5, все изученные соединения, кроме соединений 15а,б, проявили активность при поверхностной анестезии. Активность двенадцати апробированных соединений (13а, 13г-13е, 14а-14г, 14з, 14и, 14к) превосходят препараты сравнения по показателю глубины при поверхностной анестезии и по продолжительности действия, два соединения (13в, 14е) достоверно не отличаются по действию от препаратов сравнения - лидокаина и тримекаина. Три соединения (13б,ж, 14ж) уступают препаратам сравнения по показателю глубины при поверхностной анестезии, достоверно не отличаясь по продолжительности действия. Соединение 14л уступает по всем показателям препаратам сравнения - лидокаину и тримекаину.
В группе гидрохлоридов N-(2,6-диметилфенил)амидов 4-арил-2-(в-N,N-диэтиламиноэтиламино)-4-оксо-2-бутеновых кислот введение в арильную часть молекулы этоксигруппы приводит к достижению максимального показателя глубины при поверхностной анестезии и увеличению продолжительности действия.
В группе гидрохлоридов N-(2,4,6-триметилфенил)амидов 4-арил-2-(в-N,N-диэтиламиноэтиламино)-4-оксо-2-бутеновых кислот введение в арильную часть молекулы электронодонорного заместителя (13г) приводит к увеличению показателя глубины при поверхностной анестезии и продолжительности действия, а электроноакцепторного заместителя (13ж) - только к увеличению продолжительности действия
В группе сукцинатов N-(2,6-диметилфенил)амидов 4-арил-2-(в-N,N-диэтил-аминоэтиламино)-4-оксо-2-бутеновых кислот обнаружен ряд соединений, обладающих выраженной местноанестезирующей активностью, превосходящих препараты сравнения (14а, 14в, 14и, 14к), причем наличие в арильной части молекулы электронодонорных и электроноакцепторных заместителей приводит к снижению обоих показателей. Исключение составляет соединение 14в, у которого снижается только продолжительность действия.
В группе сукцинатов N-(2,4,6-триметилфенил)амидов 4-арил-2-(в-N,N-ди-этиламиноэтиламино)-4-оксо-2-бутеновой кислоты обнаружены соединения с выраженной местноанестезирующей активностью, превосходящие по глубине и продолжительности действия препараты сравнения. Наличие в арильной части молекулы электронодонорых заместителей не приводит к достоверным изменениям показателя глубины при поверхностной анестезии и продолжительности действия. Исключением является соединение 14е. Введение электроноакцепторных заместителей приводит к снижению обоих показателей.
В группе тартратов активных соединений не обнаружено.
В группе гидрохлоридов замена в амидной части 2,6-диметилфенильного фрагмента на 2,4,6-триметилфенильнай приводит к снижению обоих показателей, исключением является соединение 13г, у которого увеличивается показатель глубины при поверхностной анестезии и соединение 13ж - у которого показатель продолжительности остается на том же уровне, не имея достоверных отличий.
В группе сукцинатов замена в амидной части 2,6-диметилфенильного фрагмента на 2,4,6-триметилфенильный либо не приводит к изменению обоих показателей, либо снижает их. Исключения составляют соединения в арильной части, которых есть метокси- или этоксигруппы - у этих соединений происходит обратная взаимосвязь.
Замена хлорид-иона на сукцинат-ион в группе N-(2,6-диметилфенил)амидов 4-арил-2-(в-N,N-диэтиламиноэтиламино)-4-оксо-2-бутеновых кислот может изменять глубину и продолжительность действия как в сторону увеличения, так и в сторону уменьшения.
Замена хлорид-иона на сукцинат-иона группе N-(2,4,6-триметилфенил) амидов 4-арил-2-(в-N,N-диэтиламиноэтиламино)-4-оксо-2-бутеновоых кислот приводит к увеличению показателя глубины при поверхностной анестезии и продолжительности действия, исключение составляет соединение 13л у которого оба показателя падают.
Введение в молекулу тартрат-ионов вместо гидрохлорид- и сукцинат-ионов в группе N-замещенных амидов 4-арил-2-(в-N,N-диэтиламиноэтиламино)-4-оксо-2-бутеновых кислот делает соединения неактивными.
Соединения 13д, 13е были проверены на наличие проводниковой и инфильтрационной анестезии. Исследования проведены в опытах на крысах с использованием методов Bьlbring и Waida (1945) при электрическом раздражении кожи животного и Truant, 1958 раздражение нервов крыс производили выше места блокады. Определен порог электрического раздражения. Результаты испытаний представлены в таблице 6.
Таблица 6
Проводниковая и инфильтрационная анестезии
|
Соединение/ Эталон |
Проводниковая анестезия |
Инфильтрационная анестезия |
|||
|
Глубина анест.,% |
Продолж. анест., мин |
Глубина анест.,% |
Продолж. анест., мин |
||
|
13д |
100 |
153,2±12,4 |
94,5±6,0 |
117,5±16,3 |
|
|
13е |
90±10,8 |
173,4±28,2 |
100 |
60,0±10 |
|
|
лидокаин * |
80 |
150 |
80 |
150 |
|
|
тримекаин* |
100 |
176±28,4 |
100 |
196,3±3,8 |
*- литературные данные
Как видно из таблицы 6, при проводниковой анестезии соединения 13д, 13е достоверно превосходят по глубине анестезии препарат сравнения лидокаин и не отличается по глубине анестезии от препарата сравнения тримекаина. По продолжительности действия соединения достоверно не отличаются от препаратов сравнения.
При инфильтрационной анестезии соединения 13д, 13е превосходят препарат сравнения лидокаин, достоверно не отличаясь по действию от тримекаина, но уступают им по продолжительности действия.
Таким образом, в результате исследования осуществлен синтез ранее неизвестных соединений, среди которых выявлены вещества, обладающие противомикробной, анальгетической, противовоспалительной и местноанестезирующей активностью. Выявлены некоторые закономерности зависимости биологической активности от структуры соединений, которые могут быть учтены в дальнейшем целенаправленном поиске новых БАВ в ряду енаминоамидов АПК.
Выводы
1. При взаимодействии АПК с первичными ароматическими аминами образуются енаминокислоты, а с азотосодержащими гетериламинами - аммонийные соли АПК.
2. 2-Ариламино-5,5-диметил-4-оксогекс-2-еновые кислоты, сушествующие в растворах в трех таутомерных формах, вступают во взаимодействие с уксусным ангидридом в циклической форме с образованием продуктов О-ацилирования.
3. Дециклизация 3-замещенных фуранонов под действием первичных аминов является удобным методом для синтеза енаминоамидов АПК с различными заместителями в структуре.
4. Впервые осуществлен целенаправленный синтез N-замещенных амидов 4-арил-2-(в,в-диэтиламиноэтиламино)-4-оксо-2-бутеновых кислот, обладаю-щих местноанестезирующей активностью.
5. Проведен фармакологический скрининг 115 синтезированных соединений, среди которых обнаружена противомикробная анальгетическая, противовоспалительная и местноанестезирующая активность.
6. Для углубленных фармакологических исследований предлагаются:
а) N-(2,4,6-триметилфенил)амид 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)-2-буте-новой кислоты (11м), проявляющий высокую противомикробную активность по сравнению с левомицетином и норфлоксацином.
б) Гидрохлорид N-(2,6-диметилфенил)амида 2-(2-N,N-диэтиламиноэтилами-но)-4-оксо-4-(4-этоксифенил)-2-бутеновой кислоты (13д), сукцинат N-(2,4,6-триметилфенил)амида 2-(2-N,N-диэтиламиноэтиламино)-4-оксо-4-(4-метил-фенил)-2-бутеновой кислоты, (14г) проявляющие выраженную местно-анестезирующую активность, превосходя препараты сравнения - лидокаин и тримекаин.
Основное содержание диссертации изложено в работах
1. Бородин, А.Ю. Синтез и биологическая активность енаминопроизводных ацилпировиноградных кислот / А.Ю. Бородин, А.Н. Федоровцева, Н.М. Игидов [и др.] // Инновационный потенциал естественных наук: материалы международной научной конференции. - Пермь, 2006. - Том I. - С.276-282.
2. Бородин, А.Ю. Изучение взаимосвязи «структура - активность» 2-метил -5- нитрофениламино-производных ацилпировиноградных кислот / А.Ю. Бородин, Р.Р. Махмудов, А.Н. Федорцева // Материалы Российской научн.-практ. конф., посв. 70-летию ПГФА. - Пермь, 2007. - С. 7-9.
3. Бородин А.Ю. Синтез, свойства и биологическая активность 4-замещенных 2-[N(4-гидрокси-3-изопропил-2-метилфенил]амино-4-оксо-2-бутеновых кислот / А.Ю. Бородин И.Н. Чернов,, Н.М. Игидов [и др.] // Соврем. состояние и пути оптимизации лекарственного обеспечения населения; материалы Российской научн.-практ. конф. ПГФА «Медицина и здоровье». - Пермь, 2008. - С. 392-395.
4. Бородин, А.Ю. Синтез и строение 2-ариламино-4-арил-4-оксобут и 2-ариламино-5,5-диметил-4-оксогекс-2-еновых кислот / А.Ю. Бородин, Е.В. Буканова, М.И. Вахрин [и др.] // Техническая химия. От теории к практике: материалы межд. конф. - Пермь, 2008. - Том I. - С. 192-196.
5. Бородин, А.Ю. Биологическая активность 4-арил-2-ариламино (ароилгидразино)-4-оксобут и 2-ариламино (ароилгидразино)-5,5-диметил-4-оксогекс-2-еновых кислот / А.Ю. Бородин, Е.В. Буканова, С.С. Дубровина [и др.] // Техническая химия. От теории к практике: материалы межд. конф. ИТХ УрО РАН - Пермь, 2008. - Том I. - С. 197-199.
6. Бородин, А.Ю. Биологическая активность N-замещенных амидов 2-(2-бромфениламино) и 2-(4-бромфениламино)-5,5-диметилгексеновых кислот / А.Ю. Бородин, Н.М. Игидов, Т.В. Бородина [и др.] // Соврем. состояние и пути оптимизации лекарственного обеспечения населения: материалы Российской научн.-практ. конф. ПГФА « Медицина и здоровье». - Пермь, 2008. - С. 188-190.
7. Бородин, А.Ю. Местноанестезирующая активность гидрохлоридов енаминоамидов ацилпировиноградных кислот / А.Ю. Бородин, Н.М. Игидов, С.В. Чащина [и др.] // Соврем. состояние и пути оптимизации лекарственного обеспечения населения: материалы Российской научн.-практ. конф. ПГФА « Медицина и здоровье». - Пермь, 2008. - С. 196-198.
8. Бородин, А.Ю. Синтез, биологическая активность 4-арил-2-гидрокси-4-оксо-2-бутеноатов 5-фенилоксадиазолиламмония / А.Ю. Бородин, Н.М. Игидов, Т.Ф. Одегова [и др.] // Соврем. Состояние и пути оптимизации лекарственного обеспечения населения: материалы Российской научн.-практ. конф. ПГФА «Медицина и здоровье». - Пермь, 2008. - С. 193-196.
9. Бородин, А.Ю. Синтез, свойства замещенных амидов 5,5-диметил-2(2,4-дибромфениламино) и 2-(2,4-дихлорфениламино)-4-оксо-2-гексеновых кислот / А.Ю. Бородин, Н.М. Игидов, М.С. Носова [и др.] // Соврем. Состояние и пути оптимизации лекарственного обеспечения населения: материалы Российской научн.-практ. конф. ПГФА «Медицина и здоровье». - Пермь, 2008. - С. 191-193.