Заключение
Полученный штамм E. coli позволяет получать рекомбинантный лактоферрин как в растворимой форме, так и в форме телец включения. В результате оптимизации параметров культивирования штамма максимальный выход целевого белка (в том числе в растворимой форме) получен при культивировании при 23°С при ранней индукции 0,6 OD клеток 1-1,2 мМ ИПТГ (либо 1 мМ лактозы, однако при этом производство лактоферрина будет снижено на 8%) и культивированием после индукции в течение 8 ч. Таким образом, оптимизация позволила увеличить первоначальную производительность штамма на 15-16% общего лактоферрина и на 89% растворимого.
Список использованных источников
1. Hiroyuki W., Yamauchi K., Takase M. Lactoferrin research, technology and applications// Int Dairy J. 2006, 11, 1241-1251.
2. Veen H. Production and characterization of recombinant human lactoferrin. Diss. the degree of Doctor . Leiden, The Netherlands. 2008.
3. Ward P.P., May G.S., Headon D.R., Conneely O.M. An inducible expression system for the production of human lactoferrin in Aspergillus nidulans// Gene. 1992, 122, 219-223.
4. Orla M. Conneely, Denis R. Headon, Bert W. O'Malley Patent WO 1996/014413. Expression Of Processed Recombinant Lactoferrin And Lactoferrin Polypeptide Fragments From A Fusion Product In Aspergillus.- 17.05.1997.
5. Ward P.P., Lo J., Duke M., May G.S., Headon D.R., Conneely O.M. Production of biologically active recombinant human lactoferrin in Aspergillus oryzae// Biotechnology. 1992, 10: 784-789.
6. Suzuki Y.A., Kelleher S.L., Yalda D., Wu L., Huang J., Huang N., Lцnnerdal B. Expression, characterization, and biologic activity of recombinant human lactoferrin in rice// J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2003, 36: 190-199.
7. Патент № 2340674 Российская Федерация, МПК7 СО7К С12N C12P. Способ получения рекомбинантного лактоферрина человека / Народицкий Б.С., Шмаров М.М., Логунов Д.Ю., и др. - 2007120447/13; заявл. 01.06.07; опубл. 10.12.08.
8. Patent US 5919913. Isolation of lactoferrin from milk/ J.H. Nuyens, H.H. Van Veen. 6.07.1999.
9. Goldman I.L. Production of human lactoferrin in animal milk// Biochem Cell Biol. 2012, 3: 513-519.
10. Nuijens J.H., van Berkel P.H., Geerts M.E., Hartevelt P.P., de Boer H.A. Characterization of recombinant human lactoferrin secreted in milk of transgenic mice// J Biol Chem. 1997, 272: 8802-8807.
11. Platenburg G.J., Kootwijk E.P., Kooiman P.M., Woloshuk S.L., Nuijens J.H. Expression of human lactoferrin in milk of transgenic mice// Transgenic Res. 1994, 3, 99-108.
12. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук. - М.:Мир, 1984. - 480 с.