Ингибирование в-окисления жирных кислот сопровождалось развитием тяжелой энцефалопатии.
В головном мозге животных в 6 раз увеличивалось содержание аммиака, в митохондриях нейронов снижалась скорость окисления субстратов (преимущественно флавинзависимого субстрата -- сукцината), разобщалось окислительное фосфорилирование, возникала деэнергизация, истощались субстратные запасы, активировалось перекисное окисление липидов. Гистологически в коре больших полушарий регистрировались венозное полнокровие, отек, диапедезные кровоизлияния, тотальный хроматолиз пирамидных клеток, нейрональное разрежение и пролиферация нейроглии.
У крыс, оставленных без лечения в течение 14--30 дней после завершения инъекций 4-пентеноевой кислоты, летальность возрастала до 40%, метаболические и морфологические нарушения в печени и головном мозге прогрессировали.
Гепатопротекторы, содержащие полифенолы и фосфолипиды, оказывали лечебный эффект при экспериментальном ингибировании в-окисления жирных кислот, вызывая регресс структурно-метаболических нарушений в печени и головном мозге. Все животные, получавшие лохеин, максар и эплир, оставались живыми до конца эксперимента. В крови леченных животных в 1,5--4,3 раза уменьшались активность ферментов печеночного происхождения, содержание билирубина, липидов, аммиака и фенолов, в 1,8--4,0 раза повышалось количество кетоновых тел, глюкозы, белка и мочевины. В печени усиливалась продукция кетоновых тел, снижались содержание аммиака и интенсивность липопероксидации, в митохондриях гепатоцитов увеличивались активность сукцинатдегидрогеназы, сопряженность окислительного фосфорилирования и образование АТФ. Гепатопротекторы восстанавливали типичную для интактных животных гистоархитектонику печеночных долек, нормализовали кровообращение в синусоидах, защищали паренхиму печени от некрозов и жировой дистрофии. В головном мозге лохеин, максар и эплир сдерживали накопление аммиака, увеличивали дыхательную активность митохондрий, сопряженность окислительного фосфорилирования, тормозили перекисное окисление липидов, стабилизировали кровообращение, ослабляли глиальную реакцию, набухание и хроматолиз пирамидных клеток. Таким образом, гепатопротекторы являются средствами патогенетической терапии при заболеваниях, сопровождающихся ингибированием в-окисления жирных кислот.
Предположение о целесообразности применения гепатопротекторов в комплексной терапии острого панкреатита и сахарного диабета основано на клинических данных о постоянно возникающем поражении печени при патологии поджелудочной железы. Клинические симптомы заболеваний печени диагностируются у 18--30% пациентов с острым панкреатитом и у 34--75% больных сахарным диабетом.
Острый панкреатит вызывали у белых крыс с помощью орошения поджелудочной железы струей хлорэтила в течение 1 мин. Летальность составляла через 3 дня после операции 15%, спустя 14 дней дополнительно погибало 7%, через 21 день -- еще 5% животных. В поджелудочной железе развивались отек и воспалительная инфильтрация стромы, гиперемия, тромбоз артерий, фокальные некрозы ацинусов, дистрофические изменения инсулоцитов; в паренхиме печени появлялись кровоизлияния и фокальные некрозы. В этих органах значительно активировалось перекисное окисление липидов. В крови животных с острым панкреатитом повышались активность -амилазы, липазы, аминотрансфераз, кислой и щелочной фосфатазы, содержание креатинина, глюкозы общего и непрямого билирубина. Строение и биохимические показатели поджелудочной железы частично восстанавливались через 28 дней после повреждения. Проницаемость мембран, антитоксическая и экскреторная функции печени улучшались раньше -- через 21 день.
Гепатопротекторы при введении с 3-го дня после операции в течение 12 дней оказывали выраженный терапевтический эффект при остром панкреатите у крыс, ослабляя морфологические и метаболические проявления дисфункции как поджелудочной железы, так и печени. Лохеин, максар и эплир защищали от гибели всех экспериментальных животных, нормализовали гистологическое строение органов, снижали в крови активность -амилазы, липазы, ферментов печеночного происхождения, содержание билирубина, креатинина, устраняли гипергликемию, подавляли перекисное окисление липидов в панкреатических ацинусах даже в большей степени, чем в паренхиме печени.
Моделью сахарного диабета служила интоксикация стрептозотоцином, повреждающим островки поджелудочной железы. В крови крыс с экспериментальным сахарным диабетом повышалось содержание глюкозы и холестерина, снижалось количество белка.
В митохондриях печени развивался гиперкомпенсированный низкоэнергетический сдвиг, усиливалась липопероксидация. Под влиянием терапии лохеином, максаром и эплиром уменьшались гипергликемия, гиперхолестеринемия, гипопротеинемия, образование в печени продуктов липопероксидации, деэнергизация митохондрий, повышалась сопряженность окислительного фосфорилирования. Проведенное исследование доказывает, что гепатопротекторы рационально использовать для патогенетической терапии острого панкреатита и сахарного диабета.
Во всех проведенных экспериментах оригинальные гепатопротекторы лохеин, максар и эплир проявляли бульшую терапевтическую эффективность, чем референтные препараты силимарин и эссенциале.
В клинике проводят комплексное лечение заболеваний гепатобилиарной системы с использованием гепатопротекторов, витаминов, глюкокортикоидов, иммуномодуляторов, энтеросорбентов. Для выбора рациональных комбинаций препаратов необходимо исследовать их взаимодействие в эксперименте, при моделях патологии печени.
Взаимодействие лохеина, максара и эплира с синтетическим глюкокортикоидом преднизолоном изучали при экспериментальном хроническом гепатите, вызванном у крыс тетрахлорметаном. Комбинированная терапия в большей степени, чем монотерапия, приводила к снижению числа некротизированных гепатоцитов, количества гликозаминогликанов и оксипролина в общем и кислотоустойчивом коллагене, вызывала значительный регресс фиброза и лимфоидно-гистиоцитарной инфильтрации печеночных долек. Кроме того, гепатопротекторы уменьшали побочные эффекты преднизолона -- гиперлипидемию, гипопротеинемию и подавление реакций клеточного и гуморального иммунитета. Препараты нормализовали формулу крови, восстанавливали клеточность тимуса и селезенки, морфологический состав лимфоидных органов и перитонеального экссудата, улучшали показатели гуморального иммунитета, макрофагальный фагоцитоз и цитотоксичность клеток тимуса, селезенки и перитонеального экссудата.
Одним из путей повышения эффективности гепатопротективной терапии является совместное назначение гепатопротекторов с различными механизмами терапевтического действия. Это побудило исследовать терапевтическую эффективность композиций, содержащих гепатопротекторы фосфолипидной (эплир) и полифенольной (лохеин) природы.
Антиоксидантную активность комбинаций лохеина и эплира исследовали в опытах in vitro с помощью модельной реакции окисления кумола. Совместное действие исследованных композиций эплира и лохеина превосходит теоретически вычисленный аддитивный эффект индивидуальных антиоксидантов, что свидетельствует об их синергизме. Степень синергизма в комбинациях с постоянным количеством лохеина нарастает по мере увеличения концентрации эплира и достигает максимума при равных концентрациях обоих антиоксидантов.
В экспериментах на белых мышах проанализировали эффекты трех комбинаций, содержащих эплир и лохеин в соотношениях 1: 5 и 4: 5 (I комбинация), 1: 3 и 2: 3 (II комбинация) и по 1: 2 (III комбинация) от эффективной дозы каждого препарата. Моделью патологии печени служил острый гепатит, вызванный тетрахлорметаном.
Эплир, лохеин и их комбинации (I--III) оказывали выраженное терапевтическое действие, которое проявлялось снижением продолжительности гексеналового сна, коэффициента массы печени и жировой дистрофии ее паренхимы. При этом по способности уменьшать жировую дистрофию печени II и III комбинации существенно превосходили эплир и лохеин. В экспериментах на белых крысах с гепатитом, вызванным тетрахлорметаном, эплир и лохеин при раздельном и в большей степени при комбинированном применении препятствовали удлинению гексеналового сна, выходу в кровь аминотрансфераз и кислой фосфатазы, нормализовали ингибированную гепатотоксином активность цитохрома Р-450. Таким образом, антиоксидантное и гепатопротективное действие комбинации эплира и лохеина превосходит эффект препаратов при раздельном применении.
Исходя их этих данных, разработан комплексный гепатопротектор липроксол, содержащий эплир и лохеин в соотношении 1: 12, что соответствует сочетанию 1/3 эффективной дозы эплира и 2/3 эффективной дозы лохеина. При гепатите, вызванном у крыс тетрахлорметаном, липроксол в эффективной дозе 130 мг на 1 кг массы тела обладает более выраженным гепатопротективным и антиоксидантным эффектом, чем эплир и лохеин в эффективных дозах 30 и 200 мг на 1 кг массы тела соответственно. Это особенно актуально для эплира как наиболее дорогого средства. При применении липроксола количество эплира для обеспечения успешной фармакотерапии уменьшается втрое.
Лохеин, максар и эплир обладают низкой токсичностью. При однократном введении в желудок или внутрибрюшинно белым крысам их DL50 превышала 7 000 мг на 1 кг массы тела, у животных не нарушалась координация движений, сохранялись рефлексы, не угнеталось дыхание. Хроническую токсичность гепатопротекторов определяли на белых крысах обоего пола и собаках при ежедневном введении внутрь в течение 6 мес. Препараты вводили в эффективных терапевтических дозах и в дозах, в 10 раз превышающих терапевтические. Лохеин, максар и эплир не вызывали гибели животных, существенных изменений их поведения, аппетита, массы тела, показателей периферической крови (гемоглобин, эритроциты, ретикулоциты, лейкоциты, СОЭ, лейкоцитарная формула).
В хроническом эксперименте не развивались значительные сдвиги со стороны ЭКГ и ритма сердечных сокращений, функционального состояния центральной нервной системы (суммационно-пороговый показатель, исследовательское поведение в тесте «открытое поле»). Судя по коэффициенту ретенции бромсульфалеина, лохеин, максар и эплир не оказывали неблагоприятного воздействия на экскреторную функцию печени. Они не вызывали синдромов цитолиза и холестаза, так как не повышали в сыворотке крови активность аминотрансфераз, щелочной фосфатазы и содержание билирубина; не подавляли антитоксическую функцию печени: не изменяли в микросомах содержание цитохрома Р-450 и активность зависимых от этого гемопротеина многоцелевых монооксигеназ. У крыс, получавших гепатопротекторы, отсутствовали изменения со стороны почек: сохранялись нормальный суточный диурез, близкие к норме значения рН мочи, в ней отсутствовал сахар, уровень белка и креатинина колебался в пределах физиологической нормы. У всех подопытных крыс и собак при патоморфологическом исследовании не выявлялись гистологические нарушения. Лохеин, максар и эплир не оказывают аллергизирующего, иммунотоксического, мутагенного, канцерогенного, гонадотоксического, эмбриотоксического, тератогенного и фетотоксического действия.
Таким образом, в результате комплексных исследований, выполненных под руководством профессора А.С. Саратикова, разработаны оригинальные гепатопротективные средства природного происхождения, терапевтическая эффективность которых превосходит действие силимарина и эссенциале. Алгоритм изучения гепатопротекторов и технология их производства обеспечивают рациональное использование сырья и высокую лечебную активность. На все оригинальные гепатопротективные средства, их сырье и субстанции разработаны фармакопейные статьи и лабораторные регламенты. Технология производства лохеина, максара и эплира внедрена на Томском химико-фармацевтическом заводе, опытно-промышленном участке Тихоокеанского института биоорганической химии ДВО РАН, в ООО «Биолит» (г. Томск). Максар зарегистрирован Министерством здравоохранения и социального развития РФ в качестве лекарственного средства, лохеин, эплир и липроксол в течение 15 лет успешно применяются в медицинской практике как биологически активные добавки к пище. Опыт разработки и исследования гепатопротекторов положен в основу методических рекомендаций по доклиническому изучению этой группы препаратов.
Подробная информация и основная литература о фармакологии гепатопротекторов представлены в монографиях: А.С. Саратиков, А.И. Венгеровский, В.С. Чучалин «Экстракт солянки холмовой (лохеин) -- эффективная защита печени» (Томск: SST, 2000), А.С. Саратиков, В.Н. Буркова, А.И. Венгеровский, Е.А. Кураколова «Новые гепатопротективные и противовоспалительные препараты пелоидов» (изд-во Том. ун-та, 2004) и обзорной статье: С.А. Федореев, Н.И. Кулеш, Л.И. Глебко и др. «Препарат максар из дальневосточного растения маакия амурская» (Химико-фармацевт. журн. 2004. № 11. С. 22--26).
Популин содержит экстракт коры осины, в состав которого входят феногликозиды (салицин, саликортин, тремулацин, тремулоидин и др.), эфирное масло, ароматические и высшие жирные кислоты, дубильные вещества, углеводы, аскорбиновая кислота. Цитопротективные свойства препарата оптимизированы экстрактом солянки холмовой и концентратом минеральной воды оз. Шира. Популин обладает желчегонным, противовоспалительным и и гепатозащитным действием.
Рекомендуется для профилактики и усиления эффекта медикаментозной терапии:
-- острого и хронического описторхоза, особенно при наличии противопоказаний к назначению празиквантеля, а также при повторных курсах дегельминтизации;
-- туберкулеза легких в качестве средства, нормализующего функцию гепатобилиарной системы и предотвращающего развитие побочных эффектов противотуберкулезных препаратов;