О ВЛИЯНИИ СОЕДИНЕНИЙ СЕЛЕНА НА ИММУННУЮ СИСТЕМУ МОЛОДНЯКА СВИНЕЙ
Г.И. БОРЯЕВ, Ю.Н. ФЕДОРОВ, М.Н. НЕВИТОВ
Оценивали влияние селенсодержащих препаратов на иммунную систему молодняка свиней. Определяли концентрацию селена и иммуноглобулинов в молозиве свиноматок и сыворотке крови поросят, фагоцитарную активность нейтрофилов и количество Т-лимфоцитов в периферической крови последних в зависимости от дозы препарата и возраста. селен свиноматка поросята кровь
Иммунная система является одной из важнейших гомеостатических систем организма, которая во многом определяет степень здоровья животных и их адаптивные возможности. Нарушения иммунной системы рассматриваются как один из патогенетических механизмов любого патологического процесса, поэтому иммунокоррекция имеет важное значение при иммунодефиците, обусловленном различными факторами. В настоящее время для этих целей используют широкий спектр иммунокоррегирующих препаратов, в том числе вещества, которые способны выступать в качестве регуляторов свободнорадикальных процессов. Среди этих веществ следует отметить соединения антиоксидантной природы, которые обладают также адаптогенными свойствами; в их число входят и соединения селена. Селен -- незаменимый микроэлемент и компонент основных метаболических путей, регулирующих активность гормонов щитовидной железы, систему антиоксидантной защиты и взаимодействие клеток иммунной системы (1).
Целью нашей работы было сравнительное исследование влияния селенита натрия и селенорганического соединения селенопирана (9-фенилсимметричный октагидроселеноксантен) на иммунную систему молодняка свиней при введении этих соединений как матерям, так и поросятам.
Методика. Эксперименты проводили на свиноферме учебно-опытного хозяйства и в виварии Пензенской ГСХА. Были сформированы пять групп из супоросных свиноматок по методу пар аналогов (по 6 гол. в каждой), одна из которых служила контролем. За 14 сут до предполагаемого опороса свиноматкам в опытных группах вводили внутримышечно селенсодержащие соединения по следующей схеме: I и II группы -- стерильный раствор селенита натрия (Na2SeO3) в дозе соответственно 0,1 и 0,05 мг Se/кг живой массы; III и IV группы -- органический препарат селенопиран (СП-1) в дозе соответственно 0,1 и 0,05 мг Se/кг живой массы; в контроле (V группа) животным внутримышечно вводили стерильный физиологический раствор. Образцы крови для исследований брали из хвостовой артерии -- у свиноматок после опороса, а у поросят на 1, 3, 7, 28 и 45-е сут после рождения. Во время отъема (в возрасте 45 сут) было сформировано пять групп поросят по 6 гол. в каждой. Поросятам вводили препараты селена в тех же дозах и по той же схеме, что и свиноматкам. Образцы крови отбирали в день отъема, а также на 48, 52, 73, 105-е сут жизни (или на 3, 7, 28, 60-е сут после отъема). Для оценки иммунной системы у поросят определяли следующие показатели: концентрацию иммуноглобулинов (G-, M- и A-классов) в молозиве свиноматок и сыворотке крови молодняка методом простой радиальной иммунодиффузии по Manchini (2); относительное количество Т-лимфоцитов в периферической крови по реакции розеткообразования с эритроцитами барана; фагоцитарную активность нейтрофилов (НСТ-тест); концентрацию селена в молозиве и сыворотке крови флюориметрическим методом (3). Для статистической обработки данных использовали пакет программы MS Excel.
Результаты. В многочисленных исследованиях показано, что жизненно необходимые элементы поросята получают в подсосный период с молозивом и молоком матери. По всей видимости, эта закономерность справедлива и для селена, так как концентрация этого микроэлемента в сыворотке крови молодняка находилась в прямой зависимости от таковой в молозиве как при использовании селенопирана, так и селенита натрия (табл. 1).
1. Концентрация селена в молозиве свиноматок и сыворотке крови поросят в зависимости от дозы селенсодержащих препаратов и времени опороса (мкг/л)
|
Время после опороса (отъема), сут |
I группа |
II группа |
III группа |
IV группа |
V группа (контроль) |
|
|
К о н ц е н т р а ц и я с е л е н а в м о л о з и в е с в и н о м а т о к |
||||||
|
1-е |
348,835,4 |
226,244,5 |
294,756,1 |
282,611,9 |
150,944,2 |
|
|
3-и |
143,26,9 |
127,912,7 |
168,97,4 |
109,05,4 |
66,15,03 |
|
|
К о н ц е н т р а ц и я с е л е н а в с ы в о р о т к е к р о в и п о р о с я т |
||||||
|
3-и |
150,17,6 |
127,314,3 |
161,65,3 |
111,49,6 |
73,69,6 |
|
|
7-е |
135,98,8 |
127,410,7 |
113,914,3 |
114,212,8 |
91,014,4 |
|
|
28-е |
142,913,2 |
165,16,6 |
164,79,1 |
169,511,0 |
153,99,1 |
|
|
45-е (1-е) |
134,47,6 |
147,89,7 |
152,88,6 |
161,911,0 |
136,114,0 |
|
|
48-е (3-и) |
171,79,9 |
141,716,2 |
166,516,0 |
199,717,8 |
141,37,2 |
|
|
75-е (30-е) |
139,17,2 |
145,518,5 |
168,67,6 |
158,814,0 |
141,47,3 |
|
|
105-е (60-е) |
179,39,4 |
171,56,9 |
153,66,1 |
175,87,1 |
172,28,1 |
|
|
* Р < 0,05. П р и м е ч а н и е. Схему опыта и описание групп см. в разделе «Методика». |
Наибольшая концентрация селена в молозиве свиноматок отмечена во всех опытных группах на 1-е сут после опороса: достоверные различия по сравнению с контролем выявлены в I, III и IV группах -- больше соответственно на 131, 95 и 87 % (P < 0,05). На 3-и сут после рождения концентрация селена в сыворотке крови поросят I, II, III и IV групп была соответственно на 104, 73, 119 и 51 % (P < 0,05) выше, чем в контроле (см. табл. 1). Различия по концентрации селена сохранялись до 7-х сут жизни поросят; к 28-м сут этот показатель во всех группах был на одном уровне.
Внутримышечное введение поросятам селенсодержащих препаратов перед отъемом способствовало повышению концентрации элемента в сыворотке крови, причем наиболее существенные различия по сравнению с контролем отмечены на 3-и сут после отъема -- на 21, 17 и 41 % (P < 0,05) соответственно в I, III и IV группах. Через 2 мес после отъема различия по этому показателю носили несущественный характер.
Иммунные реакции на уровне клеток проявляются у свиней в онтогенезе значительно раньше гуморальных. Ко времени рождения наиболее дифференцирована лимфоидная ткань тимуса, где сосредоточено более 80 % всех лимфоцитов новорожденного, подавляющее большинство среди которых составляют Т-клетки (4). Лимфатические узлы и селезенка в этот период заселены Т-лимфоцитами почти повсеместно.
Селенсодержащие препараты способствовали повышению количества Т-лимфоцитов в периферической крови поросят как при введении свиноматкам за 14 сут до опороса, так и поросятам перед отъемом (табл. 2). В подсосный период наибольшие показатели отмечены у поросят II и III групп на 3-и сут после рождения -- соответственно на 31 и 41 % выше, чем в контроле (P < 0,05). Эта разница сохранялась до 28-х сут после рождения. На 7-е сут различия по количеству Т-лимфоцитов между контролем, с одной стороны, и I, II и IV группами, с другой, составляли соответственно 18, 30 и 23 % (P < 0,05). К 28-м сут количество Т-лимфоцитов было более высоким у поросят I и II групп, полученных от матерей, которым вводили селенит натрия, -- соответственно на 20 и 36 % по сравнению с контролем.
2. Количество Т-лимфоцитов в периферической крови поросят в зависимости от дозы селенсодержащих препаратов и времени после рождения (%)
|
Время после рождения (отъема), сут |
I группа |
II группа |
III группа |
IV группа |
V группа (контроль) |
|
|
3-и |
63,33,2 |
79,03,8 |
84,15,1 |
71,34,4 |
59,94,9 |
|
|
7-е |
71,51,3 |
78,84,8 |
65,52,1 |
74,71,6 |
60,54,8 |
|
|
28-е |
60,81,0 |
68,81,9 |
59,72,3 |
49,02,5 |
50,51,3 |
|
|
45-е (1-е) |
54,92,6 |
51,72,3 |
52,71,7 |
46,81,0 |
57,63,0 |
|
|
48-е (3-и) |
63,62,1 |
67,85,5 |
61,43,2 |
66,74,1 |
68,64,3 |
|
|
52-е (7-е) |
42,42,9 |
38,61,2 |
44,44,7 |
46,24,3 |
36,71,2 |
|
|
73-и (28-е) |
54,52,3 |
43,84,9 |
45,84,8 |
49,34,9 |
52,51,2 |
|
|
105-е (60-е) |
53,95,6 |
55,61,2 |
47,23,6 |
59,21,6 |
53,02,3 |
|
|
* P < 0,05. П р и м е ч а н и е. То же, что в таблице 1. |
Влияние соединений селена на количество Т-лимфоцитов в периферической крови можно, скорее, охарактеризовать как протекторное, а не стимулирующее, так как с возрастом происходит снижение числа этих клеток. Известно, что Т-лимфоциты более чувствительны к воздействию свободных радикалов по сравнению с другими клетками. В первые сутки после рождения происходит адаптация организма новорожденного к новым условиям существования, при этом, как при любой адаптационной реакции, повышается интенсивность свободнорадикальных процессов. Общеизвестно, что соединения селена способствуют снижению количества свободных радикалов и тем самым могут уменьшать их отрицательное воздействие на Т-клетки.
Поскольку эпителиохориальная плацента свиноматок препятствует прохождению иммуноглобулинов (Ig), появление которых в сыворотке крови новорожденных до приема молозива следует рассматривать как результат либо внутриутробной антигенной стимуляции, либо перехода Ig от матери через поврежденную плаценту (5). В связи с этим особое значение в адаптации новорожденного к окружающей среде приобретают пассивно полученные от матери факторы иммунитета (6).
Эффективность колострального иммунитета зависит от количества абсорбированных в кишечнике новорожденных поросят материнских антител в первые часы жизни. В наших исследованиях внутримышечное введение препаратов селена супоросным свиноматкам за 14 сут до предполагаемого опороса способствовало повышению концентрации IgG и IgM как в молозиве, так и сыворотке крови поросят (табл. 3). Наибольшее количество IgG отмечено в молозиве свиноматок III и IV групп, получавших селенопиран в дозе соответственно на 45 и 52 % выше, чем в контроле (P < 0,05). Концентрация IgG в сыворотке крови поросят всех опытных групп была выше, чем в контроле: в I, II, III и IV группах -- соответственно на 22, 13, 20 и 24 % (P < 0,05). Такая же тенденция наблюдалась и на 7-е сут жизни поросят.
Наиболее выраженное повышение концентрации IgM в молозиве наблюдалось у свиноматок IV группы -- на 136 % по сравнению с контролем (P < 0,05) (см. табл. 3). Концентрация IgM в сыворотке крови поросят IV группы на 3-и сут после рождения была на 37 % выше, чем в контроле (P < 0,05); I и II групп -- на 25 % выше (разница недостоверна). На 7-е сут после рождения достоверно высокая (по сравнению с контролем) концентрация IgM сохранялась у молодняка III и IV групп (на 100 %, P < 0,05).
3. Концентрация иммуноглобулина различных классов в молозиве свиноматок и сыворотке крови поросят в зависимости от дозы селенсодержащих препаратов и времени после рождения (мг/мл)
|
Время после рождения (опороса) |
I группа |
II группа |
III группа |
IV группа |
V группа (контроль) |
|
|
С ы в о р о т к а к р о в и п о р о с я т |
||||||
|
Концентрация IgG |
||||||
|
3-и |
23,71,1* |
21,82,4 |
23,30,2* |
24,00,5* |
19,30,8 |
|
|
7-е |
18,30,9* |
17,61,9 |
16,32,1 |
16,80,8 |
14,31,8 |
|
|
Концентрация IgM |
||||||
|
3-и |
1,00,30 |
1,00,20 |
0,80,02 |
1,10,10* |
0,80,10 |
|
|
7-е |
0,20,03 |
0,30,10 |
0,40,05* |
0,40,03* |
0,20,05 |
|
|
Концентрация IgA |
||||||
|
3-и |
1,10,20 |
1,00,10 |
1,20,10* |
1,20,05* |
1,00,07 |
|
|
7-е |
0,50,04 |
0,60,10 |
0,90,04 |
0,90,03 |
0,80,03 |
|
|
М о л о з и в о с в и н о м а т о к |
||||||
|
Концентрация IgG |
||||||
|
20 ч после опороса |
40,42,5* |
39,05,1 |
48,07,5* |
50,56,2* |
33,12,3 |
|
|
Концентрация IgM |
||||||
|
20 ч после опороса |
3,10,40* |
4,40,50* |
4,40,50* |
5,20,80* |
2,20,10 |
|
|
* P < 0,05. П р и м е ч а н и е. То же, что в таблице 1. |
Концентрация IgA в сыворотке крови на 3-и сут жизни была выше на 20 % (P < 0,05) у животных III и IV групп, матери которых получали инъекции селенопирана в разных дозах; на 7-е сут различия между группами были недостоверными.
Внутримышечное введение поросятам перед отъемом (45 сут жизни) как селенита натрия, так и селенопирана не оказывало существенного влияния на концентрацию в сыворотке крови IgG, IgM и IgA.
На фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови поросят воздействовал препарат СП-1 при инъекции матерям. Спонтанная реакция сегментоядерных нейтрофилов (НСТ-тест) осталась без изменений во всех группах опыта, однако индуцированная реакция возросла на 11-12 % у поросят III и IV групп.
Таким образом, иммунофизиологический статус молодняка свиней существенно зависит от концентрации IgG и IgМ в молозиве подсосных свиноматок, повышение которой достигается посредством инъекций соединений селена органической и неорганической природы. Показано, что в молозиве концентрация IgG и IgМ под воздействием селенопирана повышалась соответственно на 52 и 136 %, а селенита натрия -- на 22 и 100 % (P < 0,05). В ранние периоды постнатального онтогенеза поросята опытных групп превосходили интактных животных по концентрации селена и иммуноглобулинов G-, М- и А-классов в сыворотке крови (соответственно на 78, 20 и 24 %, P < 0,01), а также количеству лимфоцитов и фагоцитарной активности нейтрофилов в крови. Использование селенсодержащих препаратов в системе мать--плод, а также при отъеме поросят способствует усилению клеточного звена иммунитета, по всей видимости, за счет протекторного влияния этих соединений на Т-лимфоциты, что может быть связано с интенсивностью свободнорадикального окисления в организме супоросных свиноматок и поросят-сосунов.