Бактериологический (Материал из зева, носа, отделяемое ран, кровь, гной)
Материал засевают на кровяной агар (гемолиз) или на молочно-желточно-солевой агар (угнетение роста посторонних бактерий за счет содержания соли, лучше выделяется пигмент и лецитиназа). Выделенную культуру идентифицируют по видовым признакам, определяют у нее наличие основных признаков и факторов патогенности, обязательно проверяют чувствительность к антибиотикам, в случае необходимости проводят фаготипирование.
Серологический (Определение анти-O-стрептолизина. Определение антигиалуронидазы.)
См. в тетради стр. 18
Для выделения чистой культуры используют непрямой бактериологический метод.
Фаготипирование стафилококков, как и многих других возбудителей бактериальных инфекций, проводится исключительно для эпидемиологических целей – для более тонкого типирования возбудителя внутри вида, что помогает найти источник инфекции и определить пути её распространения.
Для типирования патогенных плазмокоагулирующих стафилококков используют международный набор из 23 умеренных бактериофагов. Эти фаги разделены на группы:
1 группа - фаги 29, 52, 52А, 79, 80;
2 группа - фаги ЗА, ЗС, 55, 71;
3 группа - фаги 6, 42Е, 47, 53, 54, 75, 77, 83А, 84, 85;
4 группа - фаги 94 ,95 ,96; и вне групп фаг 81.
Перед работой набор сухих фагов стерильно растворяют в щелочном бульоне (рН-7,6) с 0,4% глюкозы и 0,02% CaCl2 . В ампулу добавляют I мл бульона и получают разведение фага 10-1. Из этого основного разведения готовят два рабочих разведения, соответствующие тест-разведению (ТР) и 100 ТР. Разведение, соответствующее 1 ТР, указано на этикетке фага.
Степень лизиса культуры разными разведениями фага регистрируется по следующей схеме:
++++ сливной, полный лизис,
+++ полусливной лизис (незначительный рост культуры в зоне лизиса),
++ наличие в месте нанесения капли фага свыше 50 колоний фага (пятен лизиса),
+ от 20 до 50 колоний фага,
— полное отсутствие лизиса.
Наивысшее разведение, вызвавшее лизис эталонного штамма на +++, называется тест разведением (I TP) фага. Например, если на этикетке указано, что I ТР данной серии фага 10-3, то для получения I TP надо из разведения 10-1 сделать два последовательных десятикратных разведения, и разведение 10-3 будет соответствовать I ТР.
Методика фаготипирования
Суточную агаровую культуру стафилококка засевают в 2,5 мл бульона Хоттингера, Мартена или МПБ (рН 7,2-7,4) и выращивают 3-4 часа при 37°C (до появления заметной мути).
Одновременно готовят чашки с 1,2% агаром, приготовленным на бульоне Хоттингера с добавлением свежей мясной вода (рН 7,6; глюкозы 0,4%). CaCl2 добавляют в расплавленный агар непосредственно перед разливом (0,2 мл стерильного 10%-ного раствора CaCl2 на 100 мл агара). По 25-30 мл расплавленного агара разливают в чашки Петри и после застывания подсушивают чашку 30-40 минут при 37°C. Затем 3-4-часовую испытуемую культуру стафилококка пастеровской пипеткой засевают газоном, избыток культуры удаляют пипеткой, а чашку подсушивают 30-40 минут.
Дно засеянной чашки расчерчивают карандашом на 23 квадрата и в каждый квадрат засеянной среды стандартной петлей (диаметр 2 мм) или тонко оттянутой пипеткой наносят каплю соответствующего фага всегда в одном и том же порядке.
После подсыхания фага чашку переворачивают крышкой вниз и инкубируют 18-20 часов при 30°C или 5-6 часов при 37°C и оставляют до следующего утра при комнатной температуре.
Фаготипирование начинают рабочим разведением фагов, соответствующим I ТР. Штаммы, с которыми получен отрицательный результат, на следующий день типируют повторно, используя разведения фагов, соответствующие 100 ТР (разведение 1:10) в нашем опыте.
Учет и регистрация результатов
Штамм считается типируемым, если хотя бы один фаг вызвал сильную реакцию при типировании I ТР или 100 ТР. Стафилококковые штаммы чаще лизируются не одним, а несколькими фагами, что дает для каждого штамма характерную для него фагомозаику. В зависимости от фагов, входящих в эту мозаику, штамм стафилококка относят к тем или иным фагогруппам.
Существует ряд классификаций стрептококков. Наиболее проста классификация, основанная на особенностях роста этих микроорганизмов на агаре с кровью барана (по отношению к эритроцитам).
Бета — гемолитические стрептококки - при росте на кровяном агаре образуют вокруг колонии четкую зону гемолиза,
Альфа — гемолитические — вокруг колонии зеленоватое окрашивание и частичный гемолиз (позеленени обусловленно превращение окси- в метгемоглобин),
Альфа1 — гемолитические стрептококки по сравнению с ветта-гемолитическими стрептококками образуют менее выраженную и мутноватую зону гемолиза;
Альфа и альфа1-стрептококки называют S.viridans (зеленящими).
гамма- негемолитические —не вызывают гемолиза на плотной питательной среде.
Стрептококки плохо растут на простых питательных средах. Обычно используют среды с кровью или сывороткой крови. Чаще применяют сахарный бульон и кровяной агар, содержащий 5% дефибринированной крови. Среда не должна содержать восстанавливающихся сахаров, так как они угнетают гемолиз. На бульоне рост придонно — пристеночный в виде крошковатого осадка, бульон чаще прозрачен. Оптимум температуры +37о С, рН — 7,2-7,6. На плотных средах стрептококки серогруппы А образуют колонии трех типов:
- мукоидные — крупные, блестящие, напоминают капельку воды, но не имеют вязкую консистенцию, характерны для свежевыделенных вирулентных штаммов, имеющих капсулу;
- шероховатые — более крупные, чем мукоидные, плоские, с неровной поверхностью и фестончатыми краями — характерны для вирулентных штаммов, имеющих М- антигены;
- гладкие — мене крупные колонии с ровными краями, образуют невирулентные штаммы.
Не нашла ничего конкретного….
Нагноительные процессы: абсцесс, флегмона, отит, перитонит, плеврит, остеомиелит и т.д.
Рожистое воспаление - раневая инфекция
Гнойное осложнение ран
Ангины
Сепсисы
Ревматизм
Пневмония, менингит ползучая язва роговицы
Скарлатина
Кариес зубов
Серологическая классификация стрептококков построена на группировании микробов преимущественно по антигенным свойствам С-полисахарида. Существует около 20 серогрупп стрептококков, обозначаемых буквами латинского алфавита. Каждая из групп распадается на серотипы. Так, например, группа А включает около 80 серотипов, многие другие серогруппы также состоят из нескольких серотипов. Серотипирование построено на выявлении Т-антигенов, которые в значительном числе случаев не характеризуются высокой типоспецифичностыо и обычно присутствуют не столько в форме моноантигена, сколько в форме так называемых Т-комплексов. Более точная типовая классификация основана на типировании по М и OF белкам. Типовая принадлежность стрептококков В основана на выявлении типоспецифических полисахаридов и белковых антигенов. Патогенные для человека стрептококки относятся к группе А, В, D, реже – к С, F и G. Групповые полисахаридные антигены определяются с помощью соответствующих антисывороток в реакции преципитации.
Постинфекционный иммуните прочный, длительный (вторичные заболеввания наблюдаются в 2-16% случаев), обусловлен антитоксикантами и клетками иммуной защиты. У переболевших сохраняется и аллергическое состояние к скарлатинозному аллергену. Оно выявляется с помощью внутрикожного введения убитых стрептококков. У переболевших на месте введения- покраснение, припухлости, болезненность (проба Аристовского-Фанкони). Для проверки антитоксического иммунитета у детей используют реакцию Дика. С ее помощью установленно, что пассивный иммунитет у детей 1-го года жизни сохраняется в течение 3-4 месяцов.
Морфологические изменения при ревматизме затрагивают весь организм. При этом отмечается избирательная тропность к соединительной ткани. Локальные воспалительные очаги возникают главным образом вокруг мелких кровеносных сосудов.
Этиологическая связь стрептококков группы А с ревматизмом коротко может быть подтверждена следующими фактами. Во-первых, многочисленные клинические и эпидемиологические исследования продемонстрировали тесную связь инфекции, вызванной стрептококками группы А, с ревматизмом. Во-вторых, в острой фазе ревматизма практически всегда обнаруживаются иммунологические признаки перенесенной ранее стрептококковой инфекции (повышенные титры антител к стрептококковым антителам). Более того, в проспективных длительных исследованиях было показано, что ревматизм обостряется только вслед за интеркуррентной стрептококковой инфекцией. В-третьих, как первичные, так и повторные атаки ревматизма можно предотвратить адекватным лечением или профилактикой стрептококковой инфекции с помощью антибактериальной терапии. Воротами инфекции при начале ревматического процесса служит глотка. Стрептококковые поражения кожи или горла, вызванные некоторыми штаммами группы А, видимо, практически никогда не вызывают ревматизма.
Механизм, в соответствии с которым стрептококки группы А запускают патологический процесс, остается неизвестным. Ревматизм развивается у относительно небольшого процента лиц, перенесших стрептококковое заболевание горла. После того как через несколько дней или недель после острой стрептококковой инфекции развивается ревматизм, в пораженных органах микроорганизмы уже не обнаруживаются. Не было установлено причинной связи какой-либо из составных частей стрептококка с последующим развитием заболевания. Ни одна из них не выступает в качестве прямого тканевого токсина или антигена, вызывающего реакцию гиперчувствительности. Была выявлена перекрестная реактивность нескольких стрептококковых антигенов с тканями сердца и других органов. Однако их непосредственное отношение к патогенезу ревматизма не доказано, и аутоиммунный ответ, вызванный стрептококком, остается единственной популярной, но недоказанной патогенетической концепцией, объясняющей механизм ревматического процесса.
Белок М – главный фактор патог. М-белки стрептококка представляют собой фибриллярные молекулы, которые образуют фимбрии на поверхности клеточной стенки стрептококков группы А. М-белок определяет адгезивные свойства, угнетает фагоцитоз, определяет АГ типоспецифичность и обладает свойствами суперантигена.
Капсула. Состоит из гиалуроновой кислоты, аналогичной той, которая входит в состав ткани, поэтому фагоциты не распознают стрептококки, имеющие капсулу, как чужеродные антигены.
Эритрогенин – скарлатинозный токсин, суперАг, вызывает синдром токсического шока. Есть три серотипа( А В С). У больных скарлатиной вызывает появление ярко-красной сыпи на коже и слизистой. Обладает приогенным, аллергенным , иммуносупрессивным и митогенным дейсвием, разрушает тромбоциты.
Гемолизин (стрептолизин) О разрушает эритроциты , обладает цитотоксическим, в том числе лейкотоксическим и кардиотоксическим действием.
Гемолизин (стрептолизин) S – гемолитич и цитотоксич действие, слабее , чем гемолизин О.
Стрептокиназа – активирует фибринолизин крови – повышает инвазивные свойства.
Фактор, угнетающий хемотаксис (аминопептидаза)
Гиалуронидаза – фактор инвазии
Фактор помутнения – гидролиз липопротеидов сыворотки крови.
Протеазы – разрушение разл белков
ДНКазы
Способность взаимодействовать с Fc - фрагментом IgG – угнетение системы комплимента и активности фагоцитов
Выраженные аллергенные свойства стрептококков, которые обуславливают сенсибилизацию организма.
1. Белок М-главный фактор патогенности. М-белки стрептококка представляют собой фибриллярные молекулы, котлрые образуют фимбрии на поверхности стеночной клетки стрептококков группы-А. Ь-белок определяетадгезивные свойства, угнетают фагоцитоз. Определет антигенную типоспецифичность и обладает свойствами суперантигена.
2. Капсула – состоит из гиалуроновой кислоты, аналогичной той, которая входит в состав кожи, поэтому фагоциты не распознают стрептококки, имеющие капсулу, как чужеродные антигены.
3. Эритрогенин - скарлатинозный токсин, суперантиген, вызывает СТШ. Различают 3 серотипа (А,В и С). У больных скарлатиной он вызывает появление ярко-красной сыпи на коже и слизистой оболочке. Токсин обладает пирогенным, аллергенным, иммуносупрессивным и митогенным действием, разрушает тромбоциты.
4.Гемолизин (стрептолизин) О разрушает жритроциты, обладает цитотоксическим, в том числе лейкотоксическим и кардиотоксическим, действие, его образуют большенство стрептококков сергруппы А, С и G.
5. Гемолизин (стрептолизин) S обладает гемолитическим и цитотоксическим действие. В отличие от стрептолизина О, стрептолизин S, является очень слабым антигеном, его также продуцируют стрептококки серогруппы А, С и G.
6. Стрептокиназа- фермент, который превращает преактиватор в активатор, а он – плазминоген в плазмин, последний и гидролизует фибрин. Таким оброзом, стрептокиназа, активипуя фибринолиз крови, повышает инвазивные свойства стрептококка.
7. Фактор, угнетающий хемотаксис (аминопептидаза), подавляет подвижность нейтрофильных фагоцитов.
8.Гиалуронидаза-фактор инвазии.
9.Фактор помутнения- гидролиз липопротиедов сыворотки крови.
10. Протеазы- разрушение различных белков; возможно. С ними связанна тканевая токсичность.
11. ДНКазы (A,B,C,D) гидролиз ДНК.
12. Способность взаимодействия с Fc-фрагментом IgG с помощью рецептора2-угнетение системы комплемента и активности ыагоцитов
13. Выраженные аллергические свойствастрептококков, которые обуславливают сенсибилизацию организма.
Возбудителями скарлтины яляются стрептококки серогруппы А, имеющие М-антиген и продуцирующие эритрогенин. Этиологическую роль при скарлатине приписывают различным микроорганизмам- простейшим, анаэробным и другим коккам, стрептококкам, фильтрующимся стрептококка, вирусам.
Скарлатина - острое инфекционное заболевание, которое клинически проявляется ангиной, лимфоденитом, мелкоточечной ярко-красной сыпьюна коже и слизистой оболочкес последующим шелушением и аллергическим осложнением. Заражение при скарлатине происходит в основном воздушно-капельным путем, однако входными воротами могут быть и любые раневые поверхности. Инкубационный период 3—7, иногда 11 дней. В патогенезе скарлатины находят свое отражение 3 основных момента, связанные со свойствами возбудителя:
1. действие скарлатинозного токсина, который обусловливает развитие токсикоза — первый период болезни. Он характеризуется поражением периферических кровеносных сосудов, появлением мелкоточечной сыпи ярко-красного цвета, а также повышением температуры и общей интоксикацией. Развитие иммунитета связано с появлением и накоплением в крови антитоксина;
2. действие самого стрептококка. Оно неспецифично и проявляется в развитии различных гнойно-септических процессов (отиты, лимфадениты, нефриты появляются на 2—3-й нед. болезни);
3. сенсибилизация организма. Она находит свое отражение в виде различных осложнений типа нефрозонефритов, полиартритов, сердечно-сосудистых заболеваний и т. п. на 2—3-й нед. болезни.
В клинике скарлатины также различают 1(токсикоз) и 2 стадию, когда наблюдаются гнойно-воспалительные и аллергические осложнения. В связи с применением для лечения скарлатины антибиотиков (пеницеллин) частота и тяжесть осложнений значительно снизились.