Практическое использование:

1. исследование клеточного иммунитета

2. оценка гемопоэза

Исследование клеточного звена иммунитета у человека:

CD3 - Т-лимфоциты - норма в крови взрослого - 67-76%

CD3,CD4 - Т-хелперы - 38-46%

CD3,CD8 - Т-супрессоры - 31-40%

Соотношение хелперы/супрессоры - 1-1,5

(при СПИДе – соотношение снижается меньше 1)

CD19 - В-лимфоциты - норма - 11-16 %

CD16 - макрофаги

CD38 - плазмоциты

2. оценка гемопоэза:

• 1-4 классы зрелости – морфологически нераспознаваемые

• распознавание – иммунологическое – иммунофенотипирование

• суть метода

- часть рецепторных белков сохраняются в клетке всегда, они характеризуют тип кроветворения – лимфоидное, миелоидное и линию – Т- и В- лимфоциты

– при созревании клеток одни рецепторные белки на поверхности появляются, а другие исчезают

Иммуногистохимия

- метод качественного определения антигенов в клетках и тканях на гистологических срезах

Задачи метода:

1. определение гистогенетического типа исследуемой ткани

2. определение иммунофенотипа клеток

3. оценка процессов пролиферации (Ki-67, PCNA) и апоптоза (СD 95) в ткани

4. определение наличия рецепторов к гормонам

5. определение ростовых факторов (IL 1-16)

6. выявление онкопротеинов (р21, р53, N-MYC и т.д.)

7. определение типов коллагена (I, II, IY типа)

8. микробиология/вирусология (гепатиты В и С, цитомегаловирус, герпес и т.д.)

Окраска:

Моноклональные антитела

Определение гистогенетического типа клеток тканей:

• основано на выявлении белков промежуточных филаментов, специфичных для клеток определенных тканей

1. эпителиальные ткани - выявляется кератин (Кeratin)

2. соединительные ткани - виментин (Vimentin)

3. нервная ткань - S100 protein

4. мышечные ткани - десмин (Desmin)

5. лимфоидная и миелоидная ткани - общий лейкоцитарный антиген (LCA)

Цитогенетический метод

- метод качественного и количественного анализа хромосом человека

Актуальность:

1. шесть из 1000 детей рождаются с различными хромосомными нарушениями

2. увеличение возраста матерей - критический возраст матери, после которого вероятность рождения больного ребенка резко возрастает – 35 лет

3. диагностика опухолевых заболеваний, учет при выборе тактики лечения и определение прогноза заболевания

Принцип метода:

• т.к. анализ осуществляется на хромосомах, а последние возможно наблюдать во время митоза то:

1. исследуемые клетки обрабатывают веществом,

стимулирующим митотическую активность -

фитогемагглютинином (ФГА) в условиях in vitro

2. накопление числа метафазных пластинок – в результате разрушения веретена деления - колхицин

3. отбор метафазной пластинки, где хромосомы не

наслаиваются, не наползают друг на друга

4. раскладка хромосом

5. анализ

10