Лабораторная диагностика клещевого энцефалита включает: определение антител класса IgM,
определение нарастания титра антител
Отечественные ученые, внесшие вклад в изучение клещевого энцефалита: Л.А. ЗильберМ.П. Чумаков
Переносчиками возбудителей болезни Лайма и клещевого энцефалита являются: таёжный клещ,
иксодовые клещи
Основной путь передачи возбудителя клещевого энцефалита: при укусе клеща
Активная специфическая профилактика клещевого энцефалита проводится с помощью:
инактивированных культуральных вакцин
Для вируса кори верно:геном представлен РНК
Коревая инфекция:оставляет прочный пожизненный иммунитет
Классификация вируса кори:семейство Paramyxoviridae, род Morbillivirus
Источник инфекции при кори:больной человек
Путь передачи при кори:воздушно капельный
Для специфической профилактики кори используют:живую вакцину
Вирус эпидемического паротита:РНК содержащий,имеет спиральный тип симметрии капсида,сложный
Источник инфекции при эпидемическом паротите:больной человек
Основной путь передачи при эпидемическом паротите:воздушно капельный
Для активной профилактики эпидемического паротита применяют:живую вакцину
Вирус краснухи:РНК содержащий
Источники инфекции при краснухе:больные люди, больные с бессимптомной формой инфекции,
дети с синдромом врожденной краснухи 1 2 го года жизни
Путь передачи вируса краснухи:воздушно капельный
Путь передачи вируса при врожденной краснухе: трансплацентарный
Вирус эпидемического паротита:обладает тропизмом к тканям слюнных желез
Характерная сыпь на коже и слизистых появляется при заболевании:корью
Что из перечисленного верно для ветряной оспы:механизм передачи аэрогенный,источник
инфекции – больной человек
Что из перечисленного верно для ветряной оспы:вирус персистирует в нервных ганглиях,
развивается вирусемия
Ротавирус:геном представлен фрагментированной двухцепочечной РНК,относится к реовирусам
Что из перечисленного относится к вирусу краснухи:вызывает лихорадочное заболевание с
сыпью, вызывает врожденные пороки сердца, вызывает врожденную глухоту
Живые вакцины применяются:для иммунизации против полиомиелита, против кори
Вирусы рода Enterovirus:РНК содержащие,имеют кубический тип симметрии,
Исследуемый материал для лабораторной диагностики полиомиелита: фекалии, ликвор Исследуемый материал для лабораторной диагностики полиомиелита:отделяемое носоглотки,
сыворотка крови
Источники инфекции при полиомиелите: больные, вирусоносители
Пути передачи инфекции при полиомиелите:алиментарный,контактный
Впервые массовое производство живой полиомиелитной вакцины на основе штаммов А.
Сэйбина осуществлено в:СССР А.А. Смородинцевым, М.П. Чумаковым (1959)
Вирус гепатита: РНК содержащий
Для гепатита А характерно: фекально оральный механизм заражения,антропонозная инфекция
Источник инфекции при гепатите: больной человек
Больной гепатитом А наиболее опасен для окружающих:в конце инкубационного периода, в
преджелтушный период
К вирусным гепатитам с парентеральным механизмом передачи относятся:гепатит Д,В,С
Вирусные гепатиты с энтеральным механизмом передачи:гепатит А, Е
Классификация вируса гепатита В:сем. Hepadnaviridae, род Orthohepadnavirus
Вирусоносительство характерно для:гепатита В
Источники инфекции при гепатите В:вирусоносители, больные
Пути передачи при гепатите В:инъекционный, половой
Для профилактики гепатита В применяют:генно инженерную дрожжевую вакцину
Источники инфекции при гепатите С:вирусоносители,больные
Профилактика гепатита С включает: качественную стерилизацию медицинских инструментов,
проверку донорской крови,миспользование одноразовых шприцев
Для ВИЧ характерно:наличие обратной транскриптазы,конусообразная сердцевина,наличие
суперкапсида
Рецептор ВИЧ, обеспечивающий взаимодействие с клетками мишенями:gp120
Источники ВИЧ инфекции:больные, вирусоносители
Пути передачи при ВИЧ инфекции: трансплацентарный, половой
Пути передачи при ВИЧ инфекции: транфузионный, инъекционный
От инфицированной матери к ребенку ВИЧ передается:в период внутриутробного развития,во время родов, при кормлении грудью.
Основной мишенью ВИЧ являются;Т хелперы
Рецептор клеток мишеней для ВИЧ:CD 4
Метод иммуноблоттинга предусматривает определение:антител к поверхностным и
сердцевинным антигенам
Грибы являются:гетеротрофами,эукариотами
Для выделения грибов используют среду:Сабуро
Основным методом лабораторной диагностики микозов является:микроскопический
Заболевания профессионального характера вызывают плесневые грибы рода:Penicillium
Aspergillus,Mucor
Этиологическими агентами глубоких микозов являются:Histoplasma capsulatum,Cryptococcus
Neoformans
Этиологическими агентами поверхностных микозов являются: Epidermophyton floccosum,
Trichophyton schoenleini, Microsporum canis
К противогрибковым антибиотикам относятся: нистатин, леворин
Поражение волос вызывают:Microsporum canis,Trichophyton schoenleini
Поражение кожи кистей и стоп, а также ногтей вызывает: Epidermophyton floccosum
Тема: Принципы и методы лабораторной диагностики вирусных инфекций. Ортомиксовирусы. Вирус гриппа. Биологические свойства. Патогенез и клиника гриппа. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика гриппа.
Разделы диагностики вирусных инфекций.
Диагностика вирусных инфекций включает в себя следующие разделы:
1. Клинико-эпидемиологический диагноз:
- анализ эпидемической обстановки;
- клинические проявления заболевания.
2. Лабораторные методы диагностики.
К данным эпидемической обстановки относятся сведения о скорости распространения болезни, об охвате инфекцией населения, о случаях смерти, сезонности, наличии переносчиков инфекции, вакцинации людей против данной инфекции и др.
Клиническ ие признаки болезни включают данные о температуре, пульсе, дыхании, состоянии кожных покровов и другие симптомы.
Тщательный анализ всех названных сведений позволяет поставить клинико-эпидемический диагноз, который носит только предварительный характер. Для того чтобы поставить окончательный диагноз на вирусное заболевание, необходимо провести лабораторные исследования материала, взятого от больных.
Лабораторные методы диагностики вирусных инфекций включают следующие процедуры:
- вирусоскопическое исследование препаратов;
- выделение и идентификация возбудителя;
- обнаружение антигенов вирусов в образцах исследуемого материала;
- обнаружение и определение титров противовирусных антител.
Вирусоскопическое исследование препаратов при диагностике вирусных заболеваний проводится с помощью экспресс-методов, позволяющих обнаружить в патологическом материале вирусные антигены, тельца-включения и элементарные тельца.
Для обнаружения вирусных антигенов в патологическом материале используют наиболее чувствительные методы, так как концентрация антигенов в нем обычно бывает низкой. Наиболее широко используют РИФ (реакция иммунофлуоресценции). Для этого из патологического материала готовят мазки-отпечатки или срезы, которые обрабатывают гипериммунными сыворотками, предварительно мечеными флуорохромами. Препараты просматривают с помощью люминесцентного микроскопа. У гемагглютинирующих вирусов вирусные гемагглютинины в материале обнаруживаются с помощью реакции гемагглютинации. Явление гемагглютинации - склеивание эритроцитов крови в присутствии вируса.
Тельца-включения - это внутриклеточные включения, образующиеся в клетках как результат репродукции в них некоторых вирусов. Как правило, РНК-вирусы образуют цитоплазматические включения, ДНК-вирусы - внутриядерные. Наиболее известны и имеют практическое значение тельца Бабеша-Негри, образуемые вирусом бешенства в цитоплазме нервных клеток. Обнаружение телец-включений при вирусных болезнях имеет лишь вспомогательное диагностическое значение. Крупные вирусы (элементарные тельца) в исследуемом материале обнаруживают под обычным световым микроскопом после их обработки солями тяжелых металлов (например, элементарные тельца при оспе).
Выделение и идентификация возбудителя - главное в диагностике вирусных инфекций. Для выделения вирусов используют следующие биологические системы:
- культуры клеток;
- куриные эмбрионы;
- лабораторных животных.
Культуры клеток. Для заражения культуры клеток во флаконы с монослоем вносят небольшое количество вируссодержащей суспензии. После небольшого контакта добавляют поддерживающую питательную среду и помещаются в термостат. В лабораториях используют следующие виды клеточных культур:
а) Первично-трипсинизированные культуры.
б) Полуперевиваемые линии клеток.
в) Перевиваемые линии клеток.
Признаками размножения вируса в культуре клеток является изменение морфологии клеток, их округление, гибель, фрагментация и другие изменения.
Куриные эмбрионы. Заражение куриных эмбрионов проводят следующими способами:
- на хорион-аллантоисную мембрану;
- в амниотическую полость;
- в аллантоисную полость;
- в желточный мешок.
Признаками размножения вируса в куриных эмбрионах являются их гибель и патологоанатомические изменения на оболочках и структурах эмбриона.
Лабораторные животные. Наиболее часто используют белых мышей, белых крыс, хомячков, морских свинок, кроликов, птиц и обезьян. Существует большое количество методов введения инфекционного материала лабораторным животным. Выбор метода заражения зависит от тропизма вирусов и чувствительности животного. За зараженными животными устанавливают контроль, отмечая изменение в их поведении, появление специфических признаков болезни. Признаками репродукции вирусов в организме животных являются их гибель, клинические признаки болезни и патологоанатомические изменения в тканях.
Идентификация вирусов. После выделения вируса необходимо провести идентификацию, то есть определить вид выделенного вируса. Идентификацию вирусов осуществляют по эффектам, наблюдаемым на животных моделях (повышение температуры тела, появление характерных клинических признаков, гибель и т. д.), куриных эмбрионах и культурах клеток. Под воздействием конкретных вирусов возможно изменение морфологии, роста, репродукции клеток, либо их разрушение. Факт размножения вирусов в чувствительных клетках in vitro определяют по следующим критериям:
- цитопатические эффекты;
- бляшкообразование;
- тельца включений;
- феномен гемадсорбции;
- “цветная реакция”.
Цитопатические эффекты (ЦПД - цитопатическое действие, ЦПЭ -цитопатический эффект) оценивают при микроскопии клеточных культур. ЦПД - это любые изменения клеток под влиянием размножающегося в ней вируса. Оно устанавливается под малым увеличением светового микроскопа. Формы ЦПД разнообразны - от едва заметных изменений в цитоплазме до полного распада клеток на фрагменты. Некоторые вирусы вызывают характерные цитопатические изменения, что позволяет быстро поставить предварительный диагноз. Например, размножение парамиксовирусов (вирусы кори, паротита) сопровождается появлением характерных гигантских многоядерных клеток; аденовирусы вызывают образование скоплений больших круглых клеток, а при репродукции герпесвирусов клетки округлой формы диффузно располагаются по всему монослою.
Бляшкообразование. Бляшками называют негативные колонии - участки разрушенных клеток (зоны просветления) на монослое клеток, покрытом слоем агара. В некоторых случаях дозу и цитопатогенность вируса выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ).
Тельца включений. Многие вирусы вызывают появление в заражённых клетках характерных образований - скоплений вирусных белков или частиц, видимых в световой микроскоп. Тельца включений могут располагаться как в цитоплазме (тельца Гварнери при оспе), так и в ядрах клеток (аденовирусы).
Феномен гемадсорбции. Методом гемадсорбции обнаруживают вирусы, обладающие гемагглютинирующими свойствами. Гемадсорбция - это прилипание эритроцитов к поверхности клеток, зараженных гемагглютинирующим вирусом. Для наблюдения гемадсорбции необходимо из флакона с зараженной вирусом культурой клеток удалить культуральную жидкость и добавить 2-3 капли 2,5%-ной суспензии эритроцитов. Флаконы оставляют в горизонтальном положении в течение 10 минут, затем слой клеток споласкивают физраствором, чтобы смыть эритроциты. Если в зараженной культуре клеток происходит репродукция вируса, на таких клетках под микроскопом можно видеть адсорбированные эритроциты.
“Цветная реакция”. В культуральную среду, используемую для поддержания клеток, вносят индикатор. Рост клеток сопровождается накоплением метаболитов, сдвигом рН среды и изменением окраски индикатора. Заражение культур вирусом резко ингибирует клеточный метаболизм, и среда сохраняет первоначальный (красно-оранжевый) цвет. Если клетки остаются жизнеспособными, питательная среда желтеет.
Определение инфекционности вирусов. Наиболее доступная форма количественного определения - подсчет числа вирусных бляшек. Прямые тесты на инфекционность применяют для установления инфекционной дозы (ИД) или летальной дозы (ЛД) изучаемого вируса (обычно выражают в lg). ИД50 - разведение, инфицирующее 50% клеток; ЛД50 - разведение, убивающее 50% пораженных клеток или животных.
Количественную электронную микроскопию применяют для подсчета общего числа вирусных (но не инфекционных) частиц в исследуемом объекте (например, культуральной жидкости). Однако чаще всего этот метод недоступен из-за отсутствия столь дорогого и сложного прибора.
Для выявления вирусных антигенов наиболее распространенным методом является реакция гемагглютинации. Метод основан на способности вирусов сорбироваться на поверхности эритроцитов животных и человека.
Если вирус выделен на культуре клеток, и он дает гемадсорбцию, то используют реакцию торможения гемадсорбции - РТГАд.
Если вирус обладает гемагглютинирующей активностью, наиболее целесообразно для идентификации использовать реакцию торможения гемагглютинации - РТГА.
Если выделенный вирус указанными свойствами не обладает, то его идентификацию проводят с помощью реакции диффузной преципитации в агаровом геле - РДП. Но для постановки этой реакции вирусный антиген и гипериммунная сыворотка должны быть в высоких титрах, так как РДП обладает сравнительно низкой чувствительностью.
Если РТГАд, РТГА и РДП воспользоваться не представляется возможным, то для идентификации выделенного вируса используют реакцию связывания комплемента (РСК) с разными разведениями известных сывороток и несколькими дозами комплемента. Предпочтительнее ставить эту реакцию длительно на холоде (18-20 часов при +2…-4°С).
Наиболее универсальной и дающей более достоверные результаты при идентификации выделенных вирусов является реакция нейтрализации - РН. Вместе с тем постановка РН требует длительной работы и вложения большого труда.
ИФА. В настоящее время уже появились коммерческие наборы для выявления антигенов некоторых возбудителей, позволяющие их идентифицировать в течение 5-10 минут. Для выявления антигенов на твердой фазе сорбируют известные антитела и добавляют исследуемую сыворотку, содержащую антиген. После инкубирования несвязанный антиген декантируют, систему промывают и вносят меченые антитела, специфичные к сорбированным антителам. Повторяют процедуру инкубирования и отмывания, вносят хромогенный субстрат, положительный результат фиксируют при изменении окраски системы.
Гибридизация ДНК - высокоспецифичный метод, позволяющий идентифицировать геном вируса после его гибридизации комплементарными молекулами ДНК. В качестве маркёра применяют ферменты и изотопы. Метод определяет способность вирусной ДНК гибридизироваться с меченой комплементарной ДНК; специфичность метода прямо пропорциональна длине комплементарной цепочки. Перспективен метод гибридизации нуклеиновых кислот in situ. Для постановки реакции меченую ДНК наносят на биоптаты тканей (в том числе на фиксированные формалином или заключенные в парафиновые блоки) и регистрируют взаимодействие с комплементарной ДНК. Метод используют для выявления вирусов простого герпеса, папилломы человека, Эпстайна-Барр и др.
ПЦР. Метод значительно увеличивает чувствительность метода гибридизации, повышая содержание вирусной ДНК в материале, полученном от больного, а также ускоряет время получения результата.
Выявление противовирусных антител в сыворотке крови. Более простой и доступный подход - выявление противовирусных антител в сыворотке. Образцы крови необходимо отбирать дважды: немедленно после появления клинических признаков и через 2-3 недели. Чрезвычайно важно исследовать именно два образца сыворотки. На наличие заболевания в период отбора первой пробы указывает не менее чем четырехкратное увеличение титра антител, выявленное при исследовании второй пробы.
РТГА выявляет антитела, синтезируемые против гемагглютининов вирусов (например, вируса гриппа). Метод позволяет легко выявлять подобные антитела в сыворотке больного.
РСК - основной метод серодиагностики вирусных инфекций. Реакция выявляет комплементсвязывающие IgM и IgG, но не дифференцирует их.
РИФ. При возможности получить биоптат инфицированной ткани и доступности коммерческих наборов антител, меченных флюоресцеином, диагноз может подтвердить реакция прямой иммунофлюоресценции. Постановка реакции включает инкубацию исследуемой ткани с антителами, их последующее удаление и люминесцентную микроскопию образца.
Иммуносорбционные методы (например, ИФА и РИА) более информативны, поскольку выявляют IgM и IgG по отдельности, что позволяет делать определенные выводы о динамике инфекционного процесса или состоянии реконвалесценции. Для выявления антител известный антиген сорбируют на твердом субстрате (например, на стенках пробирок, пластиковых микропланшетах, чашках Петри) и вносят различные разведения сыворотки пациента. После соответствующей инкубации несвязавшиеся антитела удаляют, вносят антисыворотку к Ig человека, меченную ферментом, повторяют процедуру инкубирования и отмывания несвязанных антител и вносят какой-либо хромогенный субстрат (чувствительный к действию фермента). Поскольку изменение окраски пропорционально содержанию специфических антител, то вполне возможно определение их титра спектрофотометрическим способом.
Серологические методы диагностики вирусных болезней. В вирусологии широко используют следующие серологические реакции:
- нейтрализации – РН;
- торможения гемагглютинации – РТГА;
- непрямой гемагглютинации – РНГА;
- связывания комплемента – РСК;
- диффузной преципитации – РДП;
- торможения гемадсорбции – РТГАд;
- иммунофлуоресценции - РИФ.
1. Реакция нейтрализации (РН) основана на подавлении цитопатогенного эффекта после смешивания вируса со специфичными антителами. Неизвестный вирус смешивают с известными коммерческими антисыворотками и после соответствующей инкубации вносят в монослой клеток. Отсутствие гибели клеток указывает на несоответствие инфекционного агента и известных антител. Реакция нейтрализации ставится в двух модификациях: а) с разными разведениями исследуемой сыворотки и постоянной дозой известного вируса для обнаружения и титрования неизвестных противовирусных антител; б) с постоянным разведением известной гипериммунной сыворотки и разными дозами вируса для идентификации неизвестного выделенного вируса по индексу нейтрализации.