2.1.5 Санитарно-микробиологические методы исследования
Использовали окрашивание раствором розоловой кислоты (аурина).
Кусочки мышц с личинками освобождали от жира. На ткань наносили капли розоловой кислоты, а через 2 мин - 0,1 н раствор гидроксида калия, равномерно распределяя его по ткани. Избыток жидкости с препарата снимали фильтровальной бумагой. Накрывали покровньм стеклом и микроскопировали. В этих опытах ткань рыбы окрашивалась в розовый цвет, живые личинки совершенно не окрашивались; мертвые личинки становились розовыми.
Определяли также путем высевания на мясопептонный агар в 2 параллельные чашки, определяли путем посева на среду Кесслер и последующим пересевом положительных проб на плотную дифференциальную среду Эндо; S. Aureus определяли путем посева на солевой рыбопептонный бульон и последующим пересевом на элективную среду - желточно-солевой агар; бактерии рода Salmonella определяли при посеве на среду обогащения (селенитовый бульон) с последующим пересевом в чашки Петри на плотную дифференциально-диагностическую среду - висмут-сульфит агар; бактерии L. monocytogenes определяли путем посева на селективную среду для предварительного обогащения (бульон Фразера) и последующего пересева на селективно-диагностическую среду ПАЛ.
Изучение микробиологических показателей показало, что из мяса рыбы с ИИ более 51 экз. выделена культура кишечной палочки серотипа О19 в одной пробе, а также отмечено превышение КМА-ФАнМ в одной пробе, что превышает допустимую норму по СанПиН 2.3.2.1078-01. Выделение условно-патогенных микроорганизмов из опытных проб рыб, пораженных описторхозом, по-видимому, можно объяснить их проникновением вместе с личинками во время их проникновения через кожный покров рыб, их миграции и в связи с этим ослаблением общей резистентности организма рыб.
2.2 Методы обезвреживания рыбы, пораженной описторхозом
варить рыбу в течение 15-20 минут с момента закипания воды, кусками не более 150г. (крупные экземпляры разрезать на куски);
жарить небольшими кусками весом не более 100 г. в распластанном виде кожицей вниз под крышкой на слабом огне в течение 20-25 минут с каждой стороны в обильном количестве масла;
солить мелкую рыбу в течение 14 дней, крупную (свыше 25 см) в течение 40 суток с добавлением 2 кг соли на 10 кг рыбы, или 200 г соли на 1 кг рыбы, а при плюсовой температуре из расчета 3,5 кг соли на 10 кг рыбы, но вялить 2-3 недели в зависимости от климатических условий (если дождливая погода - то вялить более 3-х недель) с последующим вымачиванием;
вялить по вкусу с предварительным посолом - в течение 2-х недель (вяление рыбы не является способом обезвреживания, если не выдержана технология засола);
горячее копчение при температуре 70-80о в течение 2,5 ч, не рекомендуется солить и вялить язя в домашних условиях,
использованный разделочный инвентарь прокипятить в течение 3-5 минут и хорошо промыть с использованием моющих средств,
Личинки описторхид погибают при низкой температуре (минус 40 градусов в толще рыбы) в течение 7 часов; замораживание рыбы весом до 1 кг при температуре минус 28 градусов в течение 41 часа, при температуре минус 35 градусов в течение 10 часов. Поэтому домашний холодильник (минус 15 градусов - температура в морозильной камере) не убивает личинки паразита, поэтому не рекомендуется использовать камеры бытовых холодильников для обезвреживания даже мелкой рыбы.
3. Исследования по сравнительной оценке методов индикации, определения жизнеспособности и дифференциальной диагностики метацеркарий o. felineus
Стоить отметить также, что большинство из исследованных нами рыб были инвазированы другими метацеркариями трематод, а именно: Paracaenogonimus ovatus (сем. Prohemistomidae), Bolbophoras confiisus (сем. Posthodiplostomidae).
Видовую принадлежность метацеркарий определяли по Сударикову В.Е. (2002). Их нужно дифференцировать исходя из анатомо-морфологических признаков, имея в виду, что до наших исследований не указывалось на наличие этих трематод. Принцип дифференциации указанных видов трематод основан на строении метацеркарий, размеру и форме цист, размеру и форме метацеркарий, освобожденных из цисты.
При обнаружении личинок в рыбе, в том числе при оценке эффективности ее обеззараживания, необходимо определять их жизнеспособность. Нами проведена сравнительная оценка ряда методов определения жизнеспособности личинок описторхисов.
По морфологическим признакам. Метацеркарий трематод, выделенных из тканей рыбы с помощью препаровальной иглы, помещали в каплю теплой воды или физраствора (37-40 градусов) на предметное стекло, накрывали покровным стеклом и исследовали под малым и большим увеличением микроскопа. Явное нарушение целости оболочек цист, грубые изменения внутреннего строения личинки, распад ее содержимого, разрушение экскреторного пузыря являются признаками гибели метацеркарий. Отсутствие указанных показателей свидетельствует о наличии живых личинок.
Метод механического воздействия. Как известно, метацеркарий обладают способностью совершать движения, находясь в цисте. Наличие даже самых слабых самостоятельных движений личинки свидетельствует о ее жизнеспособности. В этой связи движение личинок стимулировали слабым придавливанием метацеркарий покровным стеклом.
Метод химического воздействия. Вызвать движение личинок можно желчью животных или трипсином. На выделенных метацеркарий наносили несколько капель химического реагента так, чтобы полностью покрыть личинок. Для ускорения эксцистирования предметное (часовое) стекло с личинками слегка подогревали над пламенем спиртовки. Через несколько секунд под воздействием химического раздражителя начинался выход личинок из цист и их активное движение, что служило показателем жизнеспособности. Процесс эксцистирования личинок контролировали под микроскопом. При отсутствии в течение 30 мин всякой двигательной реакции следует учитывать как гибель личинок.
Заключение
Проведенными исследованиями определено, что процент обнаружения метацеркарий в разных группах мышц неодинаков и составляет в среднеспинных мышцах - 51,52%, переднеспинных - 28,84%, верхнехвостовых 15,94%, грудных - 1,52%, брюшных - 1,33% и нижнехвостовых - 0,85%.
Установлено, что описторхоз рыб может протекать как моноинвазия, так и в смешанной форме (в большинстве случаев) с поражением метацеркариями других трематод, что необходимо учитывать при постановке диагноза на описторхоз.
При внешнем осмотре и патологоанатомическом исследовании рыб, пораженных описторхозом, клинических симптомов болезни и видимых патологических изменений в органах и тканях не отмечается, за исключением отставания в росте на 7,4% и уменьшении массы тела на 1,5% у рыб с высокой интенсивностью инвазии в сравнении со здоровой, а также наличия дегенеративных изменений в виде зернистой дистрофии небольших участков мышечной ткани с утраченной поперечной исчерченностью и разрастанием соединительной ткани вокруг метацеркарий.
Установлено, что по органолептическим и физико-химическим показателям мясо рыб, пораженных описторхозом, находится в пределах требований к доброкачественной рыбе и не зависит от ее интенсивности инвазии.
По результатам санитарно-микробиологического исследования мясо рыб с низкой и средней интенсивностью инвазии соответствуют требованиям существующих нормативов содержания микрофлоры, а при высокой интенсивности отмечено превышение уровня содержания кишечной палочки.
При изучении химического состава мяса рыб, пораженных описторхозом, выявлена зависимость, что чем выше интенсивность инвазии, тем больше содержание влаги в нем и тем меньше белка, жира, золы, кальция и фосфора и ниже калорийность, что указывает на более низкую энергетическую ценность, особенно мяса рыб с высокой ИИ (87,17 ккал) в сравнении со здоровой рыбой.
Проведенными исследованиями определена тенденция достоверного снижения относительной биологической ценности (на 2,7%) мяса рыб, пораженных описторхозом, при высокой степени инвазии.
Список использованной литературы
1. Акбаев М.Ш. и др. Паразитология и инвазионные болезни. М.: Колос, 2002 г. - 251 с.;
. Артемьева С.А. и др. Микробиологический контроль мяса животных, птицы, яиц и продуктов их переработки. М.: Колос, - 2003 г. - 288 с.;
. Архипов И.А. и др. Состояние по основным гельминтозам животных и перспективы их профилактики. Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями. М.: - вып.5., - 2004г. - 40 с.;
. Белоусов В.И. Надзор за безопасностью в ветеринарном отношении продуктов аквакультуры. Сборник "Эпизоотический мониторинг в аквакультуре: состояние и перспективы". - М.: - 2005 г. - 100 с.;
. Беляева М.И., Катин A.A., Пустовалова В.Я. Видовой состав и зараженность вторых промежуточных хозяев. Проблемы современной паразитологии. - СПб. - 2003г. - 75 с.;
. Беэр С.А. Биология возбудителя описторхоза. М. - КМК. - 2005г. - 336с.;