Материал: Микробиология_Лысак, В.В_изд БГУ 2007 -430с
{ + E. coli -12
O * # – 1
G$ + E. coli C
O * #- 
– 10–4–10–5 G$
++
|
E. coli -12 |
E. coli C |
|
|
O * |
||
O * # – |
|||
# – 1 |
|||
–4 |
–5 |
||
10 |
–10 |
|
|
G$ G$
. 76. O # ! # $> !! + E. coli
$ $* , >? $< + ! - ! ( ! R-M) ! # % ! $ #-$ 6 !! ! ! ! ! – -!- >? ! (- $ !$) ? #$>? ! ( ). O ! > ' #$ #-$ $* $ – . $, ! #-$ $% + , ? ? + - , >? + ' $> #$ $* *.
! ! 6 # + + # % < $< .' < '' +. < 6 !! ! ! $> , $% >? ! '-+ < ! + .
& % + $ % > + R. ! $ # + < # < +, $ $ ! , # ! Bacillus subtilis – Bsu, Escherichia coli – Eco. P$ ' #$! 6 !! ! -$* ! ! , #$ $* %$ % . G ! ! ! !-* #$! ! ! ! , > ! $ < ! ! 1$! . # ! ,
244
EcoR1 ! , ! ! !
#$! + R1; EcoP1 – ! , ! ! ! 1. & ? ! ! #-< < ? #$ $< #$ -$* + $> # : I, II III.
/ I $> $' ! $! ! $%- ! # ! A (1$, !$, ! ).$ + 1 < ! % > CKG, S-! Mg2+. ? #$ ! ?$! CKG. I # > + , ?-
#$> #$ $* * #$* ! +( $* < $* < % # $ - ). & $* > ! ! ,$ . K ! ' #$* * $ 6--' < %.
! ! II # #$ ! -$* ! $! ( 1$, ! !$). / II – $* # -$, ? < A # $*$*6 + !$ $+ ! +. $ # % + 1 < ! ' $* Mg2+. II # <- > !, % < + ! # > . D % II # #$> #$ $* *1 + #$ $* . + -II # #$ !! % ! # #180º #$ $* ! – :
5x… GAATTC… 3x |
_ + |
3x…CTTAAG… 5x |
EcoR1 |
II # $ $* $ ! ! + $ #$% ! < ! :
1)!$? # ? – + #$ 4 #. .;
2)? # ? – + – 6–8 #. .;
3)# ? # ? – + – 10–14 #. .
II # $ ## ! , - ! ! ? #$> #$ $* * . D < ?$> # ! + (# !! ). & $* - > ! # ! $ ! ! . = ! ! < $ 1$ BalI:
245
3x…TGGCCA…5x BalI |
3x…TGG CCA…5x |
3x…TGG |
+ |
CCA…5x |
|
5x…ACCGGT…3x |
5x ACC GGT…3x |
5x…ACC |
GGT…3x |
||
|
|||||
|
|
|
|
|
, ? + ## , ?$> #- % + ( ! !! ). & $* 1 ! > , $ $# , , . . -! > < < ! !#$! % . = ! ! < $ ! EcoR1:
EcoR1 |
|
|
|
# + |
|
|
|
|
|
|
|
5x…G |
AA |
¦ TTC…3x |
5x…G |
+ AATTC…3x |
|
|
¦ AA |
G…5x |
|||
3x…C TT |
3x…CTTAA |
G…5x |
|||
# +
EcoR1
, #$% #$ + !$ $ #$+ , ! > $# . K -! A * ! ! !- < !$ $ , % 6 #$* % + ' .
/ III ! > < ! I # . G ! < $% < A (1$, !$), # 1 ! $, . . $ +,!$+ *>. $ #$ 1$+ -> $* CKG Mg2+. ? #$ #- ' $! CKG. III # $>20–39 #. . + # 1 ! ' $*#$* > $ # % < $+.
G ! * ! < - . O $% ! , < ! $ #$-$ % 1 ! { # # !$* < $ - <. D# !$* $ $ ' + $>$* ! , + $ , # #$< , !# # .
7.8. % %/ % . " %$% # %$ $ " : ! <
$ # – # * ! , #$>? < * in vitro ! !$ $ , #$>? ! - ! 1 < < % < ' > $.
246
K < ! % + % < ! # ,in vitro ! ' ! $> < - ! . & 1 ! !$ ! in vitro $% % + - % + ! , !$ , #$, ?$ #$< $ $< . - ! $! , % ! ! % + ! + ( A> , , ! ) #$> # ! ! , % ' , #- # , ! ' *, $ # ! ? #$< < ' < ! .
$ % ? * -' + 1 # ! , . . * ! > $ ! , < ! $> $>? $:
! * ! $ !$ $ ! ;
! * ! $ ! , $<$% < % ;
# * # % , $ , # % < - > $ ! . O $' !$* #$* $ # % * #$> - ! ;
* # < $ ! < !- $ $ ' > $;
#$* ! ($) $ # + $, # 6 + > !$ $ .
! ! ! ! $> #$! , , - # <, # #$* ! < ! ! + +. &-<, #$! ' , $ ! # # ! ' $* , ' ? #$! , +, $6 < #$! . # ! , R-#$! ' ,+% * !. = +, ' ? < R-#$! , ! -! * $, , $6 <, - ! .
* !$ $ ! ! ' # ! ?*> ! . < ! # * # % > , !$ + < !$ $< (#$! , + > # ! ) $ < ! $# < . $' * #$! $, + #$>, $ < , !- >? < # #$! .
247
* $ 6 * ! ! ' # ! ?*> !-#$ $ $.
& * ! !$ $ ! ' # ! ?*> - ! . ! + > # $ ($, $ ' + ) % #$+ #- ! ' ! ' # # !$* + !# ! * > $> , #$>? > * # #$, # 6 #$! .
< ! 1 # ! # > ! +$> $< + #$ . 77.
R-#$!
R ' c >? ! !
-
+ $
|
|
( ) |
# |
|
|
|
|
|
! 6 , $+
!
K !
$* < ! !
$ 
$
. 77. =$% $ ! +
$ 6$ 6 # ! . # ! ?*> ! ' #$% * !$% ! # ! # , #$* >?
248