Федеральное государственное автономное
образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»
Институт Фундаментальной Биологии и Биотехнологии
Кафедра Медицинской биологии
УТВЕРЖДАЮ Заведующий кафедрой
_____ ______________
подпись инициалы, фамилия
« _____» _______ 2013 г.
ОТЧЁТ О ПРАКТИКЕ
Механическая желтуха
Руководители _____________ 15.09.13 канд. биол. наук, проф. Смирнова О.В.
подпись
Студент ББ11-02Б ________ 15.09.13 Шангина Ю.С.
подпись
Красноярск 2013
СОДЕРЖАНИЕ
Список сокращений………………………………………………………………..3
Введение……………………………………………………………………………4
1 Обзор литературы………………………………………………………………..5
1.1 Определение, классификация механической желтухи……………………5
1.2 Патофизиология……………………………………………………………...6
1.3 Диагностический подход………………………………………………….....8
1.4 Обязательные исследования для больных желтухой……………………..10
1.5 Иммунный статус…………………………………………………………...14
1.6 Иммуноферментный анализ………………………………………………..17
1.7 Хемилюминесцентный анализ оценки активности нейтрофильных гранулоцитов. …………………………………………………………………...22
2 Материалы и методы…………………………………………………………...23
2.1 Объект исследования……………………………………………………….23
2.2 Метод исследования иммунного статуса………………………………….24
2.3 Метод определения хемилюминесцентного анализа оценки активности нейтровильных гранулоцитов………………………………………………….26
Выводы…………………………………………………………………………….28
Список используемых источников………………………………………………29
Реферат (summary)………………………………………………………………..30
ИФА – иммуноферментный анализ
CD - Кластер дифференцировки
HLA-DR - Человеческие лейкоцитарные антигены, Система генов тканевой совместимости человека
АЛТ – аминотрансфераза
ЩФ (ALP) – щелочная фосфатаза
ГГТ - Гамма-глутаминтрансфераза
ПВ – протромбиновый индекс
АСТ — Аспартатаминотрансфераза
АЛТ — Аланинаминотрансфераза
ГГТП — Гамма-глютамилтранспептидаза
АсАТ — Аспартатаминотрансфераза
Кровь является внутренней средой организма, обеспечивающей нормальное функционирование всех органов и тканей живого организма, отражающей в большей или меньшей степени все нарушения их функций. Кровь называют "зеркалом", в котором отражаются самые различные процессы, происходящие во всех органах. Поэтому исследование крови является неотъемлемой частью медицинской диагностики, с помощью которой невозможно подтвердить диагноз и назначить лечение, а так же отследить его.
Исходя из вышесказанного, целью данной работы явилось изучение методов лабораторного анализа крови и получение базовых знаний по использованию лабораторного оборудования. На основании поставленной цели были определены следующие задачи:
1) Научиться работать с автоматическими дозаторами;
2) Приготовление рабочих растворов;
3) Научиться выделять клетки крови;
4) Научиться работать с флуоресцентным микроскопом;
5) Научиться работать с лабораторной посудой;
6) Научиться работать с промывочным аппаратом;
7) Научиться работать с термостатируемым шейк ером – инкубатором;
8) Научиться работать с ИФА – анализатором;
9) Освоение ИФА метода;
10) Познакомиться с методом непрямой иммунофлуоресценции;
11) Ознакомиться с методом хемилюминесцентного анализа нитрофильных гранулоцитов;
12) Провести анализ научной литературы.
Работа выполнена на базе ФГБУ «Научно-исследовательский институт медицинских проблем севера» Минздрава России.
1.1.Определение,классификация желтухи
Желтуха — это синдром, характеризующийся желтушным окрашиванием кожных покровов, слизистых оболочек и склер, обусловленный повышенным накоплением билирубина в сыворотке крови, а также других жидкостях и тканях организма.
Выявление желтухи не представляет трудностей, т.к. это хорошо заметный признак, обращающий на себя внимание не только медицинских работников, но и самого больного и окружающих его. Всегда значительно сложнее выяснить ее причину, т.к. желтуха наблюдается при многих как инфекционных, так и неинфекционных заболеваниях. Часто больные с механической желтухой ошибочно госпитализируются в инфекционный стационар с подозрением на инфекционный характер, что приводит к запоздалой диагностике и упущению времени для оптимального вмешательства.
В зависимости от первичной локализации патологического процесса, приводящего к развитию желтухи, и механизма возникновения выделяют следующие виды желтухи:
• Надпеченочная или гемолитическая желтуха — вызвана главным образом повышенной продукцией билирубина в связи с усилением распада эритроцитов и реже при нарушении плазменного транспорта билирубина. К ней относятся различные типы гемолитической желтухи — врожденные дефекты эритроцитов, аутоиммунные гемолитические желтухи, ассоциированные с В12- (фолиево-) дефицитной анемией, рассасывающиеся массивные гематомы, инфаркты, различного рода интоксикации, отравления. Повышенный гемолиз независимо от его этиологии всегда приводит к характерной клинической триаде: анемия, желтуха с лимонным оттенком, спленомегалия.
• Печеночная или паренхиматозная желтуха — обусловлена поражением гепатоцитов и/или холангиол. По ведущему механизму можно выделить несколько вариантов печеночных желтух. Она может быть связана с нарушением экскреции и захвата билирубина, регургитацией билирубина. Это наблюдается при остром и хроническом гепатитах, гепатозе, циррозе печени (печеночно-клеточная желтуха). В других случаях нарушаются экскреция билирубина и регургитация его. Подобный тип отмечается при холестатическом гепатите, первичном билиарном циррозе печени, идиопатическом доброкачественном возвратном холестазе, при печеночно-клеточных поражениях (холестатическая печеночная желтуха). В основе желтух может лежать нарушение конъюгации и захвата билирубина. Это отмечается при энзимопатической желтухе при синдромах Жильбера, Криглера-Найяра. Печеночная желтуха может быть связана с нарушением экскреции билирубина, например при синдромах Дабина-Джонсона и Ротора.
• Механическая или обтурационная желтуха — осложнение патологических процессов, нарушающих отток желчи на различных уровнях желчевыводящих протоков.
В одной из англоязычных статей, которая была опубликована в 2013 году учеными из Румынии, очень хорошо описан Диагностический подход и Патофизиология.
1.2.Патофизиология
Желтуха, не является болезнью, это признак одного из многих возможных изменений, лежащих в основе патологических процессов, которые происходят в какой-то момент пути нормального физиологического метаболизма билирубина.
Основной источник билирубина — гемоглобин. Когда красные кровяные клетки завершают свою жизнь это приблизительно 120 дней, или когда они повреждены, их мембраны становятся хрупкими и склонны к разрыву. Каждая красная кровяная клетка проходит через ретикуло-гистиоцитарную систему. Если мембрана клетки имеет хрупкое строение то она разрывается и все клеточное содержимое, включая гемоглобин, впоследствии освобождены наружу. За сутки распадается примерно 1% эритроцитов и из их гемоглобина образуется 10–300 мг билирубина.
При разрушении эритроцитов гемоглобин фагоцитируется макрофагами - разделяется на «гема» и «глобин» порции. В «глобине» часть, белка, разлагается на аминокислоты и не играет никакой роли в болезни желтухе. Железо подвергается окислению и снова используется организмом в виде белка ферритина. Молекула «гемма» под воздействием окислтиельных реакций превращается через стадию биливердина в билирубин. В крови билирубин связывается с носителем – альбумином (белок) т.к. он не растворим в воде при физиологическом pH крови.
Ход пигмента.
В обмене билирубина важные функции выполняет печень. Она захватывает из крови билирубин гепатоцитами (клетки паренхимы печени) и связывает его с глюкуроновой кислотой. Далее выделяет (конъюгированный) билирубин из гепатоцитов в желчные капилляры. Соединение билирубина с глюкуроновой кислотой делает его растворимым в воде, что делает возможным переход его в желчь, фильтрацию в почках и обеспечивает быструю (прямую) реакцию с диазореактивом (прямой, конъюгированный, связанный билирубин).
Далее билирубин выделяется из печени в желчь. Билирубин поступает в кишечник и под действием бактериальных дегидрогеназ превращается в мезобилиноген и уробилиногеновые тельца: уробилиноген и стеркобилиноген. Основное количество уробилиногена из кишечника выделяется с калом в виде стеркобилиногена (60–80 мг в сутки), на воздухе превращающегося в стеркобилин, что окрашивает кал в коричневый цвет. Часть уробилиногена всасывается через стенку кишечника и попадает в воротную вену, затем в печень, где расщепляется. Здоровая печень полностью расщепляет уробилин, поэтому в норме в моче он не определяется.
Часть стеркобилиногена через систему геморроидальных вен попадает в общий кровоток и выводится почками (около 4 мг в сутки), придавая моче нормальный соломенно-желтый цвет.
1.3. Диагностический подход
Большинство пациентов, поступающих с желтухой будут иметь различные предпосылки аномалии печени, хотя существенных различий не существует. Типичный анализ печени будет включать в себя уровни в крови ферментов, прежде всего, такие как аминотрансфераза (АЛТ, АСТ) и щелочной фосфатазы (ЩФ); билирубина (который вызывает желтуху); и протеина, в частности, общего белка и альбумина. Другие первичные лабораторные тесты для функции печени включают GGT и протромбиновый индекс (ПВ).
Нарушение некоторых костей и сердца могут повлечь за собой увеличение ALP(щелочная фосфатаза) и аминотрансфераз, поэтому в дифференциации проблем с печенью, нужно сравнивать уровни ГГТ.
При желочных проблемах нужно хирургическое вмешательство, а при проблемах печени достаточно медицинского лечения. ЩФ и ГГТ растут одинаково а вот АСТ и АЛТ повышение разноуровневое. Если ALP (10-45 ме/Л) и ГГТ (18-85) возрастают пропорционально примерно так же высоко, как и " АСТ " (12-38 ме/Л) и ALT (10-45 ме/Л), это означает что проблема холестатическая. То есть желтуха с внутрипеченочным холестазом развивается при лекарственных поражениях печени (аминазин, тестостерон, сульфаниламиды, хлорпропамид и др.), вирусном гепатите, хроническом гепатите, токсических поражениях печени, первичном билиарном циррозе печени, идиопатическом доброкачественном возвратном холестазе, холестатическом гепатозе беременных и др.
С другой стороны, если АСТ и АЛТ поднимается значительно выше, чем ЩФ и ГГТ это означает что проблема в печени. Печеночно-клеточная желтуха развивается при остром вирусном гепатите, обострении хронического гепатита, циррозе печени, алкогольном поражении печени, при воздействии ряда токсических веществ (хлорированные углеводороды, бензол и его производные, фосфор, свинец, ртуть, мышьяк, ядовитые грибы), а также некоторых лекарственных препаратов.
Наконец, различие между печеночно-клеточной желтухи, является сравнение уровней АСТ и АЛТ. АСТ уровни, как правило, будут выше, чем АЛТ. Это остается и в большинстве других заболеваний печени, кроме гепатита (вирусной или токсичных для печени). Алкогольные поражения печени могут быть вполне нормального уровня АЛТ, а АСТ 10 раз выше, чем АЛТ. С другой стороны, если уровень АЛТ выше, чем АСТ, это свидетельствует о том, что это гепатит. Уровни АЛТ и АСТ не хорошо коррелируют степени повреждения печени, хотя если эти уровни очень высокие то они могут указывать на серьезный некроз. Низкий уровень альбумина, как правило, свидетельствуют о хроническом заболевании.
В результатах лабораторного анализа печени часто сравнивают масштабы и различия показателей, а не чистого количества, а также путем их отношения. AST:ALT соотношение может быть хорошим индикатором для выявления алкогольных поражений печени (10), некоторые другие формы поражения печени (выше 1), или гепатит (меньше, чем 1). Уровни билирубина более чем в 10 раз может указывать на новообразования или внутрипеченочный холестаз. Уровень АСТ более чем в 15 раз, как правило, указывает на острый гепатоцеллюлярной (печеночный) ущерб. Если ALP уровень превышает более чем в 5 раз нормального, это как правило, указывает на механическое препятствие, в то время как уровень более чем в 10 раз превышает нормальны указывает на наличие наркотиков (токсичных) это индуцированный холестатический гепатит или Цитомегаловирус. Обе эти болезни могут также иметь уровни АЛТ и АСТ более чем в 20 раз от нормального значения. Уровни ГГТ более чем в 10 раз нормального значения, как правило, указывают на холестаз. А если в 5 раз больше нормального показателя, значит - вирусный гепатит. Если уровень ГГТ менее 5 раз нормальных показателей, это как правило, указывает на токсичность препаратов. Острый гепатит обычно имеет ALT и AST рост уровней в 20-30 чраз больше чем нормальные значения (более 1000), и может оставаться значительно повышенными в течение нескольких недель. Токсичность Ацетаминофен может привести к уровню АЛТ и АСТ более чем в 50 раз нормального.