Материал: Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных Методические указания к лабораторно-практическим занятиям для студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии, направление подготовки 36.05.01 – Ветеринария

ББК 48.73 р 30

Л 125

Составитель –

канд. вет. наук, доцент кафедры внутренних незаразных болезней, хирургии и акушерства ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА Е.А. Рыжакина

Рецензенты:

канд. вет. наук, зав. отделом по изучению болезней животных незаразной этиологии ФГБНУ «Вологодский филиал Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко» Л.К. Семина,

канд. вет. наук, доцент кафедры эпизоотологии и микробиологии ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА Ю.А. Воеводина

Л125 Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных методические указания / Сост. Е.А. Рыжакина. – Вологда – Молочное: Вологодская ГМХА, 2015. – 18 с.

Методические указания составлены в соответствии с требованиями ФГОС ВО и на основе Примерной рабочей программы, разработанной Учебнометодическим объединением по данным направлениям подготовки, а также на основании Положений академии о разработке учебно-методического комплекса дисциплины и о разработке рабочей программы учебной дисциплины (модуля).

В методических указаниях рассмотрены основные методы диагностики стафилококков.

Методические указания предназначены для проведения лабораторнопрактических занятий по дисциплине «Лабораторная диагностика инфекционных болезней» для студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии, направление подготовки 36.05.01Ветеринария.

Печатается по решению редакционно-издательского совета Вологодской государственной молочнохозяйственной академии имени Н.В. Верещагина.

УДК 619:579.861.2 (071) ББК 48.73 р30

©Рыжакина Е.А., 2015

©Вологодская ГМХА, 2015

В в е д е н и е

Первых представителей рода Staphylococcus описали Пастер и Огстон в 1880 г. Родовое название Staphylococcus дал Огстон (staphyle – гроздь, coccus – зернышко, ягода), а описание рода – Розенбах. Современная систематика:

Род Staphylococcus включает более 32 видов.

Основными возбудителями стафилококкозов сельскохозяйственных животных являются виды S. aureus (2 подвида), S. inter-medius, S. hyicus.

S.aureus вызывает у многих видов животных местные воспалительные гнойные процессы на коже, фурункулы, абсцессы и т.д.; маститы крупного рогатого скота, овец, свиней, лошадей, коз, кроликов; эндометриты овец, коз, свиней, собак. К S.aureus чувствительны цыплята раннего возраста, у взрослых кур обуславливает поражение органов дыхания, суставов.

Подвид S. aureus subsp. anaerobicus вызывает у овец казеозный лимфаденит, сходный с псевдотуберкулезным.

S. intermedius может поражать органы дыхания, суставы, возбудитель пиодермии собак.

S. hyicus вызывает экссудативный дерматит свиней, в основном поражаются поросята до 1,5-месячного возраста. У взрослых свиней может быть причиной метритов, поражений кожи. У коров является возбудителем мастита.

S. gallinarum и S. arlettae обитают на коже кур.

S. caprae выделяют из молока коз.

S. equorum выделяют с кожных покровов лошадей, от кошек. S. delphini – от дельфинов.

3

Цели занятия:

1.Изучить морфологические, культуральные свойства, факторы патогенности стафилококков.

2.Изучить принципы лабораторной диагностики стафилококковых заболеваний.

План исследований

1.Определение микроскопических свойств (морфология и физиолого-биохимическая характеристика стафилококков).

2.Микробиологические исследования и фаготипирование стафилококков.

3.Серологические исследования.

4.Биологический метод исследования.

5.Альтернативные (ускоренные) методы идентификации.

1 Определение микроскопических свойств (морфология и физиолого-биохимическая характеристика стафилококков)

Морфология

Стафилококки – грамположительные кокки, сферической формы, размером 0,5–1,5 мкм, располагаются единично, парами, в чистой культуре свойственно скопление в виде гроздьев винограда (характерно деление в разных плоскостях). Неподвижные, не образуют спор, могут образовывать микрокапсулу.

Клеточная стенка содержит пептидогликан и глицеринтейховую кислоту. Стафилококки формируют гладкие колонии, окрашенные каротиноидами в желтый или оранжевый цвета. При росте на желточно-солевом агаре образуются мутные круглые ровные колонии кремового, желтого или оранжевого цвета. Однако пигментирование не является видовым признаком.

При культивировании в жидких средах бактерии вызывают их равномерное помутнение, а затем образование рыхлого осадка, превращающегося в тягучую массу.

Физиолого-биохимическая характеристика стафилококков

Стафилококки – факультативные анаэробы, но быстро и обильно растут при наличии кислорода. Биохимически очень

4

активны. Продуцируют каталазу, на среде с глюкозой в анаэробных условиях большинство штаммов образуют ацетоин (положительная реакция Фогес–Проскауэра). Выделяют аммиак при росте на аргениновом бульоне, восстанавливают нитраты до нитритов или молекулярного азота, активно гидролизуют белки, в аэробных условиях расщепляют многие углеводы до уксусной кислоты и углекислого газа. Родовым признаком является ферментация глюкозы в анаэробных условиях, что отличает стафилококки от микрококков.

Бактерии растут на основных средах при 37°С (оптимум 35– 40°С), но могут расти и в более широком интервале температур (6,5–46°С). Оптимум роста отмечен при рН 7,0–7,5, но возможен рост в диапазоне рН 4,2–9,3. Хорошо выдерживают повышенное осмотическое давление, поэтому элективным субстратом для них служат среды с высокой концентрацией хлорида натрия – желточно-солевой или молочно-солевой агар.

Стафилококки хорошо переносят высушивание, сохраняя при этом вирулентность; погибают при прямом воздействии солнечного света в течение 10–12 часов.

Довольно устойчивы к нагреванию: при 70–80°С погибают за 20–30 мин, при 150°С – за 10 мин; сухой жар убивает их за 2 часа. Бактерии устойчивы к действию низких температур, повторное замораживание и оттаивание их не убивает.

Менее устойчивы стафилококки к действию дезинфектантов (перекиси водорода и др.), но резистентны к воздействию чистого этанола. При выращивании в аэробных условиях бактерии нуждаются в аминокислотах и витаминах, в анаэробных – требуют дополнительно урацил и дополнительные источники углерода.

На кровяном агаре могут образовывать несколько видов гемолизинов – веществ, поражающих эритроциты, лейкоциты и другие клетки. Продуцируют также фибринолизин, фосфатазу, бактериоцины; отдельные штаммы продуцируют коагулазу, ДНКазу, H2S и энтеротоксины (до 10 видов, характеризующихся летальным, гемолитическим или некротическим действием). Ферментируют некоторые углеводы с выделением кислоты без газа. Устойчивы к лизоциму, чувствительны к различным антибиотикам.

Факторы вирулентности:

5