Дубильные вещества обнаруживали, используя следующие реакции:
* соединяя с 1% раствором желатина в 10% растворе NaCl. Появляется муть, исчезающая при добавлении избытка желатина;
* соединяя с 5% раствором дихромата калия (К2С2О7). Образуется коричневый осадок или муть. Эта же реакция используется и как гистохимическая для обнаружения локализации дубильных веществ в ЛРС;
* соединяя с раствором основного ацетата свинца: образуется белый осадок;
* соединяя с ванилином (в присутствии 70% серной или концентрированной хлористо-водородной кислоты) дубильные вещества, содержащие мономеры катехинового типа, развивают красное окрашивание.
3.2 Определение дубильных веществ
Основным методом определения дубильных веществ является метод перманганат метрии (на все виды сырья).
Метод перманганат метрии
Экстракт получали следующим аналогичным образом. Затем отбирали 5 мл извлечения, помещали в коническую колбу вместимостью 250 мл. Прибавляли 100 мл воды и 5 мл индиго сульфокислоты.
Контрольный опыт: К 105 мл воды добавляем 5 мл индиго сульфокислоты и титровали раствором калия перманганата до золотисто-желтого цвета. Содержание дубильных веществ Х, рассчитывали по формуле:
V-объем раствора калия перманганата, израсходованного на титрование, мл;
V1-объем раствора калия перманганата, израсходованного на титрование в контрольном опыте;
k-количество дубильных веществ, соответствующее 1 мл раствора калия перманганата, г: для гидролизуемых дубильных веществ равно 0,004154, для конденсированных -0,00582;
m - масса сырья, г;
W - потеря в массе при высушивании сырья, %;
100 - общий объем извлечения, мл;
5 - объем извлечения, взятого для титрования, мл.
В качестве экстрагента использовали водно-спиртовую смесь.
В результате титрования определили, что содержание дубильных веществ в коре дуба составляет 15,6%.
Так как этот метод имеет ряд недостатков: способность KMnO4 окислять многие природные соединения, относящиеся к различным классам по химическому строению, различный перерасчетный коэффициент, растянутость перехода окраски раствора при титровании, Также этот метод не позволяет объективно оценить содержание дубильных веществ в коре, особенно при их содержании менее 10%.
3.3 Оптимизация условий экстракции дубильных веществ
Проводилось выделение дубильных веществ из различных источников полифенол содержащего растительного сырья (календула, тысячелистник, ромашка и дуб). Максимальный выход был отмечен при использовании коры дуба. Выход дубильных веществ их календулы составил 23,85%, из тысячелистника 10,85%, из ромашки 7,96%, из коры дуба 25,02% (при объединении вытяжек после двукратной экстракции).
Поэтому дальнейшие исследования по оптимизации выделения дубильных веществ проводились именно по коре дуба обыкновенного.
При подборе оптимальных условий экстракции дубильных веществ из коры дуба учитывались следующие факторы: тип экстрагента, температурный режим, время, кратность. Для осуществления данного исследования экстракт получали несколькими способами, изменяя некоторые параметры.
Установлении наилучшего типа экстрагента
При установлении наилучшего типа экстрагента использовали воду, водно-спиртовую смесь, этилацетат, бутанол и ацетон.
По полученным данным наиболее полное извлечение дубильных веществ из сырья происходит при использовании в качестве экстрагента водно-спиртовой смеси.
Определение температурного режима
При изучении оптимальной температуры экстракции использовали следующие режимы извлечения: 20-250С; 70-800С, 100-1100С.
Из данных, представленных в таблице видно, что оптимальное извлечение дубильных веществ достигается при 100-1100С.
Определение времени экстракции
При изучении оптимального времени экстракции проводили извлечение из сырья в течение 20, 40, 60,80 минут.
Для наиболее максимального извлечения дубильных веществ из экстракта целесообразно использовать экстракцию в течение 80-100 мин.
Выводы
фенольный дубильный экстракция
1. Были выделены дубильные вещества из различных источников полифенол содержащего растительного сырья (календула, тысячелистник, ромашка и дуб). Максимальный выход был отмечен при использовании коры дуба.
2. Определены количественные выходы полученных дубильных веществ;
3. Проведена оптимизация условий выделения дубильных веществ с учетом следующих факторов: тип экстрагента, температурный режим, время, кратность.
4. Установлено, что наиболее полное извлечение дубильных веществ из сырья происходит при использовании:
· в качестве экстрагента водно-спиртовой смеси,
· температурный режим 100-1100С,
· время экстракции 80-100 мин,
Литература
1. Бабич С.Р., Медведева Р.А. Факторы, влияющие на процесс извлечения дубильных веществ из растительного сырья. М., «Фармация», 1946, №4, с. 26-29.
2. Беликов В.Г. Фармацевтическая химия. В 2 ч. Ч. 1 - М. Высш. Шк., 1993-88-94 с.
3. Белоусова Н.И. Выделение и анализ природных биологически активных веществ. Томск, 1987.
4. Вахрушев В.И. Производство дубильных экстрактов М., 1990.
5. Георгиевский В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск, «Наука», 1990.
6. Гусева Л.Н., Кулишова М.И., Сивицкая О.К. Пособие по качественному анализу лекарств. - М, Медицина. 1980-208 с.
7. Ермаков А.И. Методы биохимического исследования растений. Ленинград, 1987.
8. Запрометов М.Н. Фенольные соединения, под. ред. Дж. Харборна, пер. с англ., М., Наука, 1993.с. 78-85
9. Иванова С.Д. Дубильные вещества, сапонины, флавоноиды в лекарственных растений. М., 1983.
10. Муравьева Д.А. Фармакогнозия. М., 2002.
11. Практикум по фармакогнозии. Под ред. Ковалева А.А. Попова Е.Н., Харьков, с. 125-191,2004.
12. Соколов С.Л., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям. М., «Медицина», с. 182-184, 1990.
13. Химический анализ лекарственных растений. Учеб. пособие \ Под ред. Гринкевич Н.И., Сафронич Л.Н., М.,» Высшая школа», 1983