Курсовая работа (т): Аналіз водорозчинних вітамінів

Для приготування реактиву під назвою діазораствор А в невеликої склянке змішують 10 мл розчину пара-аміно-ацетофенону і 2 мл розчину нітриту натрію і охолоджують не менше 2 хвилин в крижаній воді. Перед користуванням до суміші додають 3 мл 1 н. розчину їдкого натру і збовтують. Реактив під назвою діазораствор Б готують так само, як і розчин А, з тією лише різницею, що замість 1 н. розчину їдкого натру до розчину Б додають 2,5 н. розчину їдкого натру.

Випробуваний ампульний розчин змішують з такою кількістю перегнанной води, щоб кожен мілілітр суміші містив близько 100 мікрограмів тіаміну. В калібровану пробірку на 10 мл вливають 1 мл суміші, додають 2 мл 50% -ного етанолу і поміщають у водяну баню при температурі 60 °. Через 1 хвилину доливають 1 мл діазораствора А, сильно збовтують і знову залишають в лазні на 2--3 хвилини. Потім суміш охолоджують, додають 1 краплю 4 н. соляної кислоти і изопропанол до мітки, збовтують і порівнюють в колориметрі з контрольним розчином, виготовленим змішанням 1 мл води з 1 мл еталонного розчину тіаміну, 1 мл 50% етанолу та 1 мл діазорозчину А за методом, описаним вище.

. Для визначення вітамін В₁ по іншому методу розчиняють 0,4-1,5 мг його в 10 мл води, додають 0,5 мл реактиву з фосфорно-Вольфрамат і 0,4-0,6 мл 10% -ного розчину їдкого натру. З'являється синє забарвлення. Титрують 0,002 н. розчином червоної кров'яної солі, 1,82 мл якого відповідає 1 мг вітаміну В₁ до зникнення синього забарвлення.

Реактив готують так: 10 г вольфрамату натрію розчиняють в 75 мл води, додають 8 мл 85% -ной фосфорної кислоти і слабо нагрівають протягом 2 годин. Якщо розчин зеленіє, додають трохи бромної води після нагрівання протягом зазначеного часу і надлишок брому видаляють кип'ятінням. За охолодженні доводять до 100 мл.

2.2 Вітамін В₂

Якісні реакції.

. 0,001% -ний розчин (1 мг: 100) рибофлавіну - блідого зеленувато-жовтого кольору в світлі, що з інтенсивної жовтувато-зеленою флуоресценцією, зникаючої від додавання мінеральних кислот або лугів.

. При відновленні цинком в ОЦТОВОКИСЛОГО або солянокислом розчині рибофлавін переходить в лейкофлавін, приєднуючи 2 атоми водню.

Кількісне визначення.

. Безпосередньо колориметрування жовтих розчинів рибофлавіну.

. По азоту. До 0,3 г рибофлавіну (точне зважування), попередньо висушеного протягом 18 годин на вакуум-ексикаторі над сірчаною кислотою, в кьельдалевской колбі додають 1 г бензойної кислоти і визначають вміст азоту, руйнуючи суміш не менше 5 годин. Вміст азоту повинно бути не менше 14,5% і не більше 15,2%.

2.3 Вітамін В6

Якісні реакції.

. З фосфорно-вольфрамовою кислотою адермин утворює нерозчинне з'єднання (осад).

. З хлорним залізом адермин дає червоне забарвлення.

. Змішують 1 мл 0,01% -ного розчину з 1 мл 0,04% -ного розчину 2,6-діхлорхінонхлоріміда в абсолютному алкоголі і потім додають 1 краплю розчину аміаку - з'являється синє забарвлення.

Кількісне визначення.

. Калориметричне визначення основане на перетворенні четвертинної основи в фіолетовий колір з'єднання типу кар-бопірідінціаніна, яке калориметрирують, порівнюючи зі стандартом.

. Солянокислий сіль адермін можна визначати титруванням лужним розчином при індикаторі бромтимолового синього; для перевірки відтитровану рідину знову титрують 0,1 н. розчином нітрату срібла.

2.4 Фолієва кислота

Якісні реакції

. Одержання азобарвника.

Кількісне визначення

При відновленні фолієвої кислоти в солянокислом розчині цинкової пилом в числі інших продуктів отщепляется пара-аміно-бензойна кислота, яку диазотируют нітритом натрію. Отримана сіль діазонію поєднується з N- (1-нафтил) -етілендіамінді-гідрохлоридом у присутності сульфамат амонію NH2SO2 ONH4.

При цьому спостерігається фіолетове забарвлення розчину, інтенсивність якої пропорційна концентрації і вимірюється в фотоколориметрі або в спектрофотометрі.

Потрібні реактиви: 1) розчин желатин (1,5 г желатини і 0,1 г бензойної кислоти розчиняють в 100 мл води), 2) 10% -ний розчин соляної кислоти, 3) 0,1% -ний розчин нітриту натрію, 4 ) 8% -ний розчин сечовини і 5) 0,1% -ний розчин N- (1-нафтил) -этилендиаминдигидрохлорида.

Точно 0,05 г пара-амінобензойної кислоти з температурою плавлення 186-187 ° відважують в стаканчику ємністю 15-20 мл, розчиняють в 96% -ному етиловому спирті, переливають в мірну колбу ємністю 50 мл, стаканчик промивають 3-4 рази спиртом (загальна кількість спирту 25 мл), розчин доводять водою до мітки і перемішують. З цього розчину відбирають 1 мл в колбу ємністю 250 мл, додають 175 мл води, 45 мл 10% -ного розчину соляної кислоти, 2,5 мл розчину желатини, доводять до мітки водою і перемішують. В 1 мл розчину міститься 0,004 мг пара-амінобензойної кислоти.

В чотири колби ємністю 15-20 мл вливають піпеткою 1, 2, 3 і 4 мл приготованого розчину і доводять обсяг розчину в кожній колбі водою до 5 мл і додають по 0,7 мл 10% -ного розчину соляної кислоти, по 1 мл 0, 1% -ного розчину нітриту натрію, добре перемішують і залишають на 5 хвилин. Потім в кожну колбу додають по 1 мл 8% -ного розчину сечовини, перемішують і знову залишають на 5 хвилин. Після цього в кожну колбу додають по 1 мл 0,1% -ного розчину N- (1-нафтил) -этилендиаминдигидрохлорида, по 1,3 мл води, перемішують, залишають на 10 хвилин і потім визначають забарвлення розчину "електрофотоколоріметром з світлофільтром 550 нм. Для отримання стандартної кривої на осі ординат наносять показання гальванометра, а на осі абсцис - кількість міліграмів і з'єднують прямою лінією точки перетину перпендикулярів, відновлених з відповідних точок осей графіка.

Визначення загальної кількості (зв'язаною і вільною) р-амінобензоілглутаміновой кислоти в препаратах.

Точну наважку препарату (0,049-0,050 г) в стаканчику ємністю 15-20 мл змочують декількома краплями води і розчиняють в 0,1 н. розчині їдкого натру. Розчин переливають в мірну колбу ємністю 50 мл, стаканчик промивають кілька разів 0,1 н. розчином їдкого натру, зливаючи промивну рідину в ту ж колбу. Обсяг розчину доводять 0,1 н. розчином їдкого натру до мітки і добре перемішують. З отриманого розчину відбирають 1 мл в мірну колбу ємністю 100 мл, додають 75 мл води, 18 мл 10% -ного розчину соляної кислоти, 1 мл розчину желатини, доводять до мітки водою і перемішують (розчин А).

До 75 мл розчину в конічній колбі ємністю 150 мл додають 0,5 г цинкового пилу і залишають на 15 хвилин при частому перемішуванні. Розчин фільтрують через сухий фільтр в суху колбу, відкидаючи перші 15-20 мл фільтрату. До 2 мл фільтрату в колбі ємністю 15-20 мл додають 3 мл води, 0,7 мл 10%-ного розчину соляної кислоти і далі надходять, як зазначено при отриманні стандартної кривої.

Визначення вільної п-амінобензоілглутаміновой кислоти.

До 2 мл розчину А в колбі ємністю 15-20 мл додають 8 мл води і далі надходять, як описано при визначенні загальної кількості пара-амінобензоілглутаміновой кислоти. Вміст фолієвої кислоти в грамах (х) обчислюють за формулою

де а - загальна кількість вільної та зв'язаної пара-амінобензоілглутаміновой кислоти, знайденої по калібрувальній кривій, в міліграмах; b - кількість вільної пара-амінобензоілглутаміновой кислоти, знайденої по калібрувальної кривої, в міліграмах; 25 і 10 - постійні коефіцієнти; 3,22 - фактор перерахунку пара-амінобензоілглутаміновой кислоти на фолієву кислоту.

2.5 Вітамін В₁₂

Якісні реакції

Розчин вітаміну В₁₂ має характерний спектр поглинання в ультрафіолеті з максимумами при 278, 361 і 548 нм і коефіцієнтами поглинання в зазначених точках відповідно 115, 207 і 64, причому коефіцієнт поглинання при 361 нм для препаратів звичайної очищення перевищує в 2,8-3,4 раза коефіцієнт поглинання при 548 нм.

Кількісне визначення

І.Спектрофотометричний метод. В розчинах ампулірованних препаратів в кюветі спектрофотометра (в 1 см товщини) визначають коефіцієнт поглинання при 548 нм. Вміст вітаміну В₁₂ в 1 мл випробуваного розчину обчислюють за формулою. Кількість вітаміну В₁₂ в микрограммах де Е - спостережуваний коефіцієнт поглинання; 64 - коефіцієнт поглинання для 1% -ного розчину вітаміну В12, т. Е. При вмісті 1000 мікрограмів в 1 мл; 104 - коефіцієнт перерахунку концентрації вітаміну В₁₂ з 1% в мікрограми на 1 мл.

. Колориметричний метод. При відсутності спектрофотометра користуються Фотоелектроколориметр із зеленим світлофільтром. Вміст вітаміну В12 у випробуваному зразку визначають шляхом вимірювання коефіцієнта поглинання. По знайденому коефіцієнту, користуючись калібрувальної кривої, встановлюють яка кількість вітаміну В₁₂ йому відповідає. Для складання калібрувальної кривої для колориметра ФЕК беруть розчини чистого вітаміну В₁₂ з вмістом 10, 15, 20, 25 і 30 мкг в 1 мл і визначають коефіцієнти поглинання, користуючись кюветами в 1 см завтовшки.

Відкладаючи по осі абсцис вміст вітаміну В₁₂, а по осі ординат коефіцієнти поглинання, будують калібрувальну криву, по якій і відраховують, якій кількості вітаміну В₁₂ відповідає коефіцієнт поглинання випробуваного зразка.

2.6 Вітамін С

Якісні реакції

. Розчиняють 0,1 г аскорбінової кислоти в 2 мл води і доливають 0,5 мл розчину нітрату срібла. Випадає осад металевого срібла.

. Розчин аскорбінової кислоти (0,1 г в 2 мл) в воді залишається безбарвним від додавання 1 краплі розчину йоду або хлориду заліза.

Кількісне визначення

Йодометричний метод заснований на окисленні аскорбінової кислоти йодом з перетворенням її в окислених дегідроформа.

Розчиняють 0,3 г препарату (точна наважка) в 25 мл води і титрують до появи незникаючої жовтого забарвлення 0,1 н. розчином йоду, 1 мл якого відповідає 0,0088 г аскорбінової кислоти.

Замість йоду можна застосовувати йодат калію. Наважку препарату з вмістом 0,01 г аскорбінової кислоти розчиняють в 100 мл води. До 10 мл розчину додають 5 мл 5% -ного розчину йодиду калію, 5 мл 2% -ної соляної кислоти, 50 мл води і 10 мл 0,004 н. розчину йодату калію і залишають в темному місці протягом 30 хвилин.

Що не увійшов в реакцію вільний йод відтитровують 0,004 н. розчином тіосульфату натрію (індикатор розчин крохмалю). 1 мл 0,004 н. розчину йодату калію відповідає 0,000352 г аскорбінової кислоти. Розраховують за формулою (а-b) • 0,000 352, де а - кількість розчину йодату калію в мілілітрах, b - кількість розчину тіосульфату натрію в мілілітрах. Аскорбінову кислоту можна визначати по реакції відновлення 2,6-діхлорфенол-індофенолу, але цей метод малоприйнятний при контролі рецептури.

2.7 Вітамін РР

Якісні реакції

. Розчиняють 0,01-0,02 г препарату при нагріванні в 3 мл води. До теплого розчину доливають 3 краплі оцтової кислоти і 1 мл 5% -ного розчину ацетату міді. Випадає осад синього кольору.

. В розчині нікотинової кислоти від реактиву Зонненшейна (фосфорно-молібденова кислота) випадає жовтий осад, а від реактиву Драгендорфа червоний осад.

. Нікотинова кислота і її амід дають з 2,4-дінітрохлор-бензолом солі піридинію, які при дії лугів розщеплюються з утворенням похідних глутаконового альдегіду, забарвлених у жовто-червоний колір.

У 100 мл води розчиняють 10 мг нікотинової кислоти; 5 мл розчину випарюють насухо на водяній бані в стаканчику ємністю 30 мл, потім додають 1 мл 10% -ного спиртового розчину 2,4-ді-нитрохлорбензола і після 2-годинного стояння при кімнатній температурі випарюють знову насухо на водяній бані і тримають ще в протягом 10 хвилин при тій же температурі. Після охолодження до 25 ° до залишку доливають 10 мл охолодженого до 10 ° 0,1% -ного спиртового розчину їдкого натру. Розчин забарвлюється в інтенсивний жовто-червоний колір.

Кількісне визначення

. Сульфат міді осаджує в нейтральній середовищі осад (C6H4O2N) Cu2; надлишок міді визначається йодометрично.

Кілька порошків з вмістом 0,3-0,4 г (точне зважування) нікотинової кислоти розчиняють в 25 мл свежепрокипяченной гарячої води і по охолодженні нейтралізують (індикатор - фенолфталеїн) спочатку 0,5 н., А під кінець 0,1 н. розчином їдкого натру, переливають в мірну 100 мл колбу, додають 10 мл розчину мідного купоросу, доводять до мітки, перемішують, дають стояти 10-15 хвилин і фільтрують через сухий фільтр в суху колбу. До 50 мл фільтрату в конічній колбі з притертою пробкою додають 10 мл розведеної соляної кислоти, 2 г йодиду калію, закривають пробкою і дають стояти в темному місці 10 хвилин. Виділився йод титрують 0,1 н. розчином тіосульфату натрію (індикатор - крохмаль), 1 мл якого відповідає 0,02462 г нікотинової кислоти.

Проводиться контрольний досвід. Різниця між другим і першим титрування перераховують на нікотинову кислоту.

. У відсутності заважаючих речовин кислого або лужного характеру нікотинова кислота в спиртовому розчині може бути відтитровані 0,1 н. розчином їдкого натру (індикатор-фенолфталеїн).

Кількісне визначення нікотинової кислоти по циано-генбромідному методу грунтується освіті нікотиновою кислотою при взаємодії з бромцианом бромціанпроізводного, яку в присутності ароматичних амінів (аніліну і ін.) Розпадається з утворенням інтенсивно забарвленого продукту - похідного.

Розтирають у ступці 10-20 штук драже, зваживши для встановлення середньої ваги, відбирають наважку в кількості 1-3 г на техно-хімічних вагах і розчиняють при нагріванні в 10-15 мл перегнанной води. За охолодженні розчин переливають в мірний циліндр, розбавляють водою з таким розрахунком, щоб в 5 мл розведення утримувалося 0,5-1 мг нікотинової кислоти, добре перемішують вміст циліндра і фільтрують через складчастий фільтр.

До 5 мл фільтрату в стаканчику додають 1 краплю 2% -ного розчину лугу, 2 мл роданбромідного розчину, 11 мл спиртового розчину аніліну, добре перемішують і залишають на 1-2 години. Після цього суміш фільтрують від випав осаду і що з'явилася жовте забарвлення розчину порівнюють із стандартним розчином нікотинової кислоти в колориметрі Дюбоск, встановлюючи стандартний розчин завжди на 10 мм.

Для приготування стандартного розчину навішення кристалічного нікотин-аміду або нікотинової кислоти розчиняють в гарячій воді з таким розрахунком, щоб в 1 мл розчину містився точно 1 мг нікотинової кислоти. До 1 мл розчину в стаканчику додають 4 мл води і 1 краплю 2 н. розчину лугу. Надалі стандартний розчин обробляють так само, як описано вище, і одночасно з випробовуваним розчином.

Для приготування роданбромідного розчину в конічну колбу з 10 мл н. розчину хімічно чистого роданида калію додають 1 г броміду калію і після повного розчинення - 1 мл соляної кислоти (розведеною водою 1:!), а далі з бюретки додають по краплях 2,5 мл брому (питома вага 3,2) при постійному помішуванні вмісту колбочки.

ВИСНОВКИ

Вітамі́ни (лат. vitae - життя і амін - речовина, що містить аміногрупу (NH₂)) - низькомолекулярні органічні сполуки різної хімічної природи, що необхідні для життєдіяльності живого організму в малих дозах, і не утворюються в самому цьому організмі в достатній кількості, через що повинні надходити із їжею. Таким чином визначення певної речовини як вітаміну залежить від того, про який вид йдеться. Наприклад, більшість тварин мають метаболічний шлях синтезу аскорбінової кислоти, проте деякі, такі як люди, мавпи, морські свинки, втратили його, тому аскорбінова кислота є для них вітаміном^[

Однією з особливостей механізму дії водорозчинних вітамінів є те, що більшість із них виконують роль коферментів - небілкової частини складних ферментів. Саме у складі ферментів гідровітаміни забезпечують нормальне функціонування органів і систем організму, регулюють обмін речовин, функціональний стан центральної нервової системи, трофіку тканин, проникність і стійкість кровоносних судин.