16
Помимо указанных возбудителей, при европейском гнильце из больных и погибших личинок ряд исследователей выделили и другие микробы — бактерию эуридице (В. eurydice), стрептококк фекалис (Strept. faecalis). Однако при экспериментальном заражении этими микробами личинок и пчелиных семей вызвать европейский гнилец не удавалось.
Некоторые авторы считают, что под названием «европейский гнилец» объединяется два или три заболевания пчелиного расплода, различных по этиологии, но схожих по своим клиническим признакам.
Стрептококк плютон представляет собой клетку слегка удлиненной формы. Клеточная стенка образована гомогенным электронно-плотным материалом и имеет общую толщину 250—300 А. Цитоплазматическая мембрана обычно выявляется как одноконтурная (общая толщина 60А). Цитоплазма столь густо заполнена гранулярным компонентом, что отдельные рибосомы выявляются нечетко. В ней хорошо развиты сложно устроенные мембранные структуры. Деление клеток осуществляется путем образования мощных поперечных перегородок. Ядерный компонент располагается в цитоплазме и представлен осмиофобной зоной.
Бацилла альвей — палочка, клеточная стенка трехслойная и достигает толщины 170А. Слои клеточной стенки примерно одинаковые — по 50— 55А. Цитоплазматическая мембрана трехслойная, порядка 60А. Цитоплазма имеет гранулярное строение. Споры бациллы альвей пятиугольной формы имеют плотную гомогенную оболочку (270А), образующую неравномерные выступы. За оболочкой следует широкая зона кортекса (ЗЗОА), состоящая из 7 слоев (4 осмиофобных и 3 осми-офильных). В центре споры располагается спороплазма (75— 80А). Споры тоже многослойны, располагаются в центре клетки.
Стрептококк апис —клетки округлой формы. Клеточная стенка представлена однослойной структурой, цитоплазматическая мембрана одноконтурная. Цитоплазма состоит из мелкогранулярного вещества. В области нуклеоида имеется вакуоль. Деление стрептококка осуществляется путем центрипетального врастания клеточной стенки. По электронограммам можно точно дифференцировать стрептококка апис от стрептококка плютон.
Возбудители европейского гнильца длительное время сохраняют жизнеспособность во внешней среде. Продолжительность выживаемости и устойчивость его зависят от вида возбудителя, его формы (вегетативная, споровая), температуры и влажности воздуха и других влияний внешней среды. У разных штаммов одного вида выживаемость и устойчивость может быть неодинаковой.
Стрептококк плютон сохраняет жизнеспособность в сухом содержимом среднего отдела кишечника личинки и в их трупах-корочках при комнатной температуре до трех лет. В меде, хранящемся на солнечном свету, возбудитель болезни сохраняется 3—4 ч; в меде в темноте при
17
комнатной температуре — 3—7 мес; в 10 %-ном растворе забродившего сахара при 37 °С—3— 5 дней, при комнатной температуре — 11—21 день; в 20 %-ном растворе забродившего меда — более месяца; в пастообразной кашице из перги и воды при комнатной температуре — 10 мес (максимальный период наблюдения); на пасеке летом: на ульях — 50—55 дней; сотах — 40—45 дней; медогонках — 45— 48 дней; ульевых холстиках с прополисом — 21—24 дня; в меде — 8—15 дней; вощине — 55—65 дней; перге — 365 дней; воде — 79—84 дня; на спецодежде пчеловода — 95 дней.
При нагревании микробной взвеси в пробирке до 60 °С плютон погибает в течение 10—15 мин; в растворе фенола в разведении 1:60 — в течение 15 мин, 1:70 — 20 мин, 1:90 — 40 мин; в осветленных растворах хлорной извести с содержанием 1,1 % активного хлора погибает за 30 мин; в 3 %-ном растворе однохлористого йода — за 20 мин; в 0,5 %-ном растворе калия перманганата — в течение 30 мин, а в 5 %-ном — за минуту; в 0,5 %- ном растворе формальдегида —за 10 мин.
Стрептококк апис остается жизнеспособным при температуре 35—37 °С на деревянных поверхностях, сотах, вощине, в меде до 256 дней, перге и медоперговой смеси — 129 дней, в сахарном сиропе и водопроводной воде
—14 дней; на деревянных поверхностях, сотах, вощине, в меде в неотапливаемых складах — 265 дней. В пробирке при температуре 78 °С он погибает в течение 30—50 мин; в разведенном феноле 1:60 и 1:70 — 30 мин, а 1:90 — 50 мин; в осветленных растворах хлорной извести с содержанием 2 % активного хлора погибает за 30 мин, в 0,5 %-ном растворе калия перманганата — 50 мин, в 5 %-ном — 5 мин. По некоторым данным, в высушенном состоянии на стекле, вате, бумаге, дереве и бязевой ткани апис сохраняет жизнеспособность до 3 лет. Нагревание до 60—70 °С убивает его за несколько минут.
Споры бациллы альвей обладают высокой жизнеспособностью.
Вкорочках личинок он сохраняется более 20 лет; в неотапливаемых складах и сотохранилищах, а также при температуре 35—37 °С они выживают на деревянных и металлических поверхностях, ульевых холстиках, сотах, искусственной вощине; в меде до 450 дней, в перге и медоперговой смеси — до 171 дня. В Таджикистане летом под прямыми солнечными лучами споры бациллы альвей сохраняли жизнеспособность на ульях 45 дней, на цветках хлопчатника — 79, на поверхности почвы — до 63 дней. При действии текучего пара (100 °С) они погибают через 30 мин. Кипячение убивает их в течение 15—120 мин.
В2 %-ном растворе калия перманганата споры погибают за 7 ч, в 5 %- ном—за час; в 2 %-ном растворе хлорамина при температуре 40 °С — через 6—12 ч; в 0,5 %-ном растворе хинозола, по Генову и Савову (1961),— через 5—45 мин, а в 1 %-ном — через 5 мин; в 0,1 %-ном растворе трипафлавина
—через 45 мин, а в 0,4 %-ном — через 20 мин; в 5 %-ном растворе
18
хлоронола — через 45—60 мин, а в 15 %-ном — через 10—30 мин; в 5 %- ном растворе хлорной извести — через 45—60 мин, 10 %-ном — через 20— 30 мин.
Резистентность вегетативных форм бациллы альвей невелика. При температуре 100 °С или при действии 0,1 %-ного раствора хинозола они погибают через 5 мин.
В воске при 120 °С гибель спор наступает через 2 ч. Перекись водорода, однохлористый йод, едкий натр, каустифицированная содопоташная смесь (температура растворов 60 °С), щелочной раствор формальдегида, 0,1—0,3 %-ный бета-пропилактон убивают споры в течение от 5 мин до 3 ч. Споры бациллы альвей погибают при действии окиси этилена в камере при первоначальном вакууме 550 мм ртутного столба, концентрации газа 1,5 кг на 1 м 3, температуре 22 °С и относительной влажности воздуха 50—60 % через 6 ч; при действии бромистого метила в камере при первоначальном вакууме 660 мм ртутного столба, концентрации газа 3,5 кг на 1 м3, температуре 22—25 °С и относительной влажности, близкой к полному насыщению,— через 24 ч; при действии газа ОКЭБМ в камере без вакуума при температуре 25 °С, относительной влажности, близкой к полному насыщению, и концентрации газа 1 кг на 1 м3—через 24 ч, а 1,5 кг на 1 м3—через 15 ч.
Споры бациллы орфеус нейтрализуются при кипячении в воде через 15 мин; 2 %-ный раствор хлорамина при температуре 40 °С убивает их за 3,5 ч. Резистентность бациллы орфеус к физическим и химическим факторам, по данным Генова и Савова, такая же, как у бациллы альвей.
Патогенность. К европейскому гнильцу восприимчивы все породы пчел и осы. Возбудители европейского гнильца обладают не одинаковой патогенностью и вирулентностью, что в значительной степени зависит от их дозы. Чем выше доза проникающих в организм личинок бактерий, тем сильнее вспышки болезни. Внутри вида патогенность зависит от биологических особенностей разных штаммов. Однако эти свойства микробов, их экология изучены слабо. Искусственное заражение пчел удается не всегда. Возбудители европейского гнильца понижают или теряют свои болезнетворные свойства при культивировании их на искусственной среде. Заражение пчел нативным материалом (суспензия погибших от европейского гнильца личинок) удается легче, чем культурами, полученными на искусственных средах. Бейли (1961) сообщает, что стрептококк плютон быстро теряет свою вирулентность в искусственных условиях, поэтому штаммы, выращенные на искусственной среде, нуждаются при искусственном заражении пчел в предварительном повышении своей патогенности методом пассажа через организм личинок.
19
Большинство видов микробов возбудителей европейского гнильца могут действовать патогенно не только самостоятельно, но и как синергисты, дополняя и усиливая болезнетворные свойства друг друга.
Стрептококки плютон и апис патогенны для незапечатанных личинок пчел и ос; для теплокровных животных не патогенны. Бацилла альвей патогенна не только для личинок пчел, но и для мух, большой восковой моли, личинок совки, а также для теплокровных — мышей, кроликов и морских свинок. Мыши, зараженные подкожно, погибали через 24 ч, а морские свинки и кролики — через 6 дней. Бацилла орфеус при введении в
гемолимфу патогенна для шелковичных червей, гусениц большой восковой моли и походного шелкопряда.
Эпизоотологические данные. Источником болезни являются больные и погибшие личинки. Распространяют возбудителя болезни внутри улья пчелы-кормилицы, а от семьи к семье — блуждающие пчелы и пчелыворовки, трутни. Осы, входя в частый контакт с пчелами, легко заражаются возбудителями европейского гнильца и тоже распространяют его. Здоровые семьи заражаются при перестановке соторамок с расплодом, медом, пергой и пустых сотов из ульев, неблагополучных по европейскому гнильцу, а также при использовании самих ульев без дезинфекции. Приобретение пчелиных семей, пакетов пчел и маток в местности, неблагополучной по европейскому гнильцу, может привести к вспышке болезни на пасеке.
Патогенез. Европейским гнильцом заболевают личинки с трехдневного возраста. Возбудители попадают с кормом в кишечник, а из него в гемолимфу и вызывают септицемию.
Признаки болезни. Европейский гнилец поражает открытый расплод ранней весной и летом. Инкубационный период длится 36—72 ч. По характеру течения различают скрытую и явную форму болезни. При скрытой форме возбудители европейского гнильца могут быть в сотах, перге и меде, в организме взрослых личинок, рабочих пчел и маток, но гибели личинок и ослабления семей они, как правило, не вызывают.
Явная форма сопровождается гибелью личинок, что легко обнаружить при осмотре семей. В зависимости от количества больных личинок различают 3 степени поражения пчелиной семьи: слабую, среднюю и сильную. При слабой степени поражения в семье обнаруживают от 5 до 10 больных личинок, при средней — от 10 до 50, при сильной — более 50 больных личинок на каждом соте.
При антисанитарном состоянии пасеки болезнь может длиться годами и привести к гибели всех семей. В большинстве случаев болезнь возникает в слабых и необеспеченных кормами семьях, где личинки голодают. Особенно подвержены заболеванию европейским гнильцом семьи, ослабевшие в результате отравления ядохимикатами. В неутепленном гнезде тоже создаются благоприятные условия для проявления болезни. Наибольшего
20
развития болезнь достигает в начале главного медосбора, но на высоте его она идет на убыль, а иногда прекращается. Создается ошибочное представление о самовыздоровлении больных семей. В данный период матка сокращает яйцекладку, количество расплода уменьшается, и пчелы быстрее очищают ячейки от погибших личинок. После главного взятка болезнь снова усиливается и держится до тех пор, пока в улье имеется расплод.
Зимовка семей, пораженных европейским гнильцом, протекает хуже, чем здоровых. Начиная с 14—15 дня после выставки пчел из зимовника, темп развития больных семей снижается, хотя клинических признаков болезни в этот период еще не наблюдается.
Признаки европейского гнильца варьируют в зависимости от вида возбудителя, его патогенности, времени заражения личинок. При гибели личинок старшего возраста европейский гнилец можно смешать с заболеванием мешотчатым расплодом, а при гибели запечатанных личинок—с американским гнильцом. Нередко болезнь протекает в смешанной форме с американским гнильцом или мешотчатым расплодом.
Заболевание взрослых пчел протекает в скрытой форме или выражается общей вялостью, пониженной работоспособностью, безразличием к защите своего гнезда, преждевременным изнашиванием пчел.
Первые признаки болезни проявляются повышенной подвижностью и изменениями естественного положения личинок в ячейках сотов. Больные личинки теряют блеск, упругость, становятся тусклыми, а потом желтыми. Кожица их становится прозрачной, сквозь нее хорошо видна вытянутая вдоль тела средняя кишка, наполненная серовато-белым или желтоватобелым содержимым; также хорошо видны трахеи. Через несколько дней после гибели личинок кожица и другие ткани приобретают мягкую консистенцию. В этой стадии гниения кожица легко рвется, и личинку не удается удалить целиком из ячейки. Трупы личинок становятся тестообразными, резко тягучей консистенции. После гибели личинки оседают и, постепенно высыхая, превращаются в темно-коричневую корочку, лежащую на нижней стенке или в нижнезаднем углу ячейки. Корочки легко целиком отделяются препаровальной иглой или пинцетом от стенок ячеек. Погибшие личинки вначале не пахнут, позднее из ульев исходит кислый запах, напоминающий запах гниющих яблок. Некоторые трупы личинок издают гнилостный запах, напоминающий запах гниющего мяса.
При доброкачественном течении европейского гнильца пчелы успевают очищать открытые ячейки от трупов личинок, при запущенном — в запечатанном расплоде имеются погибшие личинки. При этом личинки приобретают тягучесть или высыхают, крепко прикрепляясь к ячейкам. В данном случае признаки болезни напоминают течение американского