Для установления видовой принадлежности возбудителя проводится посев материала на питательную среду Сабуро с последующей идентификацией выделенной культуры. Известен способ выделения дерматомицетов на плотной среде Сабуро с селективными добавками в виде пенициллина (20000 ЕД) или стрептомицина (40000 ЕД), гентамицина (0,005 г/л), левомицетина (0,16 г/л). Недостатком данной культуральной среды является медленный рост выделяемых культур, что обуславливает длительные сроки диагностики. С целью сокращения сроков роста культур рядом авторов предложены различные модификации состава среды Сабуро. Описан способ культивирования дерматофитов в жидкой среде, содержащей кератин [28].
З.Р. Хисматуллиной и соавт. был разработан способ идентификации дерматомицетов с использованием культуральной среды Сабуро с гидролизатом кератина, позволяющий сократить сроки выделения грибов из материала больного животного. Увеличение скорости роста культур микромицетов происходит при содержании в питательной среде гидролизата кератина выше 20 г/л. Высев дерматофитов предлагаемым способом позволяет проводить идентификацию для Tr. mentagrophytes var. gypseum на 4-5-й день, для Tr. verrucosum - на 7-8-й день [33].
Одной из попыток усовершенствовать и обеспечить массовую культуральную диагностику дерматомицетов является разработка тестовой среды для дерматофитов (DTM, delmatophyte test medium), содержащей агар Сабуро с антибиотиками, циклогексимидом и индикатором роста культуры дерматофитов. Внедрение среды DTM произвело на свет концепцию «офисного культивирования», при котором появилась возможность наблюдать рост в одноразовых чашках не в специальной лаборатории, а непосредственно в кабинете врача-ветеринара, поскольку рост культуры идет при комнатной температуре [34].
Даже при соблюдении всех правил сбора материала, при наличии оборудования и высоком профессионализме сотрудников лаборатории число выявляемых положительных результатов культурального исследования весьма невелико. Культуральный метод - это специфический диагностический тест, который требует до 8 недель времени, прежде чем результат будет получен. Однако при этом, по данным зарубежной литературы, доля положительного культурального исследования едва достигает 50%, в отечественных исследованиях возбудитель не удается выделить и в 64% случаев. Это обусловлено техническими погрешностями (нарушение правил забора материала, его транспортировки и т.д.), но чаще всего - проведением предшествующей (как правило, местной) антифунгальной терапии у собак их владельцами. Владельцы собак часто занимаются их самолечением с применением наружных антимикотических средств, что приводит не только к изменению клинической картины, но и, естественно, к появлению ложноотрицательных результатов исследования при дерматофитиях [30].
Некоторыми авторами неоднократно предлагались разные диагностические подходы, которые позволили бы усовершенствовать идентификацию грибковой инфекции, дополнить или заменить классические методы. Поэтому, помимо рутинных микроскопического и культурального методов, активно изучаются новые возможности, такие как определение антигена Tr. verrucosum var. verrucosum методом иммуноферментного анализа, а также прямая ДНК-диагностика дерматомицетов. Молекулярно-биологические методики, такие как РСИ-RFLP, ПЦР реального времени и мультиплексный ПЦР, были адаптированы для определения дерматомицетов в клинических образцах. Эти молекулярные методы имеют хороший потенциал для прямого определения дерматомицетов, вместе с тем они еще нуждаются в стандартизации для обычных клинических лабораторий [1].
В 2004 году в России были разработаны и успешно применены в клинических условиях первые генетические зонды для прямой диагностики дерматофитии кожи, волос и ногтей. Данный проект был инициирован в 2003 году Национальной академией микологии с целью изучения возможности применения полимеразной цепной реакции (ПЦР) в выявлении Trichophyton rubrum в клинических образцах. Затем был создан аналогичный метод для Trichophyton mentagrophytes [15].
Лишь несколько авторов сравнивали в клинических образцах КОН-микроскопию и культивирование с ПЦР-методом. В исследовании Nagao и соавт. определили Trichophyton rubrum посредством «вложенной» ПЦР, имеющей мишенью ген внутреннего транскрибируемого спейсера 1 (ВТС1), который был негативен как по данным КОН-микроскопии, так и по данным культивирования. Yan и соавт. сравнили случайно праймируемую ПЦР с общепринятыми методами показали, что случайно праймируемая ПЦР - это более быстрый, чувствительный и специфичный метод для диагностики дерматофитий. Подобных исследований в отношении возбудителей трихофитии у собак не проводилось [28].
В соответствии с общими тенденциями, наблюдаемыми в сфере диагностики, ПЦР реального времени может в будущем стать заменой методам прямой микроскопии и культивирования. Высокая цена ПЦР на сегодняшний день и редкость применения этого метода в ветеринарных клиниках является лимитирующим фактором, но это может измениться в результате уменьшения цен на рынке реагентов и появлением сбережений, вызванных заменой общепринятой диагностики [6].
Таким образом, традиционные доступные методы лабораторной диагностики трихофитии у собак не всегда позволяют определить вид возбудителя и соответственно выбрать оптимальный метод лечения. Назревшая необходимость в методах быстрой и точной идентификации возбудителей открывает перспективы для внедрения в диагностику данного заболевания такого современного, высокочувствительного и специфичного метода исследования, как метод полимеразной цепной реакции [13].
После подтверждения диагноза трихофитии у собак с лечебной целью вводят 2- или 3-кратно вакцину против трихофитии. Одновременно назначают средства, обладающие фунгистатическими и фунгицидными свойствами. В начальном периоде болезни пораженные места обрабатывают раствором салициловой кислоты на 5%-й настойке йода, а также жидкостями и пастами, обладающими фунгицидными свойствами. Достаточно широко представлен ряд готовых фунгицидных форм: фунгин, нитрофунгин; мази: ундециновая, цинкундан, микосептин, «Ям», клотримазол, вединол, экалин, травоген; раствор «Никлофен», эпацид F, Апит. Смазывать или втирать в пораженные участки кожи 2-3 раза в день. Лечебный эффект усиливается при одновременном введении гризеофульвина или низорала. После выздоровления для ускорения роста волос в пораженные участки кожи втирают Carbolici cristall, Ricini и др. Ежедневно втирают в кожу больного животного для стимуляции роста волос [24].
Профилактика трихофитии у животных создает предпосылки для ликвидации трихофитии у человека <#"819476.files/image004.gif">
Рис. 4. График температуры, пульса и
частоты дыхания щенка с трихофитией в дни протекания болезни.
Эпикриз
Трихофития - распространенное среди дерматомикозов собак заболевание, основными возбудителями которой являются Trichophyton verrucosum и Trichophyton mentagrophytes var. gypseum. Трихофития у собак встречается чаще чем другие дермофитии. Болеют обычно щенки, плохо питающиеся собаки, а также животные с пониженным за счет другого заболевания иммунитетом. Источником возбудителя являются больные и переболевшие животные. Это кожное заболевание передается собакам от других животных через поврежденные участки кожи, путем контакта со спорами, находящимися в земле, на игрушках и мебели.
Больная собака, французский бульдог, сука, 15.04.2012 г.р. находится на лечении с 08.07. по 18.07. 2012 года с диагнозом: нагноительная трихофития подбородка (1 очаг). При поступлении владелица собаки предъявила жалобы на появление у щенка слегка заметной сыпи на подбородке, затем произошло увеличение площади поражения, на коже образовалась красноватая корка, а также началось выпадение волос в месте поражения. 6 июля у щенка на пораженном месте образовалась лысина с четкими границами. Из-под корки начал течь гной.
Проведено обследование: физикальное, анализ на грибы, ОАК, ОАМ, БХ крови.
Проведено лечение: введена вакцина против трихофитии. Пораженные места в течение 10 дней обрабатывались раствором салициловой кислоты на 5%-й настойке йода, а также фунгином и жидкостью Кастеллани 2 раза в день. Одновременно вводился гризеофульвин внутрь по 1 таб. 2 раза в день. После выздоровления для ускорения роста волос в пораженные участки кожи рекомендовано втирание Carbolici cristall или Ricini ежедневно.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Трихофития - (Trichophytosis), трихофитоз, стригущий лишай, инфекционная болезнь животных и человека, вызываемая несовершенными грибами рода Trichophyton, характеризующаяся у животных появлением на коже участков с обломанными волосами, покрытых корками и чешуйками. Распространена в большинстве стран мира, в том числе и в России. Т. verrucosum вызывает главным образом трихофитию крупного рогатого скота, зебу, буйволов, верблюдов, реже серебристо-чёрных лисиц, песцов. T. mentagrophytes (gypseum) - основной возбудитель трихофитии собак, кроликов, серебристо-чёрных лисиц, песцов, мышей-полёвок, сусликов, а также зверей, содержащихся в зоопарках, питомниках и др. [17].
Трихофитией болеют животные всех видов и возрастов. Источники инфекции - больные и переболевшие животные. Факторы передачи - инфицированные помещения, инвентарь. Мышевидные грызуны - постоянный резервуар T. mentagrophytes в природе.
Инфицированные возбудителями трихофитии сено, солома, пух, волос, шерсть служат источником заражения кроликов, пушных зверей, крупного рогатого скота, овец, лошадей. Микротравмы способствуют внедрению возбудителя. В зверохозяйствах, кролиководческих комплексах, откормочных совхозах, питомниках, где концентрируется большое поголовье животных, трихофития может протекать как энзоотия [21].
Переболевшие трихофитией
животные приобретают длительный напряжённый иммунитет. Показатели
серологических реакций (РА, РСК) сохраняются лишь 2-3 месяца, через 6-8 месяцев
они могут полностью угаснуть. При поверхностной трихофитии заражение людей
(особенно часто детей) происходит при контакте с больным животным и через
инфицированные предметы. На коже появляются округлые розовые пятна с чёткими
приподнятыми краями и шелушением в центре. В очагах на волосистой части головы
волосы разрежены и обломаны. Поражённые ногти - грязно-серые, тусклые,
неровные, края их утолщены, крошатся. Глубокая трихофития возникает при
заражении грибами, паразитирующими у животных (особенно опасны больные
трихофитией пушные звери, собаки, кролики и кошки). Отмечают воспалительные
нагноившиеся узлы с корками на поверхности, облысение [35].
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Авилов В.М. Ветеринария. - СПб.: Питер, 2006. - 338 с.
2. Азаров В.Н. Основы микробиологии и санитарии. - М.: Экономика, 1996. - 205 с.
3. Антонов В.Б., Медведева Т.В., Леина Л.М. и др. К вопросу об инфильтративно-нагноительной трихофитии // Успехи медицинской микологии. Т. 8. - М.: Национальная академия микологии, 2006. - С. 185 -187.
4. Астраханцев В.И. Болезни собак. - М.: Колос, 2001. - 258 с.
5. Белов Е.П. Болезни собак. - М.: Агропромиздат, 1990. - 368 с.
. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология.- М.: Медицинское информагенство, 2005.- 735 с.
. Воробьев А.А. Медицинская и санитарная микробиология.- М.: Академия, 2003.- 462 с.
. Ветеринарная лабораторная медицина. Интерпретация и диагностика: [собаки, кошки, лошади, жвачные животные, свиньи]. Мейер Д., Харви Дж. - М.: Софион, 2007.- 458 с.
. Глотова Т.И. Дерматомикозы собак и кошек в условиях города // Ветеринария, 1998, №1. С. 59-61.
. Гинзбург А.Г. Организация и планирование ветеринарного дела. - М.: Аспект-Пресс, 2005. - 492 с.
. Гусев М.В. Микробиология. - М.: Академия, 2009. - 464 с.
12. Евсеенко К.А. Новые горизонты медицинской микологии// Мед. новости. - 2003. - Т. 12. - С. 4-9.
13. Кашкин П.H, Лисин В.В. Практическое руководство по медицинской микологии. - Л.: Медицина, 1990. -195 с.
14. Kyxap E.В. Поиск антигенов для ИФА-диагностики зооантропонозной трихофитии // Проблемы мед. микол. - 2007. - Т. 2. - С. 73-74.
. Лещенко П.Н. Лабораторная диагностика грибковых заболеваний. - М.: Медицина, 1987. - 146 с.
16. Литвинов A.M. Дерматофитозы кошек и собак (профилактика и лечение)//Ветеринария. №11, 2000. С.51-53.
17. Луферов А.Ф. Методические рекомендации по оздоровлению домашних очагов зооантропонозной микроспории и трихофитии. - Минск: Высшая школа. 1998. - 15 с.
. Лысак В.В. Микробиология. - Минск: БГУ, 2007. - 426 с.
19. Медведева Г.В., Антонов В.Б., Леина Л. М. и др. Трихофития: современные представления об этиологии, клинической картине, особенностях диагностики и терапии // Клин. дерматол. и венерол. - 2007. - Т. 4. - С. 70-74.
20. Медведев К.С. Болезни кожи собак и кошек / К.С. Медведев. Киев: ВИМА, 1999.-218 с.
21. Медицинская микробиология. / Под ред. А.М. Королюка, С.Б. Стойчакова. - СПб.: ЭЛБИ, 2002.- 267 с.
. Микробиология и иммунология. / Под ред. А.А. Воробьева.- М.: Медицина, 2005.- 492 с.
. Минеева Л.А. Микробиология. - М.: Академия, 2010. - 464 с.
24. Нуралиев М.Д. Эпидемиология, особенности клиники и совершенствование терапии трихофитии в условиях жаркого климата. - Душанбе, 2007.- 200 с.
25. Организация и экономика ветеринарного дела / Под ред. А.Д. Третьякова. - М.: Проспект, 2001. - 260 с.
26. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии. / Под ред. Ю.С. Кривошеина.- М.: Высшая школа, 2001.- 224 с.
. Петрович С.В. Микозы животных. М.: Росагропромиздат. - 1989. - 173 с.
. Райкис Б. Общая микробиология с вирусологией и иммунологией. - М.: Триада - Х, 2002.- 347 с.
. Саркисов А.Х. Диагностика грибных болезней животных/А.Х. Саркисов, В.П. Королева, Е.С. Квашнина, В.Ф. Грезин // М.: Колос. - 1971. - 144 с.
. Справочник ветеринарного врача / Под ред. Н.М. Алтухова. - М.: Колос, 1996. - 352 с.
31. Степанова Ж.В., Гребенюк В.Н., Воробьева И.А. и др. Диагностические ошибки при зооантропонозной трихофитии // Вестн. дерматол. - 2001. - Т. 6. - С. 36-38.
32. Федюк В.И. Справочник болезней собак и кошек.- М: Академия. - 2001. - 338 с.
33. Хисматуллина 3.Р. Мухамадеева О.Р. Способ выделения дерматофитов // Вестн. дерматол. - 2006. - Т. 2. - С. 25-27.
34. Хисматуллина З.Р., Фахретдинова X.С, Мухамадеева О.Р. Зооантропонозная трихофития. - Уфа: Башкириздат, 2004. - 125 с.
35. Arabatzis М, Bruijnesteijn van Coppenraet L.E. S., Kuijper E.J. et al. Diagnosis of common dermatophyte infections by a novel multiplex real-time polymerase chain reaction detection/identification scheme // Br. J. Dermatol. - 2007. - Vol. 157.-P. 681-689.
. Jennings M.B., Rinaldi M.G. Confirmation of dermatophytes in nail specimens using in-office dermatophyte test medium cultures. Insights from a multispecialty survey // J.Am. Podiatr. Med. Assoc. - 2003. - Vol. 93, №3. - P. 195-202.
. Rippon J.W. Medical mycology // The Pathogenic Fungi and the Pathogenic Actinomycetes 3rd ed. - Philadelphia: WB Saunders, 1988.
. Weinberg J.M., Koestenblatt E.K., Tutrone W.D. etal Comparison of diagnostic methods in the evaluation of onychomycosis // J. Am. Acad. Dermatol. - 2003. - Vol. 49, №2. - P. 193-197.
. Yang G., Zhang M., Li W. et al Direct species identification of common pathogenic dermatophyte fungi in clinical specimens by semi-nested PCR and restriction fragment length polymorphism //Mycopathologia. - 2008. - Vol. 166, №4. - P. 203-208.
40. Yan D. Detection of fungiinliquor workers with tinea corporis and tinea cruris using arbitrarily primed polymerase chain reaction // Zhonghua Lao Dong Wei Sheng Zhi Ye Bing Za Zhi. - 2007. - Vol. 25, №3. - P. 133-135.