Материал: Морфология и физиология бактерий (4)

Внимание! Если размещение файла нарушает Ваши авторские права, то обязательно сообщите нам

51. Значение серологического и аллергического методов в диагностике инф. Заб-й.

Инфекционная аллергия наблюдается при туберкулёзе, бруцеллёзе, туляремии, сапе, сифилисе, герпесе, гриппе. Степень выраженности аллергии различна. Кожно-аллергические реакции используют для диагностики (внутрикожно или скарификатором). На месте введения при наличии аллергии образуется инфильтрат и гиперемия, а иногда и ↑ t° тела. Используют для диагностикитуберкулёза (реакции Пирке и Манту).

52. Источники инфекции. Класс-я, пути и способы заражения человека. Смотри 49.

Входные ворота инфекции – те органы и ткани, через кот-е микроб попадает в орг-м. Например, гонококк вызывает заб-е, если попадает на слизистую половых органов или конъюнктивы; возбудитель дизентерии – на слизистую толстой кишки, вирус гриппа и кори – в верхние дыхат. пути. Если они попадают в орг-м через другие входные ворота, они погибают. Другие пути: через кожу и верхние дыхательные пути – возбудитель туляремии и стафилококк, при укусе членистоногими переносчиками.

53. Классы иммуноглобулинов. Основные отличия, участие в иммунных реакциях in vivo и in vitro.

Содержатся в глобулиновой фракции крови. Известно 5 классов: IgA, IgM, IgG, IgE, IgD. Молекулы 3-х последних классов – мономеры, молекула IgM – пентамер (как снежинка), молекула IgA в крови – мономер, в секрете – димер и тетрамер.

IgG – 80%, характерна авидность (высокая скорость связывания с Аг). Проникает через плаценту к плоду – единственный класс АТ.

IgM – первыми синтезируются у плода, имеют самую большую массу. Так как являются пентамерами.

IgA – проникают в различные секреты (молозиво, слюна, кишечный, бронхиальный). Имеют значение при местном иммунитете.

IgE – реагины, отвечают за гиперчувствительность немедленного типа, так как под действием комплекса Аг-IgE из тучных клеток освобождается гистамин.

IgD – мало изучены.

В орг-ме – in vivo, в пробирке – in vitro.

54. Лимфокины, ф-и.

Это – биологически активные в-ва, кот-е вырабатываются Т-лимфоцитами. Лимфокины осуществляют взаимодействие между Т- и В-клетками, а также активируют макрофаги и другие клетки, участвующие в эффекторных (разрушение) иммунологических реакциях.

Вирусология

1. Что такое вирусы? Живые или неживые?

Вирусы – наименьшие по размерам неклеточные объекты, имеющие геном, окружённый белковой оболочкой. Расположены на границе жизни. Отличительные признаки: обязательный паразитизм на генетическом аппарате живых клеток и наличие в геноме – нуклеиновой к-ты только 1 типа. Вирусы способны вносить новую информацию в генетический аппарат клетки-хозяина.

Вирусы – это своеобразная форма жизни, кот-й присущи все её атрибуты:

  1. способность к самовоспроизведению;

  2. наследственность – способность передавать потомкам основные св-ва;

  3. генетическая изменчивость;

  4. адаптация к определённому хозяину;

  5. способность вызывать инфекцию, размножаться в клетке хозяина;

  6. вирусный геном функционирует по общим законам генетического кода.

Вирусы относятся к живым, но их нельзя назвать орг-мами. Отличия от живых систем:

  1. малые размеры;

  2. очень простое строение вириона – геном (ДНК или РНК) и капсид (белковая оболочка);

  3. нет клеточного строения – нет цитоплазмы, мембран, рибосом;

  4. у вириона есть только 1 вид нуклеиновой к-ты – ДНК или РНК;

  5. нет способности к росту и бинарному делению;

  6. особая ступень паразитизма – вирусы паразитируют на молекулярном (генетическом) уровне – это отличие от гельминтов (паразитируют в орг-ме) и малярийных плазмодиев и гонококков (паразитируют в клетке);

  7. способны объединять собственный геном с геномом клетки-хозяина;

  8. не могут существовать без клетки-хозяина;

  9. могут иметь фрагментированный геном.

Вироиды – состоят только из небольших молекул РНК (~ 300-400 нуклеотидов).

6. Методы культивирования вирусов. Методы их типирования.

Вирусы размножаются только в живых клетках. Культивирование вируса происходит на уровне орг-ма подопытного животного и на уровне культуры клеток (то есть вне орг-ма). Вирусы имеют тканевую и типовую специфичность. Поэтому при выделении неизвестного вируса одномоментно заражают 3-4 культуры клеток. Чаще используют эмбриональные ткани (куриный эмбрион). Вирусы оспы хорошо размножаются в хорион-аллантоисной оболочке, вирус паротита – в амнионе, вирус гриппа – в амнионе и аллантоисе, вирус бешенства – в желточном мешке. Берут 12-дневные эмбрионы.

При невозможности выделить и идентифицировать вирус стандартными методами (на культуре клеток и куриных эмбрионах) инфекционный материал вводят лабораторным животным (мыши, кролики, обезьяны), после развития инфекционного процесса проводят повторное заражение чувствительных клеточных культур.

Методы типирования вирусов:

  1. микроскопические – вирусоскопия, обнаружение внутриклеточных включений;

  2. иммуновирусологические – метод иммунной электронной микроскопии, метод иммунофлюоресценции, метод гемагглютинации, метод гемадсорбции.

Идентификация вирусов – иммуновирусологические методы, включают следующие реакции – торможение гемагглютинации, задержки гемадсорбции, связывания комплемента, нейтрализации, преципитации в геле агара.

7. Аденовирусы, аденовирусная инфекция.

Аденовирусы впервые выделены в 1953 г из тканей миндалин и аденоидов у детей, в связи с чем и получили название. Содержат 2 нити ДНК, не имеют суперкапсида. Имеют 80 антигенных типов. Вирионы диаметром ~ 70-90 нм. Капсиды состоят из 252 капсомеров. Не чувствительны к д-ю эфира. Нуклеокапсид организован по типу кубической симметрии.

Клиника: инкубационный период 6-9 суток. Лихорадка, симптомы поражения дыхательных путей (ринит, тонзиллит, фарингит, пневмония), глаз (конъюнктивит), жкт (диарея).

8. Вирусы – возбудители орз?

Самые распространённые инфекционные болезни человека. Широкому распространению способствуют: воздушно-капельный путь заражения, большое разнообразие возбудителей, отсутствие стойкого иммунитета. Различают:

  1. Вирусы гриппа (ортомиксовирусы) – А, В, С. Наиболее опасен вирус гриппа А. Клиника: t°, насморк, кашель, головные и мышечные боли.

  2. Вирусы парагриппа (парамиксовирусы) – выделены 5 типов, поражает верхние отделы дыхательных путей.

  3. Вирусы эпидемического паротита (парамиксовирус) – поражает околоушные слюнные железы.

  4. Вирус кори (парамиксовирус) – интоксикация, сыпь, поражение дыхательных путей.

  5. Респираторно-синцитиальный вирус (парамиксовирус) – поражает дыхательные пути у новорождённых.

  6. Респираторные коронавирусы – поражают дыхательные пути и жкт.

  7. Аденовирусы – клиника, как у гриппа.

  8. Вирус краснухи (тогавирусы) – лихорадка, сыпь, увеличение лимфоузлов, поражение плода у беременных (уродства).

  9. Риновирусы – клиника гриппа.

9. По каким признакам судят о размножении вирусов в культуре клеток?

Индикатором наличия вирусов в заражённой культуре клеток служат:

  1. Развитие специфической дегенерации клеток – смотрят под микроскопом: образование многоядерных гигантских клеток, округление клеток, очаги клеточной пролиферации.

  2. Обнаружение внутриклеточных включений – в цитоплазме или ядре (окрашивают и смотрят под микроскопом).

  3. Обнаружение специфического Аг методом иммунофлюоресценции.

  4. Положительная реакция гемадсорбции.

  5. Положительная реакция гемагглютинации.

  6. Образование бляшек – появляются обесцвеченные участки в культуре, состоящие из погибших клеток – это колонии вируса. Окрашивают красным красителем – бляшки круглые, светлые.

10. Сущность иммуноферментного метода (ифм).

В основе лежит иммунная реакция взаимодействия Аг с АТ. Они маркируются ферментами – пероксидазой или щелочной фосфатазой. После образования иммунного комплекса в систему вносят субстрат, кот-й расщепляется ферментом. Среда окрашивается в жёлто-коричневый (при использовании пероксидазы) или жёлто-зелёный цвет (при использовании фосфатазы).

Этот метод позволяет непосредственно регистрировать взаимодействие Аг с АТ. Метод высоко чувствителен (Аг достаточно 1 нг/мл).

11. Типы вирусных гепатитов.

Формы вирусных гепатитов:

  1. гепатиты с парентеральным (кровяно-контактный) мех-мом передачи – B, C, D, G, TTV. Характерно хроническое течение и вирусоносительство;

  2. гепатиты с энтеральным мех-мом передачи – A, E, F. Передаются пищевым, водным и контактным путём, не исключены гемотрансфузионный и половой пути. Такие гепатиты всегда острые, протекают благоприятно и без вирусоносительства.

12. Какие серологические реакции применяются для диагностики гриппа?

    1. Метод иммунофлюоресценции – это экспресс-диагностика. Аг светится ярко-зелёным цветом в ядре и цитоплазме клеток.

    2. ИФМ – для ранней диагностики гриппа, выявляют М-белок вируса.

    3. Р-я гемагглютинации – определяют подтип гемагглютинина (заражение куриного эмбриона).

    4. Р-я связывания комплемента – определяют типовую принадлежность вирусов (тоже при заражении куриного эмбриона).

    5. Р-я торможения гемагглютинации – определяют разновидность штамма вируса (на курином эмбрионе).

13. Какие серологические реакции применяют для диагностики вирусных инфекций?

  1. Р-я нейтрализации – основана на подавлении цитопатогенного эффекта после смешивания вируса со специфичными АТ. Неизвестный вирус смешивают с известной антисывороткой и вносят в монослой клеток. Если клетки погибли, то вирус соответствует антисыворотке.

  2. Р-я торможения гемагглютинации – применяют для идентификации вирусов, способных агглютинировать эритроциты.

  3. Прямая иммунофлюоресценция – метод быстрый. Заражённые клетки светятся.

  4. Иммуноэлектронная микроскопия – сложный и дорогой метод. Определяют различные виды вирусов.

Выявление противовирусных АТ в сыворотке:

  1. Р-я торможения гемагглютинации;

  2. Р-я связывания комплемента;

  3. Р-я иммунофлюоресценции;

  4. Иммуноферментный метод.

Выявление вирусных Аг:

  1. Иммуноферментный метод.

  2. Гибридизация ДНК.

  3. ПЦР – полимеразно-цепная р-я.

14. Какие вирусы вызывают острые кишечные заболевания?

2-е место после ОРВИ.

  1. Энтеровирусы – полиовирусы (полиомиелит), вирусы Коксаки А и В, ЕСНО-вирусы.

  2. Ротавирусы.

  3. Кишечные коронавирусы – гастроэнтерит.

  4. Калицивирусы – гастроэнтериты, гепатиты.

  5. Астровирусы - диарея, рвота.

15. Из каких этапов складывается процесс взаимодействия вируса с клеткой?

Процесс взаимодействия вируса с клеткой называется репродукцией. Выделяют её раннюю и позднюю фазы (синтез белков, сборка вириона, выход из клетки).

Ранняя фаза репродукции:

  1. Адсорбция вириона на чувствительной клетке – зависит от электрического взаимодействия частиц на поверхности вируса и клетки; а также от pH, среды, t°. В дальнейшем взаимодействие носит специфический характер. Сначала образуется единичная связь прикрепительного белка вируса с рецептором клетки – обратимая адсорбция (вирион ещё можно удалить – изменив pH, используя ультразвук). Когда образуются множественные связи – это необратимая адсорбция.

  2. Проникновение в клетку – пенетрация.

  3. «Раздевание» вириона – разрушение белковой оболочки.

Есть вирусы «голые» и «одетые». «Голые» вирусы не имеют суперкапсида – это особая оболочка поверх капсида из 2-х слоёв липидов и 1 слоя белков. Белки образуют выросты, кот-е пронизывают 2 слоя липидов. «Одетые» вирусы имеют суперкапсид.

2. Как вирус проникает в клетку?

Есть вирусы «голые» и «одетые». «Голые» вирусы не имеют суперкапсида – это особая оболочка поверх капсида из 2-х слоёв липидов и 1 слоя белков. Белки образуют выросты, кот-е пронизывают 2 слоя липидов. «Одетые» вирусы имеют суперкапсид.

«Голые» вирусы проникают в клетку путём эндоцитоза – погружение участка клеточной мембраны в месте их адсорбции. Этот процесс называется виропексис.

«Одетые» вирусы проникают в клетку путём слияния суперкапсида с клеточной мембраной при участии F-белков. Слияние происходит при кислых значениях pH.

При проникновении «голых» вирусов в клетку образуются вакуоли (эндосомы). При проникновении «одетых» вирусов в цитоплазму происходит частичное разрушение белковой структуры вирионов и модификация их нуклеопротеидов – «раздевание». Модифицированные частицы теряют некоторые св-ва.

3. Какие вакцины – для профилактики гриппа?

Разработаны методы активной и пассивной иммунопрофилактики.

Пассивная иммунизация – противогриппозный иммуноглобулин человека; готовят из крови доноров, иммунизированных гриппозными вакцинами.

Активная иммунизация – живые и инактивированные вакцины. Живые аттенуированные вакцины имеют бőльшую иммуногенность. Есть сплит-вакцины (расщеплённые – то есть вирусы обработаны детергентами). Есть субъединичные вакцины – содержат только нейраминидазу и гемагглютинин.

Убитые вакцины – эффективность 60-70%, нужна ежегодная ревакцинация.

4. Как происходит заражение вирусом гепатита в? Формы вирусных гепатитов.

Мех-м передачи: инъекционный, гемотрансфузионный, половой, вертикальный (от матери к плоду). Вирус проникает через травмированную кожу и слизистые. Естественный (половой и через предметы обихода) путь передачи – 30-35% и растёт. Вирус гепатита В гематогенно заносится в печень и размножается в гепатоцитах. Через 40-180 суток вирус выделяют из крови, спермы, мочи, фекалий и секрета носоглотки. 7-10% инфицированных становятся хроническими носителями.

Формы вирусных гепатитов:

  1. гепатиты с парентеральным (кровяно-контактный) мех-мом передачи – B, C, D, G, TTV;

  2. гепатиты с энтеральным мех-мом передачи – A, E, F. Передаются пищевым, водным и контактным путём, не исключены гемотрансфузионный и половой пути. Такие гепатиты всегда острые, протекают благоприятно и без вирусоносительства.

5. С какой целью производят фаготипирование бактерий (стафилококков)?

Бактериофаг – вирус бактерий, паразитирующий только на живой микробной клетке. Существуют вирулентные и умеренные фаги. Вирулентные фаги вызывают лизис бактерии и синтез новых фагов. Умеренные фаги не лизируют бактерию, их ДНК включается в хромосому бактерии и при делении передаётся неограниченному числу потомков – это лизогения.

Большинство фагов видоспецифичны, но есть фаги, способные поражать отдельные варианты одного и того же вида бактерий. Это используют для фаготипирования внутри вида. Бактериофаги применяют при эпидемиологических исследованиях, выявляющих резервуар инфекции. По содержанию бактериофагов, например, в воде судят о наличии в ней патогенных бактерий. Выделение бактерий одного фаготипа от разных больных указывает на общий источник заражения. Бактериофаги применяют с лечебной целью, например, стафилококковые.

Прионы – инфекционные белковые частицы, приводящие к развитию летальных неврологических заболеваний.

Вирусы – облигатные паразиты, так как не могут существовать без клетки-хозяина, потому что его репродукция (увеличение численности вирусных частиц) возможна только в клетке хозяина. Вирусы не способны к росту и делению.