9. Определение желчных кислот (с метиленовым синим)
Пробу выполняют в двух пробирках: в одну - контрольную - вносили 2 мл дистиллированной воды, в другую - 2 мл исследуемой мочи. В обе пробирки добавляли по одной капле 0,2%-го раствора метиленового синего. При положительной реакции в пробирке с мочой появляется зеленое окрашивание.
10. Исследование осадка мочи
В центрифужную пробирку вносили 10-15 мл мочи, центрифугируют 5-7 минут при 1500-2000 об/мин, оценивают осадок по цвету и компактности. Центрифужную пробирку быстрым движением наклоняли, чтобы слить надосадочную жидкость, не нарушив осадка. Берут пипетку с тонким оттянутым концом и резиновым баллоном, осторожно суспендировали осадок в небольшом количестве оставшейся мочи, помещают каплю на предметное стекло и осторожно накрывают ее покровным стеклом. В приготовленном препарате недопустимы пузырьки воздуха, а жидкость не должна выходить за пределы покровного стекла. Препарат микроскопировали при опущенном конденсоре, исследовать начинали при малом увеличении (объектив х 8, окуляр х 7), затем дифференцируют элементы осадка при большом увеличении (объектив х 40, окуляр х 7). Просматривали несколько полей зрения и определяют ориентировочно среднее количество эритроцитов, лейкоцитов, эпителиальных клеток, цилиндров и т.д. в поле зрения при 56-кратном увеличении микроскопа.
Лабораторное исследование системы крови
1. Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) методом Панченкова
В градуированный на 100 делений капилляр Панченкова набирали до метки «Р» (деление 50) 5%-й раствор цитрата натрия и переносят его на часовое стекло. Затем в этот же капилляр набирали дважды кровь до метки «К» и оба раза выдувают его на это же часовое стекло. Кровь, тщательно перемешанную с раствором цитрата натрия, вновь набирали в капилляр до метки «К». Капилляр ставили в штатив строго вертикально. СОЭ учитывали через 1 ч.
2. Определение содержания гемоглобина в крови гематиновым методом (по Сали)
В градуированную пробирку гемометра Сали вносили глазной пипеткой до метки «2» 0,1 н. раствор соляной кислоты. Капиллярной пипеткой набирали 0,02 мл крови, кончик пипетки снаружи вытирали ватой и, не вызывая образования пены, кровь выдувают на дно пробирки. Чтобы удалить остатки крови, пипетку 2-3 раза промывали раствором соляной кислоты. Содержимое пробирки перемешивали и выдерживают 5 минут. Смесь за это время приобретает коричневую окраску вследствие образования солянокислого гематина. Добавляли по каплям дистиллированную воду, помешивая стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет жидкости в пробирке не станет таким же, как цвет стандарта. Количество гемоглобина (г/100 мл крови) устанавливали по делению шкалы, с которым совпадает уровень жидкости. Для пересчета в г/л умножали результат на коэффициент 10.
3. Подсчет количества эритроцитов, пробирочный метод по Н.М. Николаеву
В пробирку Флоринского вносили 4 мл 0.85%-го или 3%-го раствора NaCl, затем добавляли 0.02 мл крови пипеткой от гемометра Сали и смешивают. Получили разведение 1:200. Пастеровской пипеткой набирали разбавленную кровь и заряжают счетную камеру Горяева. Наносили каплю на среднюю полосу камеры у края притёртого покровного стекла, не касаясь его. Эритроциты подсчитывали через 2-3 минуты после заполнения камеры, под микроскопом (объектив Ч8, окуляр Ч15) при затемнённом поле (прикрывают диафрагму или опускают конденсор). Подсчет начинали с левого верхнего большого квадрата (разделённого на 16 маленьких квадратов), затем в 4-х больших квадратах, расположенных по диагонали, т.е. всего в 5-ти больших квадратах.
Количество эритроцитов определяли по формулам: Хэ1=А*104; Хэ2=А*1010, где
Хэ1 - количество эритроцитов в 1 мкл крови;
Хэ2 - количество эритроцитов в 1 л крови;
А - число эритроцитов в 5-ти больших квадратах.
4. Подсчёт количества лейкоцитов, меланжерный метод
В меланжер набирали кровь до метки «0,5», затем до метки «11» - жидкость Тюрка. Встряхивают 1-2 минуты. Получили разведение 1: 20. Выпускают три капли на вату, следующей заряжают счетную камеру. Через 2-3 минуты, когда лейкоциты осядут на дно камеры, начали подсчитывать клетки под микроскопом (объектив х 8, окуляр х 15) при затемненном поле зрения в 100 больших квадратах, не имеющих дополнительных линий и расположенных по всей площади сетки Горяева группами по четыре квадрата.
Количество лейкоцитов определяли по формулам:
Хл1 = А * 50,
где Хл1 - количество лейкоцитов в 1 мкл крови;
А - количество лейкоцитов в 100 больших квадратах.
Для пересчета на 1 л крови используют формулу
Определение цветового показателя
Цветовой показатель отражает степень насыщенности эритроцита гемоглобином, его определяют по формуле:
биогеоценоз скот рогатый клинический
ЦП = Нb2 * Е1/E2 * Hb1,
ЦП - цветовой показатель;
Hb1 - средняя концентрация гемоглобина в норме, г/л;
Hb2 - концентрация гемоглобина у исследуемого животного, г/л;
Е1 - среднее количество эритроцитов в норме, г/л;
Е2 - количество эритроцитов у исследуемого животного, г/л.
5. Определение лейкограммы (лейкоцитарной формулы)
На предварительно подготовленном обезжиренном стекле готовят мазок из свежевзятой (нативной) или стабилизированной крови. Для фиксации можно использовать метиловый спирт (5 минут), 95%-й этиловый спирт (30 минут), смесь этилового спирта и эфира (1:1), денатурированный спирт (30 минут). После фиксации мазки высушивали, затем окрашивают методом Романовского-Гимза. Фабричный раствор кра-ки Романовского-Гимза разбавляли дистиллированной водой из расчета 2 капли краски на 1 мл воды. Время окрашивания составляет 15-30 минут в зависимости от температуры в помещении (чем она ниже, тем дольше нужно окрашивать).
Мы выводили лейкоцитарную формулу по однопольному методу. Однопольный метод (по Мухину): подсчитывают 100 лейкоцитов в средней части мазка, проходя поперек его от одного края до другого и обратно.
Определение абсолютного количества отдельных видов лейкоцитов в 1 л крови. Сначала необходимо подсчитать лейкоциты в 1 мл крови, пользуясь методикой подсчета в камере Горяева, и вывести лейкограмму. Затем исходя из того, что в 1 л крови у на содержится 5.9*109 лейкоцитов, мы представляли, что это 100%, затем для подсчёта отдельных фракций лейкоцитов мы составляли пропорции для каждой фракции лейкоцитов, где 5,9*109-100%, а Х-% отдельной фракции лейкоцитов.
После проведения диспансеризации сухостойного крупного рогатого скота в учебно-опытном хозяйстве «Тулинсоке» можно сделать следующие выводы:
1) Условия содержания не соответствуют зоогигиеническим нормам (влажность воздуха превышена, недостаточность подстилки, близкое расположение навозных желобов и отсутствие на некоторых защитных решеток, загрязнённость полов и нарушение их целостности, конденсат на стенках и потолке, с наростами плесени);
2) Состояния здоровья исследуемого стада находится в удовлетворительном состоянии;
3) У исследуемого стада была обнаружен изварщенный аппетит (облизывание стальных предметов), что свидетельствует о недостатке соли в рационе;
4) При анализе корма не было обнаружено нарушений в его качестве;
5) У всех коров исследуемой группы был диагностирован ринит.
6) Высокий уровень загрязненности шерстного покрова землей, каловыми массам, мочей и так же её повышенная влажность
Рекомендации:
1) Нормализация уровня влажности в помещении;
2) Устранение загрязненности стен и пола;
3) Увеличение массы подстилок;
4) Установка «Лизунов»;
5) Витаминизация всего поголовья;
6) Увеличение площади стойла на 1 голову;
7) Установка тепловой завесы.