Особенности изготовления и сохранения паразитологических препаратов
Гильмутдинова А.Р., Климова Е.С., Бабинцева Т.В.,
ФГБОУ ВО Ижевская ГСХА
Введение
При изучении такой учебной дисциплины, как паразитология, важной частью учебного процесса является ознакомление студентов с микропрепаратами. Однако зачастую кабинеты недостаточно оснащены ими, или их качество не позволяет получить четкие представления об изучаемых объектах. Достаточно часто можно заметить, что со временем препараты обесцвечиваются, а их длительное и не всегда бережное использование приводит к появлению трещин и сколов. В то же время, обновление и пополнение имеющегося ассортимента микропрепаратов за счет препаратов промышленного производства не всегда является возможным ввиду их дороговизны, а также элементарного отсутствия необходимого материала на рынке. В связи с этим мы решили самостоятельно испробовать различные методики изготовления микропрепаратов по паразитологии. Трудность заключается в том, что в свободном доступе информации по данной теме крайне мало. Именно поэтому мы решили опробовать существующие методики, и, по возможности, усовершенствовать их.
Цель нашей работы заключалась в освоении различных техник изготовления микропрепаратов. Для достижения поставленной цели нам было необходимо решить следующие задачи: изучить методы выявления яиц различных возбудителей из проб; подобрать условия для накопления и длительного хранения яиц; изготовить фиксированные неокрашенные/окрашенные микропрепараты; освоить технику заливки микропрепаратов глицерин-желатином.
Выявления и накопление яиц различных возбудителей из проб фекалий [2]
В своей работе для выявления яиц гельминтов [1] мы проводили гельминтоовоскопию проб комбинированным методом Дарлинга. Накопление яиц гельминтов необходимо как для непосредственного изучения их студентами, так и последующего изготовления из них постоянных препаратов. Большим плюсом накопления яиц в глицерине является то, что яйца не изменяют своей структуры, что очень важно для корректного изучения материала. Для приготовления постоянных препаратов свежевыделенные яйца не пригодны. Они должны быть предварительно выдержаны в глицерине. Согласно данной методики, выделенные яйца помещают в 50 % водный раствор глицерина, в котором выдерживают не менее 7-10 дней до приготовления препаратов. Сохранение их в глицерине более длительное время (месяцы и даже год) не отражается на структуре яиц. Однако в ней не указано максимальное количество глицерина, в которое должны быть помещены яйца, вследствие чего нами было последовательно проведено 2 опыта по накоплению паразитологического материала. В первом опыте, яйца аскаридий, выделенные из проб свиньи, вместе с поверхностной пленкой были помещены в пенициллиновый флакончик, заполненный 5 мл 50 % глицерина. Впоследствии, автоматической пипеткой, из него было взято 3 пробы: с поверхности, из толщи и со дна. Единичное яйцо было обнаружено лишь в пробе со дна флакончика.
Для усовершенствования методики был проведен 2-й опыт. Была взята проба от свиньи, с повышенной концентрацией яиц власоглавов. Как и в прошлый раз, мы собрали поверхностную пленку, однако, на этот раз поместили ее во флакончик меньшего объема, в 1 мл 50 % глицерина. В дальнейшем оттуда автоматической пипеткой было также взято 3 пробы: с поверхности со дна и из толщи глицерина после перемешивания слоев. Яйца, были найдены во всех трех пробах, однако их количество было наибольшим в пробе с поверхности, наименьшее же количество яиц наблюдалось в пробе со дна флакончика.
Изготовление постоянных неокрашенных препаратов из круглых червей рода Toxocara [2]
Препараты из взрослых особей токсокар были приготовлены 2 способами:
1) по методике изготовления постоянных неокрашенных фиксированных препаратов (Рис. 1);
2) по методике изготовления постоянных фиксированных препаратов, заключенных в глицерин- желатину (Рис. 1).
Для фиксации членики были расположены на предметном стекле и погружены в 70° спирт на 24 часа для фиксации. По окончании фиксации токсокар извлекают из спирта и осторожно снимают с поверхности стекол препаровальной иглой в 70 % спирт. Затем производят обезвоживание в спиртах восходящей крепости, помещая материал из 70° в 80°, в 96° и еще раз в 96° спирт, выдерживая в каждом из них по 5 мин. После обезвоживания в спиртах препараты должны быть просветлены. С этой целью препараты последовательно проводят через карбол-ксилол, ксилол и еще раз ксилол. В указанных жидкостях препараты должны находиться не более одной минуты в каждой. Затем препараты заключают в канадский бальзам.
Для изготовления препаратов, заключенных в глицерин-желатину, гельминтов помещают в воду на 3 ч для промывания, затем их последовательно проводят через смеси спирта разной крепости и глицерина по следующей схеме:
1-я смесь-20 мл 40° спирта и 2 мл глицерина
2-я смесь-20 мл 50° спирта и 5 мл глицерина
3-я смесь-20 мл 60° спирта и 6 мл глицерина
4-я смесь-20 мл 70° спирта и 10 мл глицерина
В каждой из указанных смесей гельминты выдерживаются по 24 часа. Сосуд с последней смесью через 24 часа приоткрывают для того, чтобы спирт испарился и откуда их извлекают по одному экземпляру на предметное стекло. На расправленный гельминт наносят расплавленную глицерин-желатину, осторожно накрывают покровным стеклом и слегка придавливают.
Рис. 3. Toxocara. изготовленные по 1-й (1) и 2-й (2) методике
Стоит отметить, что препараты, приготовленные проводкой через спирт, позволяют подробно рассмотреть кутикулу паразита, в то время как у токсокар из спирт-глицерина хорошо просматривается содержимое.